【摘要】 目的探讨六味地黄丸对乙酸胃溃疡的辅助治疗作用及机制。方法制备乙酸诱发大鼠胃溃疡模型，大鼠随机分为5组(正常对照组、模型对照组、六味地黄丸组、雷尼替丁组、六味地黄丸加雷尼替丁组)，运用单向免疫扩散法检测血清iga、igg、igm含量，elisa法检测血清白细胞介素-2(il-2)的变化，并通过形态学方法计算溃疡指数和抑制率。 结果在细胞免疫方面：模型对照组il-2含量显著低于正常对照组，药物治疗的3组il-2含量显著升高，il-2的水平，六味地黄丸加雷尼替丁组高于六味地黄丸组高于雷尼替丁组。在体液免疫方面：模型对照组、正常对照组和雷尼替丁组，血清免疫球蛋白iga，igg，igm含量无显著差异，六味地黄丸明显提高iga，igm含量，且igg升高更为显著;在治疗效果方面：药物治疗的3组，溃疡指数明显下降，且六味地黄丸加雷尼替丁组优于雷尼替丁组优于六味地黄丸组。结论制酸剂在对胃溃疡的治疗作用优于六味地黄丸，但是六味地黄丸通过提高细胞免疫和体液免疫水平，对大鼠乙酸胃溃疡具有治疗作用，在联合抗酸药物治疗胃溃疡中，对于提高疗效有一定的辅助作用。
【关键词】 六味地黄丸; 胃溃疡; 免疫球蛋白; 白细胞介素-2; 中西医结合疗法
abstract：objectiveto explore the therapeutic effect and mechanism of liuweidihuang pills.methodsthe rats were randomly divided into 5 groups:a(normal control group), b(gastric ulcer group induced by acetic acid), c(ranitidine group), d(liuweidihuang pills group)and e(ranitidine cooperating with liuweidihuang pills group). determine the expression of immunoglobulin by sds-page technique, change of il-2 by elisa, and examine the index of ulcer. resultsin cellular immunity aspect：the level of il-2 in serum of b group was significantly less than a group, il-2 was increased by pharmacological treatment, group e was more remarkable than c and d groups. in human immunity aspect：compared with a group, groups b and c had no statistic difference in the expression of immunoglobulin (iga，igg，igm).by treatment of liuweidihuang pills, iga and igm were significantly higher than above three groups, and igg elevated more remarkably. in therapeutic result aspect: index of ulcer was decreased significantly in pharmacological treatment groups (c，d，e ), and therapeutic effect of e group was superior to c and d groups, and c group was superior to d group. conclusionranitidine is superior to liuweidihuang pills in therapeutic effect of gastric ulcer, but liuweidihuang pills can cure gastric ulcer in rats by increased immunologic function, by cooperating with ranitidine, liuweidihuang pills has certain auxiliary function to therapeutic effect of gastric ulcer.
