【摘要】 目的初步筛选出最适合白木香胚愈伤组织诱导的培养基，为白木香胚的继代培养和植物再生研究打下基础，为展开白木香的种质保存和继代培养的研究提供参考依据。方法通过各种激素成分的正交实验设计，以白木香成熟胚为材料，诱导愈伤组织和丛芽。结果发现以1/2ms0：1/2ms培养基的诱导率最高，为100％；而诱导效果则以miz：ms+iaa 0.1 mg/l+zt 0.5 mg/l培养基为最佳。结论综合考虑各种因素，以miz培养基为最适合诱导白木香胚愈伤组织的培养基。
【关键词】 白木香； 成熟胚； 丛芽
abstract：objectiveto select the fittest culture mediums for inducing calluses from embryo of aquilaria sinensis (lour.) gilg.methodsthrough orthogonal design for the component of several kinds of hormone, the embryo was cultured to induced calluses in eleven culture mediums. resultsinduction rate on 1/2ms0 culture medium was the highest, coming up to 100%, while the best effect was on miz culture medium. conclusionmiz culture medium was most suitable for inducing calluses from embryo of aquilaria sinensis (lour.) gilg.
key words：aquilaria senensis (lour.) gilg; culture mediums; calluses
白木香［1］aquilaria sinensis (lour.) gilg又名土沉香，来源于瑞香科沉香属植物。WWW.11665.cOm白木香是我国特有的药用植物，也是我国生产中药沉香的唯一植物资源［1］。白木香以含有带棕黑色树脂的干燥心材入药，具行气止痛、温中止呕、纳气平喘功效，用于治疗胸腹胀痛、胃寒呕吐、心腹疼痛、禁口毒痢、大肠虚闭、气逆、喘息等症。沉香是中国、日本、印度及其它东南亚国家的传统名贵药材和名贵天然香料，也是广东道地药材，十大广药之一［1］。
近年来，由于人们对沉香的大量采挖，白木香原始林遭到严重破坏，白木香野生资源量不断减少，被列为国家二级保护野生植物，已载入《中国植物红皮书》和《广东省珍稀濒危植物图谱》。白木香种子为顽拗型，含油率高，极易变质及丧失萌发力，天然更新能力弱。白木香的繁殖方式主要为种子繁殖。随采随播的发芽率可高达80％以上；贮存15 d后，发芽率降至50％以下；贮存3个月的种子完全丧失发芽率［2］。本研究通过组织培养技术，探讨白木香离体再生的不同培养条件，以期为白木香种质资源的保存和优质种苗的离体快繁生产及选育奠定基础。
1 材料与仪器
1.1 材料
为采自电白县白木香种植基地新鲜的成熟种子。
1.2 培养基
以ms或1/2ms为基本培养基，并在其基础上添加不同种类、不同剂量的生长激素、无机盐等。表1 不同培养基配方（略）
所有培养基均加入3％的蔗糖和0.75％的琼脂条固化，ph值为5.8±0.1。而后将配制好的培养基分装于玻璃瓶中，每瓶约10 ml，进行高压灭菌。
1.3 接种方法
将种子用洗洁精轻轻荡洗一遍后，在自来水下流动冲洗20～30 min，材料经上述处理后，在无菌条件下，用75％的酒精浸泡消毒8～10 s，然后置于0.1％的升汞溶液中灭菌消毒5～8 min，再用无菌水洗涤7～10次。在接种时，将白木香种子的种壳及附属物剖去，取出胚，接种到培养基中，每瓶培养基接种3～4个胚。
1.4 培养条件
置于培养室中进行培养，光照强度2 500 lx，每日光照8～10h，培养温度（26±0.2）℃。
2 结果
实验操作如上所述，60 d后结果记录见表2。表2 不同培养基对白木香胚愈伤组织诱导率的影响（略）
