作者：赵佳, 沈霖, 范恒 朱锐
【摘要】 目的观察复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者肠黏膜k基因结合核转录因子（nf-κb）及信号转导和转录激活因子6（stat6）活化的影响，探讨复方苦参结肠溶胶囊的 治疗 该病的可能机制。方法将34例溃疡性结肠炎患者随机分为两组，中药组22例使用复方苦参结肠溶胶囊治疗，西药组12例使用柳氮磺吡啶治疗。两组均治疗8周。观察比较两组治疗前后的症状、体征、大便常规、结肠镜和病理检查，并采用免疫组化方法检测两组治疗前后的nf-κbp65及stat6的表达情况。结果中药组临床疗效总有效率为100 %，西药组为75 %（p＜0.05）；中药组结肠黏膜病变疗效总有效率为90.9 %，西药组为75 %（p＜0.05）。两组患者治疗后nf-κbp65及stat6的表达均降低，且中药组优于西药组（p＜0.05）。结论复方苦参结肠溶胶囊抑制nf-κbp65及stat6的活化及表达可能是其治疗溃疡性结肠炎的疗效机制之一。
【关键词】 结肠炎 溃疡性 复方苦参结肠溶胶囊 k基因结合核转录因子 信号转导和转录激活因子6
abstract：objectiveto observe the effect of csfjc on expression of nf-κb and stat6 in the intestinal mucosa of patients with ulcerative colitis and to study the possible mechanism. methods34 patients with ulcerative colitis were randomly divided into a tradional chinese medicine (tcm) group (n=22) treated by csfjc, and a western medicine (wm) group (n=12) treated by sulfasalazine tablets,both of them were treated for 8 weeks. before and after the treatment, the symptoms, the physical sign, the routine stool test, the colonoscope and pathological examination in the two groups were observed and contrasted. moreover, the expressions of nf-κb and stat6 were detected with immunohistochemistry in the two groups. resultsthe total effective rate of therapeutic effect was 100 % in the tcm group and 75 % in the wm group, and the total effective rate of colonic mucosa lesion was 90.9 % in the tcm group and 75 % in the wm group, and there were both significant differences (p＜0.05). after the treatment, expressions of nf-κb and stat6 in patients of the two groups were decreased, however, the results of the tcm group were better than the results of the wm group, with significant difference (p＜0.05).conclusioncsfjc can inhibit the activation and expression of nf-κb and stat6, which may be one of the mechanisms for treatment of ulcerative colitis.