key words：liuweidihuang pills; gastric ulcer; immunoglobulin; il-2; chinese traditional medicine
抑制胃酸分泌是最常用的促进溃疡愈合手段，尽管h2 受体拮抗剂及质子泵抑制剂使治愈率明显提高，但病情容易反复，难以痊愈。wWW.11665.Com消化性溃疡中医辨证多有不同程度的脾气亏损，导致患者机体免疫功能发生障碍，处于相对抑制状态[1]。大量研究表明，六味地黄丸具有补益脾胃的功效，对机体免疫系统具有明显的调节作用[2]。因此，本实验据此采用在西药抗酸药治疗方案的基础上，辨证加服中药六味地黄丸，观察六味地黄丸对大鼠乙酸胃溃疡模型的治疗作用，探索其辅助抗酸药物治疗胃溃疡的机理。
1 材料
sd大鼠30只，雌雄各半，体重(180±20)g，由浙江大学实验动物中心提供;六味地黄，河南省宛西制药股份有限公司产品;雷尼替丁胶囊，杭州民生制药有限公司产品;免疫球蛋白试剂盒，四川迈克科技有限责任公司产品;il-2 elisa试剂盒为rd公司产品。
2 方法
2.1 动物模型建立及分组取大鼠24只，参照okabe乙酸诱导法[3]，大鼠禁食16 h，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，剑突下作腹正中切口，分离出胃，以内径4 mm的玻璃管按在胃前壁胃小弯角切迹下方约5 mm处的浆膜面上，向玻璃管内注入100%乙酸0.1 ml，持续1 min，用生理盐水棉签擦拭2次，轻拉大网膜覆盖在乙酸涂抹面，将胃还纳入腹腔，缝合腹壁。造模3d后，随机分为4组，每组6只：模型对照组(以生理盐水等量灌服)、六味地黄丸组(20g·kg-1灌服)、雷尼替丁组(30 mg·kg-1灌服)和六味地黄丸加雷尼替丁组(六味地黄丸20 g·kg-1加雷尼替丁30 mg·kg-1灌服)。另取6只未造模大鼠作为正常对照组，予等量生理盐水，各组动物均每d给药，7 d后提取标本。
2.2 观察指标
2.2.1 溃疡指数和抑制率分别结扎贲门、幽门端后取胃，向胃内注射中性甲醛溶液固定胃壁15 min，然后沿胃大弯剪开，测定溃疡指数和抑制率。以溃疡面积作为溃疡指数，溃疡面积(s)=1/4×溃疡长径(dl)×短径(ds)×π;抑制率(%)=(对照组损伤指数-给药组损伤指数)/对照组损伤指数×100%。
2.2.2 血清免疫球蛋白及il-2含量的检测大鼠眼眶采血2 ml，静置30 min，3 000 r/min离心30 min，取血清放入20℃冰箱保存待测。采用单向免疫扩散法检测血清iga，igg，igm含量，elisa法检测血清il-2的变化。
2.3 统计学处理 应用spss统计分析软件对数据进行统计学分析，数据均以±s表示，做差异的显著性分析，p<0.05为有统计学差异。
3 结果
3.1 六味地黄丸对各组大鼠溃疡指数及溃疡抑制率的影响 肉眼观察，正常对照组大鼠胃粘膜光滑，未见充血、水肿及溃疡灶;模型对照组，溃疡灶与溃疡边缘有明显分界，侵犯粘膜并穿越粘膜下层或深达肌层，溃疡灶表面覆盖白苔，边缘充血水肿，呈典型的胃溃疡病理改变(图1a)。六味地黄丸组(图1b)、雷尼替丁组(图1c)和六味地黄丸加雷尼替丁组(图1d)比模型对照组溃疡指数均明显降低(p<0.01);六味地黄丸加雷尼替丁组的疗效优于六味地黄丸组或雷尼替丁组(p<0.01);雷尼替丁组疗效优于六味地黄丸组(p<0.05)。结果见表1。表1 各组大鼠溃疡指数和溃疡抑制率
