【摘要】 目的观察沙棘总黄酮（total flavones of hippophae rhamnoides, tfh）对角叉菜胶所致大鼠尾静脉血栓的影响，并分析其作用机制。方法采用后足跖部皮下注射角叉菜胶0.25 ml/100g制备sd大鼠尾静脉血栓模型，观察24，36，72 h大鼠血栓发生率与黑尾长度。将60只大鼠随机分为沙棘总黄酮高、中、低剂量组及模型对照组、阳性对照组（阿司匹林组）和正常对照组，每组10只。各实验组动物均灌胃1次/d。30 d后测定各组大鼠凝血酶原时间（pt）、 活化部分凝血活酶时间（aptt）、凝血酶时间（tt）、125i-血栓素b2 (txb2) 、125i-6-keto-前列腺素f1a (6-keto-pgf1a)水平以及血清一氧化氮（no）含量。结果沙棘总黄酮能显著缩短大鼠黑尾长度，增加血浆pgi2/txa2比值，延长tt，aptt时间，并可升高no含量。结论沙棘总黄酮对角叉菜胶所致大鼠炎性血栓形成具有预防作用，其作用机制可能与提高pgi2和no水平有关。
【关键词】 沙棘总黄酮 血栓形成 角叉菜胶 血栓素b2 6-keto-前列腺素f1a
the effect of total flavones of hippophae rhamnoides on carrageenaninduced thrombopoiesis in rats
yuan benxiang，yang guizhen，ren yanyan
(ningxia medical college， yinchuan, ningxia750021，china)
abstract：objectiveto observe the effects of total flavones of hippophae rhamnoides on carrageenaninduced thrombopoieses in rats and study its mechanism. methods1.caudal venous thrombosis rat model was established by injecting carrageenan 0.25 ml/100 g subcutaneous into paw of sd rats and the rate of thromboembolism and the length of blacken tail were observed at 24,36 and 72 h. 2. 60 rats were divided randomly into groups of tfh (high、medium and low dose),model 、 asprin and control (n=10). they were treated intragastrically once a day for 30days .pt，aptt，tt，txb2，6-keto-pgf1a and no in serum were measured. resultstfh could significantly shorten the length of blacken tail and raise the ratio of pgi2/ txa2 as well as prolong tt and aptt and increase the content of no. conclusiontotal flavones of hippophae rhamnoides can prevent thrombogenesis induced by carrageenan.its possible mechanism may related to the increase of pgi2and no.
key words：total flavones of hippophae rhamnoides； thrombogenesis； carrageenan； txb2 ； 6-keto-pgf1a
血栓相关性疾病严重威胁人类健康，由心肌梗塞、脑卒中等血栓栓塞性疾病导致的死亡已占到全球总死亡的51%。WWw.11665.coM血小板在血栓形成中起着重要作用，人们希望应用具有抗血小板作用的药物来防治血栓栓塞性疾病。沙棘总黄酮（tfh）对心血管系统具有多种药理作用，能显著降低实验性高血脂大鼠血清胆固醇、甘油三酯含量；显著增加前列环素(pgｉ2)水平，提高pgｉ2/txa2(血栓素a2)比值；也能显著降低血小板内camｐ含量，抑制血小板聚集反应，延长凝血时间［1，2］。本实验采用大鼠后足跖部皮下注射角叉菜胶建立炎性血栓模型，研究沙棘总黄酮对大鼠体内血栓形成的作用，并对其作用机制进行初步探讨，同时考察其对凝血系统的影响。
1 器材
1.1 药品与试剂
沙棘总黄酮由青海康普德生物制品有限公司提供，批号20070107（以异鼠李素为标准，沙棘总黄酮含量为27%）。肠溶阿司匹林片，由山西三九同达药业有限公司提供，批号h14023223（25mg/片），生理盐水由宁夏启元药业有限公司提供,批号0511114-2，no测定试剂盒购自于南京建成生物工程研究所，批号20070423，txb2 测定试剂盒由北京北方生物技术研究所提供，批号20070420，6-keto-pgf1a 测定试剂盒由北京北方生物技术研究所提供，批号20070400，角叉菜胶为sigma公司产品，批号g1023-25g。
1.2 仪器
sysmex ca-1500全自动血凝分析仪（日本岛津 ），rfj-2008ps－免疫计数器（核工业西安262厂生产）， uv-9100分光光度计（北京第二光学仪器厂生产），可调式移液器（上海仪器有限公司生产），800型离心沉淀器（上海手术器械厂生产），台式离心机（上海亭高科学仪器厂制造）。
2 方法
2.1 分组与给药方法