key words：colitis, ulcerative; compound sophorae flavescentis jiechangrong capsule; nf -κb; stat6
溃疡性结肠炎是一种病因尚不十分清楚的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病，病变主要限于大肠黏膜与黏膜下层，临床表现为腹泻、粘液脓血便、腹痛，病情轻重不等，多呈反复发作的慢性病程［1］。wWw.11665.cOm前期研究作者采用复方苦参结肠溶胶囊治疗本病，疗效显著［2］。在此基础上，本研究重点观察复方苦参结肠溶胶囊对溃疡性结肠炎患者肠黏膜k基因结合核转录因子（nf-κb）及信号转导和转录激活因子6（stat6）表达的影响，并探讨其疗效机理。现报道如下。
1 临床资料
1.1 病例纳入及排除病例的选择参照中华医学会消化分会2000年成都全国炎症性肠病学术研讨会“炎症病诊断治疗规范的建议”的标准进行。34例溃疡性结肠炎患者均为2005-07～2006-05间在武汉协和 医院 中医科门诊就诊的患者。全部病例均有持续性或反复发作的腹泻、腹痛、粘液便或脓血便的临床症状，且中医辨证为湿热内蕴证。结肠镜检查可见黏膜血管纹理模糊、紊乱、充血、水肿、出血及脓性分泌物附着。病变明显处可见弥漫性多发糜烂或溃疡。病理检查可见固有膜内有弥漫性、慢性炎症细胞及中性粒细胞，嗜酸性粒细胞浸润，隐窝有急性炎症细胞浸润， 隐窝上皮增生，杯状细胞减少。全部病例按临床严重程度分级：腹泻每日4次以下，便血轻或无，无发热、脉搏加快或贫血为轻度；介于轻度和重度之间为中度；腹泻每日6次以上，伴明显黏液血便，体温>37.5℃,脉搏>90次/min，血红蛋白<100g/l为重度。结合临床症状及实验室检查排除细菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性血吸虫病、肠结核等感染性结肠炎及克隆病、缺血性肠炎、放射性肠炎患者及结肠癌、直肠癌患者，并排除症状严重伴全身中毒性症状的急性爆发型患者。
1.2 一般资料将34例患者随机分为两组。中药组22例中，男5例，女17例；年龄25～64岁，平均（32.51±12.46）岁；病程1.5～25年，病情程度轻度9例，中度11例，重度2例。西药组12例中，男6例，女6例；年龄24～62岁，平均（31.73±11.58）岁；病程2～28年，病情程度轻度5例，中度6例，重度1例。两组患者的年龄、病情程度比较差异无统计学意义（p＞0.05），具有可比性。所有病例均经结肠镜和病 理学 检查治疗前后各1次，所有标本均由病理活检取出，各切出3片，1片行he染色，另2片行免疫组织化学染色。
2 方法
2.1 治疗方法中药组口服复方结肠溶胶囊，本方由苦参、地榆、青黛、白及、甘草等组成。 该药由北京中惠药业有限公司研制的中药新药（第六类），口服4粒/次，0.4 g/粒，3次/d。治疗期间停用其他治疗溃疡性结肠炎的中、西药。西药组依据病情口服柳氮磺吡啶片，4片/次，0.25 g/片, 3次/d，该药由上海福达制药有限公司生产。两组疗程均为8周。治疗前后检测血、尿、大便常规，肝、肾功能，心电图，并进行结肠镜及病理检查。
2.2 nf-κbp65及stat6检测［3］采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连结法（sp法）。4 μm石蜡切片脱蜡至水，3 %过氧化氢去离子水室温孵育10 min，将组织切片浸入组织抗原修复液（枸橼酸钠液）中，后置入微波炉内进行组织修复（高温）2 min。室温放凉15 min，pbs洗3次，3 min/次，滴正常小牛血清封闭，置于恒温培养箱37 ℃ 30 min，倾去血清，滴加一抗，4 ℃冰箱孵育过夜，后用37 ℃恒温培养箱孵育40min。pbs洗2次，3 min/次，滴加生物素标记的二抗，37 ℃孵育40 min。pbs洗3次，3 min/次，辣根过氧化物酶的链霉卵白素，37 ℃孵育30 min。倾去多余的二抗。pbs洗3次，3 min/次。dab显色液显色，显微镜下控制显色时间。用苏木素复染，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。两种一抗分别为兔抗人nf-κbp65多克隆抗体及兔抗人stat6多克隆抗体（均购自武汉意德生物技术有限公司），sp试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。每张片子随机选取8个高倍镜视野（200×），用免疫组化分析软件系统hmias-2000高清晰度彩色医学图文分析系统（华中科技大学同济医学院清屏影像公司）对所选视野内的棕黄色阳性信号进行图像分析， 计算 各组患者肠黏膜nf-κbp65及stat6的阳性表达情况，即代表阳性强度的平均光度的均值。