由表2可以看出，1/2ms0培养基的愈伤组织诱导率最高（100％），其次为1/2mb0.2和miz培养基（≈90％）；1/2mb0.5、mb0.5及mb0.05等培养基的诱导率一般（60％～75％）；而mbd、1/2mbn、mbn、ib1和1/2mki等培养基的诱导率极低（约为0），不适于白木香胚愈伤组织的诱导。生长在1/2ms0上胚的愈伤组织颜色浅绿，质地较为致密，出愈率高（100％），但是生长速度慢，而且愈伤组织在生长的过程中容易发生褐化的现象，导致愈伤组织的出苗率不高（54％）。1/2mb0.2培养基上的愈伤组织颜色较绿，质地酥脆，玻璃化现象比较严重，因此，愈伤组织的出苗率也不高（43.48％）。而生长在miz培养基上的愈伤组织颜色深绿，质地致密，不容易褐化也不容易玻璃化，出苗率较高（87.64％）。1/2mb0.5、mb0.5愈伤组织为红绿色，生长能力比较强，亦不会导致褐化的现象，因此，出苗率也比较高（86.67%和85.07%）。胚的愈伤组织情况和出苗情况见图1～4。
3 结论
1/2ms0培养基配方为1/2ms，不加任何生长激素，而愈伤组织的诱导率高达100％。1/2mb0.2，miz等培养基生长激素含量较低，其诱导率大于80％。而其他培养基如1/2mb0.05，mb0.5，mbn0.05等，生长激素浓度偏高，则诱导率在60％～75％之间。在mbd、1/2mbn和mbn等培养基中的诱导率几乎为0，说明2，4－d及naa这些激素的存在，并不适合愈伤组织的诱导，这与兰芹英［2］等的研究结果有所出入，其研究指出胚轴在1/2mbn的诱导率为54.17％，而在mbn中的诱导率为80％。
在miz培养基中，添加了玉米素（zt），愈伤组织诱导率高（89％），而且愈伤组织质地致密，颜色鲜绿，出苗数多（87.64％）。在1/2ms0培养基中，诱导率虽然极高（100％），但其愈伤组织易褐化，而在1/2mb0.2培养基中愈伤组织则易玻璃化。1/2mb0.5，mb0.5及mb0.05培养基的出苗率虽然也比较高（＞70％），但是由于其愈伤组织的出愈率不高（＜75％），因此，也不是诱导白木香胚愈伤组织的理想培养基。而在其他培养基上形成的愈伤组织质地都较疏松，而且出苗的数量较少。综上所述，添加了玉米素（zt）的miz培养基，从出愈率，愈伤组织的情况和出苗率来考察，是在本实验所采用的众多培养基中，效果最好，最适合用于白木香胚愈伤组织诱导的培养基。
关于白木香的组织培养，叶勤法［3］曾用白木香嫩枝的叶片和茎段诱导愈伤组织，产生不定芽，再进行生根诱导，形成完整植株。兰芹英等［4］曾对白木香成熟胚的组织培养及植株再生进行研究，结果表明，白木香胚轴接种在ms + ba 0.1 mg/l + naa 0.01 mg/l和1/2ms + ba 0.1 mg/l + naa 0.01 mg/l培养基上，愈伤组织诱导率分别为80.00％ 和83.33％。2，4-d2 mg／l加ba0.5～2 mg／l和zt1 mg／l加1aa0．1 mg／l有利于子叶诱导愈伤组织，诱导率为100％ 。1/2ms + ba 2 mg/l + naa 0.5 mg/l + 蔗糖3％有利丛芽的诱导，但苗易玻璃化，而1/2ms + kt 2 mg/l + laa 0.02mg/l对侧芽的诱导和生长较有利。杜勤等［5］探讨了不同外植体、光照条件、激素对诱导白木香愈伤组织产生的影响。本实验在前人研究的基础上，通过各种激素成分的正交实验设计，以白木香成熟胚为材料，诱导出愈伤组织和丛芽，从而筛选出适宜白木香丛芽诱导的最佳配方组合。
本实验初步筛选出最适合白木香胚愈伤组织诱导的培养基，为白木香胚的继代培养和植物再生研究打下了很好的基础。同时，为今后展开白木香的种质保存和继代培养的研究提供了参考依据。
【参考文献】
［1］林伟强, 贺立静, 谢正生. 一种值得推广的优良园林树种——白木香［j］.广东园林，2002，4:38.
［2］刘军民，徐鸿华. 国产沉香研究进展［j］.中药材，2005，28(7): 627.
［3］叶勤法, 戚树源.土沉香愈伤组织培养及植株再生(简报)［j］.热带亚热带植物学报，1998，6(2): 172.
［4］兰芹英，方春妍. 土沉香成熟胚的组织培养及植株再生［j］. 广西农业生物科学，2001，20(3): 231.
［5］杜勤，王振华.白木香组织培养的初步研究［j］.中国中药杂志，2001，26(10):670.