sd（spragye - dowleg）清洁级健康雄性大鼠（220±20）g 60只，由本院实验动物中心提供，合格证号scxr(宁)20070004。自由进食饮水、适应性观察1周后随机分为６组： 正常对照组、模型对照组、阳性对照组（阿司匹林组）、沙棘总黄酮高、中、低剂量组，每组各1０只。沙棘总黄酮用蒸馏水配成浓度分别为50%，25％，12.5%的溶液，阿司匹林用蒸馏水配成浓度为1%的溶液，1次/d灌胃，模型对照组和正常对照组给予等量容积的蒸馏水灌胃，1次/d。连续灌胃30 d。最后1次给药前两天开始造模,将角叉菜胶以生理盐水配成2%浓度，于大鼠后足跖部皮下注射， 0.25 ml/100 g，分别在24，36 h，72 h后测量大鼠黑尾长度，之后以2%乌拉坦腹腔注射麻醉，心腔取血检测相应指标。
2.2 黑尾测定
直尺测量大鼠黑尾长度。
2.3 指标测定
严格按试剂盒说明书，用放免法测定血浆 txb2和 6-keto-pgf1a 含量、免疫比浊法测pt，aptt，tt时间，硝酸还原酶
法测定血清no含量。
2.4 统计学方法
采用spss11.5统计学软件处理，各样本均数比较采用单因素方差分析。
3 结 果
3.1 沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血栓形成的影响注射角叉菜胶后，24 h各组大鼠尾部均有血栓形成，大部分出现不同程度的淤血和黑尾，且黑尾长度的增长与时间呈相关性。 36 h后与模型对照组相比，沙棘总黄酮中剂量组大鼠黑尾长度明显缩短（p<0.01）；72 h后与模型对照组相比，沙棘总黄酮中、低剂量组大鼠黑尾长度的增加明显抑制（p<0.01）。结果见表1。表1 沙棘总黄酮对大鼠黑尾形成的影响 （略）
3.2 沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血浆 txb2和 6-keto-pgf1a含量的影响与正常对照组相比，模型对照组大鼠血浆txb2含量，txb2/6-keto-pgf1a比值显著升高（p<0.01），6-keto-pgf1a含量降低。用药30d后，与模型对照组相比，大鼠血浆txb2含量、txb2/6-keto-pgf1a比值明显降低，6-keto-pgf1a含量明显升高（p<0.01或p<0.05）。其中阳性对照组最明显，沙棘总黄酮各剂量组以中、低剂量为最显著。结果见表2。表2 沙棘总黄酮对大鼠血浆 txb2和 6-keto-pgf1a含量的影响（略）
3.3 沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血液pt、 aptt 、tt的影响与正常对照组相比，模型对照组大鼠血液pt，aptt ，tt明显缩短（p<0.05）。用药30 d后，与模型对照组相比，各剂量组大鼠血液aptt ，tt明显延长（p<0.01）其中以中剂量组为最显著，且优于阳性对照组。但各剂量组对pt没有明显影响。结果见表3。表3 沙棘总黄酮对大鼠pt，aptt，tt的影响（略）
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3.4 沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血液no的影响与正常对照组相比，模型对照组大鼠血液no的含量显著下降（p<0.05）。用药30 d后，与模型对照组相比，各剂量组大鼠血液no的含量明显增高，其中阳性对照组最明显，沙棘总黄酮各剂量组以中剂量为最显著。结果见表4。
4 讨论
血栓形成常涉及血液、血管、血流等多种因素，为一综合性病理过程。目前以德国病理学家virchow的三联制血栓形成学说即血管壁损伤、血液成分改变、血流异常［3］为普遍公认。角叉菜胶是从海藻中提取的一种大分子硫酸多糖，常被用于制备多种组织炎症模型，其诱导的大鼠尾静脉血栓形成是由局部炎症与血管内皮损伤所致的混合性血栓［4］。表4 沙棘总黄酮对大鼠血清no的影响（略）
炎症时，血管损伤内皮组织暴露，细胞-配体间黏附反应启动，引起血小板活化，活化的血小板可激活其膜上的磷脂酶a2，促进花生四烯酸代谢，使血小板合成txa2增加，血小板聚集加速；同时，血管内皮损伤后pgi2合成减少，可增强血小板与内皮组织的黏附而促进血栓形成［3］。正常生理情况下，txa2和pgi2的产生与分解处于动态平衡中，对维护血小板正常功能，血液循环通畅，凝血机制，防止血栓形成极为重要。研究表明，血小板在血栓形成中发挥着十分重要的作用，但其功能又受txa2和pgi2的调控。txa2是一种强烈的缩血管和致血小板聚集的生物活性物质，而pgi2则是血小板抑制剂，具有显著抗血小板聚集和舒血管作用［5，6］。metha［7］认为，血浆txa2/pgi2失衡是引起血管收缩、血小板聚集、血栓形成，导致心绞痛和心肌梗死的原因之一。txa2/pgi2生物半衰期短，可迅速代谢为txb2/6-keto-pgf1a，因此测定txb2和6-酮-pgf1α水平可反映大鼠体内txa2和pgi2含量的变化。本实验结果证实，沙棘总黄酮能降低角叉菜胶大鼠血浆txb2含量，增加pgi2水平，并显著降低txb2/6-keto-pgf1a比值，表明tfh对血小板花生四烯酸代谢有一定影响，可能是通过改善txa2/pgi2之间的动态失衡，抑制血小板聚集，促使受损血管内皮恢复功能， 进而合成更多pgi2，减少血小板与内皮下层的黏附，而起到防止血栓形成的作用。这与文献［1］报道一致。
no为内皮衍生的松弛因子，具有扩血管和抗血小板聚集作用。当血管内皮细胞损伤后,no释放减少,易形成血栓。tfh能升高大鼠血液no含量，提示其抗血栓形成也与no保护血管内皮细胞的作用有关。
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另外，沙棘总黄酮可剂量依赖性延长大鼠pt和aptt，提示沙棘总黄酮可抑制体内血栓的形成,其作用可能与抑制内、外源性凝血途径有关。详细机制需进一步研究。
【参考文献】
［1］贾乘.沙棘总黄酮对大鼠血栓形成的研究［j］.中医药学刊,2001,19(9):258.
［2］葛志红，梁 毅，陈运贤，等.沙棘汁对环磷酰胺所致大鼠血小板减少的影响［j］.