2.3 统计学方法采用spss 13.0 统计软件处理数据，使用（±s）表示，治疗前后比较采用配对样本t检验，组间比较采用卡方检验。
3 结果
3.1 疗效判定标准参照中华医学会消化分会2000年成都全国炎症性肠病学术研讨会对“炎症病诊断治疗规范的建议”及《中药新药治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的临床研究指导原则》（2002年试行版）进行判定。
3.1.1 临床疗效判定标准临床症状消失，结肠镜检查黏膜大致正常为完全缓解；临床症状基本消失，结肠镜复查黏膜轻度炎症或部分假息肉形成为有效；临床症状、内镜及病理检查无改善为无效。
3.1.2 黏膜病变疗效判定标准肠镜复查黏膜病变恢复正常，或溃疡病灶已形成瘢痕；肠镜复查粘膜病变恢复程度达2级以上，为显效（完全缓解）；肠镜复查黏膜病变恢复程度达1级以上为有效；肠镜复查黏膜病变改善未达到以上标准，甚至加重者为无效。
3.2 两组临床疗效比较中药组22例 治疗 8周，显效12例，有效10例，无效0例，总有效率为100 %；西药组12例中，显效4例，有效5例，无效3例，总有效率为75 %。两组临床疗效差异有统计学意义χ2=5.63（p<0.05）。
3.3 两组黏膜病变疗效比较中药组22例中，显效9例，有效11例，无效2例，总有效率为90.9 %；西药组12例中，显效4例，有效5例，无效3例，总有效率为75 %。两组比较差异有统计学意义χ2=6.52（p<0.05）。
3.4 nf-κbp65及stat6的测定两组患者治疗后nf-κbp65及stat6的表达均降低，中药组与西药组治疗后比较差异有统计学意义t=2.54，p=0.02（p＜0.05），且中药组优于西药组。见表1。表1 各组nf-κbp65及stat6表达平均光度的比较 （略）中药组与西药组治疗后比较，差异有统计学意义（p＜0.05）
nf-κbp65及stat6活化后阳性表达为棕黄色，主要定位于细胞核，中药组治疗前阳性表达强，中药组治疗后阳性表达明显减弱（见图1）。
4 讨论
正常情况下，nf-κb与抑制蛋白iκb结合在细胞质中，处于非活化形式。当细胞受到刺激后，iκb磷酸化并随后被降解，nf-κb就转入细胞核中并激活相关基因的转录［4］。stat6属于信号转导和转录激活因子（stats）家族中的一员。与stat家族中其他成员的结构相似，stat6在它的n末端附近有4个螺旋区域，中心有dna结合区域，一个含磷的酪氨酸结合区域（src 同族域或sh2），以及在c的末端有转活区域［5］。stat6在胞质中以一种潜伏的单体形式存在，如果某种刺激因素使stat6结合在il-4受体上，stat6的641位点上的酪氨酸残基发生磷酸化，stat6被激活，进入细胞核，与特定基因的启动子结合，诱发特发基因的表达［6］。
既往研究表明，与正常组比较，溃疡性结肠炎患者肠黏膜中nf-κbp65的活化及表达是增高的［7］。同样与正常组比较，溃疡性结肠炎患者肠黏膜中stat6的表达上调［8］。活化后的nf-κb转入细胞核，刺激il-1、tnf-α 、 il-6、il-8、mhcⅱ类分子、icam-1及inos的表达［9］。 活化的stat6参与了th2的分化［10］，th1/th2的平衡失调。
复方苦参结肠溶胶囊由苦参、地榆、青黛、白及、甘草组成。方中苦参、青黛清热燥湿解毒；地榆、白及凉血止血且解毒敛疮；甘草和中。诸药共奏清热燥湿、解毒敛疮、凉血止血之效。该药在前期的临床观察中已证实，在控制临床症状及药物自身的副反应等方面均优于西药柳氮磺吡啶片［2］。本研究结果表明，用该药8周后，能抑制患者的nf-κbp65及stat6的活化及表达，从而抑制相关炎性因子的表达，控制腹泻等临床症状，并促进患者受损黏膜组织的恢复。这表明抑制肠黏膜nf-κbp65及stat6的活化及表达，是复方苦参结肠溶胶囊治疗溃疡性结肠炎的机制之一。该药治疗溃疡性结肠炎的详细机制，尚需进一步研究。
【 参考 文献 】
［1］叶任高，陆再英.内 科学 ，第6版［m］. 北京：人民卫生出版社，2004：406.
［2］范 恒，寿折星，沈 霖，等.复方苦参结肠溶胶囊治疗溃疡性结肠炎11例［j］.
