作者：高丽萍，伊朝晖， 柴锡庆， 程书玲， 李贞
【摘要】 目的探讨益智方对阿尔茨海默病（ad）大鼠学习记忆能力的影响。方法在基础饲料中添加三氯化铝，al3+剂量为111.9 mg/kg体重，连续染毒3个月复制大鼠ad模型。采用y-电迷宫仪检测正常对照组、模型组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组大鼠学习记忆能力，观察脑区病理形态学改变。结果益智方能明显增加大鼠逃避正确率、缩短逃避潜伏期，明显减轻大鼠脑神经元损伤。结论益智方是防治ad模型大鼠学习记忆能力减退的有效药物。
【关键词】 铝 阿尔茨海默病 大鼠 学习记忆 益智方
老年性痴呆是一种多病因参与的神经退行性疾病,伴随着老年人口的增加，老年性痴呆的发病率也在增加，其中以阿尔茨海默病（alzheimer ad)较为多见。本病病因复杂，目前尚缺乏有效的防治药物与手段。根据中医肾藏精、通脑、主智理论，本研究采用氯化铝制作大鼠ad模型，探讨了自拟益智方对大鼠学习记忆能力的影响。
1 材料与仪器
alcl3·6h2o，分析纯，天津双船化学试剂厂产品；水合氯醛 分析纯，天津市华东试剂厂产品；多聚甲醛，化学纯， 中国 医药集团上海试剂化学公司产品。wwW.11665.COM
中药复方组份：淫羊藿、熟地、黄芪等组成，由河北省石家庄医药公司提供，生药经河北医科大学药学院生药教研室鉴定均为纯品。按传统方法将中药浸浴1 h，文火煎两次，去渣，合并、浓缩，每毫升生药含量为2.7 g，4℃冰箱保存，用前巴氏消毒。
mg-2 型y-电迷宫仪，张家港市生物医学仪器厂生产；oa切片机 lukar-2135; 全自动纤维摄像系统 new vanox。
2 方法
2.1 动物分组与处理选用北京医科大学实验动物中心提供的体重（350±20）g健康3月龄sd大鼠60只(清洁级，合格证号-00-0004)，采用普通饲料适应性饲养1周后，按体重随机分为5组，每组12只，其中正常对照组喂普通饲料，模型组及低、中、高剂量3个中药组在普通饲料的基础上，按体重8%的进食量添加alcl3·6h2o，剂量为：111.9 mg/kg体重，饲喂添加alcl3·6h2o饲料当天起，3个中药组用中药煎剂灌胃，用量为：低剂量中药组10.8 g·kg-1·d-1、中剂量中药组21.6 g·kg-1·d-1，高剂量中药组30.4 g/kg/天，模型组、对照组大鼠每日灌服等量温开水。动物自由饮水，动物房温度（20±2）℃，第90天，采用y-电迷宫仪训练和测定大鼠学习记忆能力。
2.2 学习记忆能力测试 参照郭宗君方法［1］，在夜晚安静和避光的条件下，用ｙ型电迷宫仪训练和测试大鼠的学习记忆能力。大鼠首先在ｙ型电迷宫仪的安全臂灯源处停留适应1 min，然后给予电刺激（电压90 v，持续1 s），当大鼠逃避到新的安全臂灯源处时，让大鼠在该处休息适应1 min, 顺时针依次将通电臂换为安全臂，连续训练和测定4 d，每天10次/只，记录每只大鼠逃避正确率，受电刺激后，大鼠从通电臂灯源处直接逃至安全臂灯源处为正确逃避，所用时间为逃避潜伏期，如果电刺激后，大鼠不出现逃避或逃避到安全臂的非灯源处停留，且对敲击声没有做出正确反应的为逃避错误，其潜伏期记为10 s, 逃避正确率越高，逃避潜伏期越短，说明学习记忆能力越好。
2.3 脑区病理形态学检查行为实验测试结束后，从每组随机抓取4只大鼠，采用4%水合氯醛按1 ml/100 g 体重腹腔注射，麻醉后固定大鼠，从大鼠胸骨剑突处开胸，经左心室插管至主动脉，快速灌注0.01 mol/l的冷生理盐水100 ml冲洗血液，之后用4%多聚甲醛500 ml灌注，取脑组织后立刻固定于4%多聚甲醛中，常规石蜡切片，he染色，观察脑组织形态改变。
2.4 数据处理实验结果采用spss10.0统计软件对数据进行统计分析。
3 结果
3.1 大鼠一般状况 模型组大鼠精神萎靡，常聚堆静卧，被毛蓬松，反应迟钝。各中药组大鼠上述症状明显减轻，且随剂量增加效果愈加明显。