3.2 六味地黄丸对各组大鼠血清免疫球蛋白及il-2的影响实验结果显示，正常对照组、模型对照组和雷尼替丁组间血清免疫球蛋白iga，igg，igm差异无显著意义(p>0.05);六味地黄丸组、六味地黄丸加雷尼替丁组与上述3组相比较，iga、igm含量明显升高(p<0.05)，igg升高更为显著(p<0.01);六味地黄丸组与六味地黄丸加雷尼替丁组比较无显著差异(p>0.05)。模型对照组il-2含量显著低于正常对照组(p<0.01);药物治疗的3组il-2含量虽然低于正常对照组(p<0.01或p<0.05)，但是明显高于模型对照组，其中以六味地黄丸组和六味地黄丸加雷尼替丁组升高更为显著(p<0.01);六味地黄丸组与六味地黄丸加雷尼替丁组比较有显著差异(p<0.05)。结果见表2。表2 各组大鼠血清免疫球蛋白及il-2含量(±s)
与正常对照组比较，ap <0.01，bp <0.05;与模型对照组比较，cp <0.01，dp <0.05;与雷尼替丁组比较，ep <0.01，fp <0.05; 与六味地黄丸组比较，gp <0.01，hp <0.05;n=6
4 讨论
制酸剂在临床上是治疗胃溃疡的常用药物，但是在溃疡病的发生过程中，患者机体细胞免疫功能发生障碍，表现为免疫功能抑制、局部防御功能减弱，易引起胃酸、胃蛋白酶和幽门螺旋杆菌等的侵袭，发生溃疡[1]。消化性溃疡中医辨证多属脾虚肝郁、气滞血瘀，溃疡患者均有不同程度的脾气亏损，机体免疫功能紊乱，脾虚胃溃疡的大鼠动物模型发现胃粘膜局部免疫反应功能低下[2]。六味地黄丸具有“补肾为主，兼补肝脾，三补三泄，补泄结合”的功效，中医的“肾”功能与下丘脑-垂体-肾上腺功能密切相关，与现代医学的神经-内分泌-免疫调节网络理论极其相似[4]。同时大量的研究表明，六味地黄丸对细胞免疫和体液免疫均具有促进和调节作用[5，6]。因此以六味地黄丸辅助治疗胃溃疡符合中医辨证用药的思路。
人体的免疫包括细胞免疫和体液免疫，细胞免疫是以t细胞为介导的免疫反应，il-2是调节机体免疫功能最主要的细胞因子之一，il-2参与调节t细胞的两个不同亚群th1/th2细胞间的平衡[7]，促进t细胞的活化和增殖，从而增强免疫功能。临床研究表明胃溃疡患者血清il-2水平显著低于正常人，提示患者t细胞增殖分化受到抑制，细胞免疫功能低下[8]。本研究结果显示，大鼠模型对照组il-2含量显著低于正常，与以上研究结果相一致。六味地黄丸及六味地黄丸辅助抗酸药药物治疗后，il-2含量明显升高，虽其数值未能回复至正常水平，但仍然可以表明六味地黄丸具有改善机体免疫功能的作用。体液免疫抗体主要存在于血清中的丙种球蛋白，包括iga，igg，igm等，免疫球蛋白可以与免疫复合物或感染抗原作用形成不溶物质，引起单核吞噬细胞系统的消除作用;充当活化补体成分的受体，防止补体介导性免疫损伤;增强机体抵抗力，提高耐药菌的杀菌比例[9]。临床研究表明，胃溃疡患者血清免疫球蛋白含量与正常人相比无明显变化[10]，但是应用免疫球蛋白静脉注射，对胃炎及胃十二指肠炎溃疡患者具有疗效[9]。在本实验中，正常对照组、模型对照组和雷尼替丁组间血清免疫球蛋白iga，igg，igm含量无显著差异，六味地黄丸能够明显升高iga，igg，igm含量，其中igg的升高最为显著，而雷尼替丁对血清免疫球蛋白iga，igg，igm含量无明显影响。因此，六味地黄丸通过提高il-2、免疫球蛋白iga，igg，igm含量，提高细胞免疫和体液免疫水平、调节机体免疫平衡，这可能是其治疗胃溃疡机制的一个重要方面。
综上所述，制酸剂在大鼠乙酸胃溃疡的治疗中仍占主导地位，六味地黄丸通过提高细胞免疫和体液免疫水平，对大鼠乙酸胃溃疡具有治疗作用，在联合抗酸药药物治疗胃溃疡中，对于提高疗效有一定的辅助作用。本研究应用中医辨证施治传统理论，通过中西医结合的方法，探明六味地黄丸辅助抗酸药药物治疗胃溃疡的作用和机理，在促进溃疡愈合的治疗中弥补了西药的不足。但是六味地黄丸通过何种途径提高血清中il-2、免疫球蛋白iga，igg，igm的水平，其在剂量、疗程、优化完善方剂及治疗方案等方面还有待进一步深入的研究。
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