3.2 益智方对大鼠y-迷宫逃避正确率的影响 由表1可见，在连续前3天的测试中，模型组、各中药组大鼠逃避正确率与对照组无显著性差异（p＞0.05），至第4天，模型组大鼠的逃避正确率没有再升高，而明显低于正常对照组（p＜0.05﹚，中剂量与高剂量中药组大鼠逃避正确率明显高于模型组（p＜0.05或p＜0.01），各中药组之间大鼠逃避正确率无显著性差异（p＞0.05）。表1 各组大鼠y-迷宫逃避正确率比较（略）与正常对照组比较，*p<0.05；与模型组比较， #p<0.05 ## p<0.01
3.3 益智方对大鼠逃避潜伏期影响连续训练3 d后，第4天测定各组大鼠逃避潜伏期。由图1可见，与正常对照组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（p＜0.05﹚；与模型组比较，中剂量组与高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（p＜0.05或p＜0.01），各模型组大鼠之间逃避潜伏期无显著性差异。
3.4 大鼠脑组织学形态学观察在光镜下观察，对照组大鼠皮层、海马细胞排列规则。模型组大鼠皮层锥体神经元数目明显减少，排列紊乱，层数减少，胞核染色体加深；海马ca1区神经细胞排列紊乱，层数减少，神经元数目减少，锥体细胞颗粒空泡变性，胶质细胞增多，深染，并可见许多固缩细胞，ca3区发现许多细胞内有神经纤维缠结（nft）样改变。低剂量中药组大鼠脑组织神经细胞也呈现同上病变。中剂量组与高剂量中药组大鼠上述病变明显减轻。
4 讨论
铝是一种神经毒素，易沉积于脑内而对中枢神经系统具有毒性作用，到目前为止，铝对学习记忆的抑制作用已在多数动物和人身上实验得到证实［2～5］。国外有人报道铝作业工人的短期记忆能力、学习能力、视空间感知能力、心理运动能力均受到一定程度的损害。也有调查显示铝厂附近的儿童其智力要明显低于同年龄的其他儿童。国内有研究表明,铝熔铸工人的视觉感知记忆力、注意力、手的运动协调能力均下降、反应时标准差和最慢反应时间延长、数字译码和视觉保留时间延长,提示铝对神经行为功能有影响。动物实验发现,给猫、家兔、大鼠和小鼠等染铝,均可引起一系列行为异常,而且动物出现认知和记忆障碍的时间也早于其它指标。以往利用铝制备ad动物模型多以灌胃方式、腹腔注射及脑室注射为造模途径，与人体实际情况下经水或食物的慢性摄铝方式不符。本次研究我们以食物中添加alcl3 的方式对大鼠进行亚慢性染毒,采用电迷宫测定大鼠学习记忆能力，结果显示，对照组大鼠在电刺激后逃避启动迅速，目标明确，方向正确，逃避过程中表现很谨慎。模型组大鼠在电刺激后，多数表现为惊、恐、呆、慢的特点，逃避过程中表现各异，或在起始点转圈不向前跑、或中途停滞不前，且所选择的逃避终点也各不相同。模型组大鼠逃避潜伏期较正常组出现不同程度的延长，逃避正常率出现不同程度的下降，海马神经细胞排列紊乱，层数减少，神经元数目减少，锥体细胞颗粒空泡变性，胶质细胞增多，海马与学习记忆关系密切,ad 患者病理改变最明显的部位也是海马,提示铝造成的海马损伤可能是模型组大鼠对灯光信号、空间定位的学习及记忆能力明显下降的重要原因之一。从慢性铝中毒大鼠学习记忆过程与效果来看，模型组大鼠的症状有多数似记忆减退期和混乱期ad患者的表现，少数与痴呆期ad患者相似，表明111.9 mg/kg体重alcl3饲喂动物建立了较为理想的ad模型。
从ad的症状和中医角度看，ad多属本虚标实，本虚多属于神经亏虚、气血不足、阴虚阳懦，脑髓空虚，标实多属内风上旋、痰火上扰、血瘀阻于脑脉、饮邪上蒙轻窍等。中医强调“治病必求于本”，脑为神主，肾为神根，精化气，气生神，神御精，肾通过督脉上通于脑，脑肾一体，精气神统一，因此，补肾即补脑，补脑即可补肾强精。本研究根据补肾添精、豁痰去瘀、益气养血、平肝清脑治则，研究了自拟益智方对大鼠学习记忆能力的影响，结果表明益智方干预后，中剂量和高剂量中药组大鼠的学习记忆能力明显好转，各种异常的神经精神症状明显减轻或消失。同时，高剂量中药组大鼠逃避启动和逃避速度比正常组大鼠还快，逃避是临难不恐，转移不移。各组大鼠脑形态学检查显示，中剂量中药和高剂量中药组大鼠脑神经元损伤脱落比模型组大鼠明显减轻，高剂量中药组大鼠的作用更为明显，实验结果表明，益智方可明显预防ad模型大鼠学习记忆能力的减退，益智方是防治ad的有效药物。
【 参考 文献 】
［1］郭宗君，郭云良，许贞峰，等. 药物诱导痴呆模型的初步研究［j］.
