作者：赵红艳，叶明福，王亚丽，汤金梁，陈锐
【摘要】 目的: 探讨前列腺导管腺癌(pda)基底细胞的病变特点，为前列腺癌的病理诊断提供依据. 方法 : 收集pda标本35例， 应用 光镜、免疫组化elivisiontm plus二步法，选择34βe12, p63, p504s, psa, psap抗体检测，观察pda中基底细胞的缺失情况. 结果: he切片中35例pda的基底细胞变化难以确定，但免疫组化显示13例pda多数癌巢周围有较完整的基底细胞，3例pda仅少数基底细胞残存，19例pda基底细胞完全缺失；本组病例中27例pda边缘少数小片状浸润癌和/或小腺泡癌成分中p504s阳性、34βe12、p63均阴性. 结论: 本 研究 发现35例pda中的基底细胞尽管有明显缺失，但残存比率较高，提示在日益增多的前列腺穿刺标本中，基底细胞缺失并非是pda诊断的最重要指标，若对基底细胞缺失期望值过高，则容易造成误诊或漏诊.
【关键词】 前列腺肿瘤；导管腺癌； 基底细胞；免疫组化
【abstract】 aim: to investigate the clinicopathological features of basal cells in prostatic duct adenocarcinoma which can help pathological diagonosis of prostatic cancer. methods: thirtyfive cases of prostatic duct adenocarcinoma were studied by hematoxylin and eosin staining and immunohistochemical techniques of twostep elivisiontm plus method to detect the expression of 34βe12, p63, p504s, psa and psap. and the abscence of basal cells in prostatic duct adenocarcinoma was analysed according to the immunohistochemical staining. results: of the total 35 cases, nearly intact basal cells were observed by immunohistochemical staining in 13 cases;only small amounts of incomplete basal cells in 3 cases; and complete absence of base cells in 19 cases 27 cases with p504s positive, 34βe12 and p63 negative staining at the edge of small invasive carcinoma and/or small acinous carcinoma around the prostatic duct adenocarcinoma were also observed. conclusion: although obvious absence of basal cells is usually observed in prostate duct adenocarcinoma, some basal cells still remain in the tumor tissues, which shows that the absence of basal cells is not the most significant index on the pathological diagnosis of prostate duct adenocarcinoma, and too much dependence on the importance of basal cell absence in diagnosis of prostate duct adenocarcinoma will lead to misdiagnosis and missed diagnosis.
【keywords】 prostatic neoplasms; duct adenocarcinoma; basal cell; immunohistochemistry
0 引言
前列腺导管腺癌（prostate duct adenocarcinoma, pda）为前列腺腺癌的一种亚型. 随着前列腺癌穿刺活检的广泛开展, 前列腺癌诊断的复杂性日益受到病理工作者的重视. 本实验通过观察35例pda he切片的镜下结构和基底细胞免疫组化的表达特点，探讨该类前列腺癌中基底细胞的缺失比率、免疫组化表达特点、肿瘤生长方式及导管腺癌周围混合癌成分的相关性特点，客观认识基底细胞缺失在pda诊断中的“重要性”， 为前列腺癌诊断提供依据.
1 材料和方法
1．1 材料 收集第三军医大学新桥 医院 199001/200708 185例手术切除的前列腺癌标本，所有标本均经40 g/l甲醛固定,常规石蜡包埋, he 染色. 按who（2001）泌尿系统及男性生殖器官肿瘤分类中描述的组织形态学标准，经显微镜观察，挑选明确诊断为pda的病例35例作为本研究的主体病例. mab 34βe12, p63, psa, psap(福州迈新生物技术开发有限公司); mab p504s(北京中杉金桥生物技术有限公司). 除p504s为浓缩型外，其余抗体均为即用型.
1.2 方法 每例选出具有代表性的癌细胞较丰富的蜡块进行连续切片，片厚4 μm，置于涂有多聚赖氨酸的玻片上. 用elivisiontm plus二步法进行免疫组织化学染色. 抗原修复除染p504s的组织用edta煮沸修复外，其余均采用柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法处理. 操作步骤严格按照说明书进行，用pbs 代替一抗作阴性对照. 结果判断: 34βe12, p504s, psa, psap阳性定位于细胞质中，偶见于胞膜；p63阳性定位于胞核. 癌细胞呈黄棕色染色为阳性,无黄棕色染色为阴性 . p504s（+）, 34βe12和 p63均（-）定为基底细胞完全缺失（-）；p504s（+）, 34βe12和/或p63（+），定为基底细胞存在，其中癌巢周围大于80%的细胞34βe12和/或p63表达为基底细胞基本完整（+），癌巢周围10%～80%的细胞34βe12和/或p63表达为基底细胞部分缺失（±）.
2 结果
2.1 病理形态学观察 全部病例的肿瘤区域呈大的导管状腺癌结构，包括筛状型和实体型两种类型. 其中筛状型25例，癌巢中可见明确的筛孔状腺样结构，或导管腺癌组织内散见一些小的腺体呈背靠背、桥状、裂隙状结构. 实体型10例，癌巢中腺样结构不明显，癌细胞呈实片状，可见少量裂隙，局部导管内可见粉刺样坏死物. 本组35例pda中28例瘤细胞异型性明显，核大，深染，核仁明显增大，可见核分裂像，7例瘤细胞异型不明显. 在光镜下，仅发现其中10例癌性导管周围尚可辨认出较完整的“基底细胞”存在（图1a），25例不能明确基底细胞是否残存. 本组病例中有1例为转移至耻骨联合上缘的pda实体癌，巢团周围光镜下观察有完整的“基底细胞”存在, 基底样细胞呈环状包绕着癌巢周缘（图1b）. 35例pda的次要结构区域可见一些无明确基底细胞的小腺泡和/或小片状癌细胞浸润.
a: 筛状型pda尚可辨认出部分基底细胞残存; b: pda基底样细胞呈环状包绕着癌巢周缘.
图1 pda的he结构（略）
2.2 免疫组化检测结果
2.2.1 pda区的基底细胞免疫组化表达 结果显示所有病例癌巢中央34βe12, p63均为（-），基底细胞完全缺失；10例筛状型及3例实体型边缘部34βe12或p63基本呈连续（+），表明基底细胞基本完整（图2a）；2例筛状型及1例实体型边缘部34βe12或p63断续（+）（图2b），提示基底细胞部分缺失；19例(筛状型13例，实体型6例)边缘部34βe12和p63均（-），基底细胞完全缺失. 其中1例转移至耻骨联合上缘的pda实体癌癌巢周围呈环状的基底样细胞34βe12和p63（-），但psa和psap均阳性（图3a）. 本实验中，基底细胞的34βe12、p63两种标记物均阳性13例，均阴性19例，相符率91.2%，p63阳性而34βe12阴性3例，不符率8.8%；未发现34βe12阳性而p63阴性的病例.
a: pda导管周围34βe12显示基底细胞部分缺失; b: 筛状型pda的p63显示基底细胞较完整存在.
图2 癌巢周围基底细胞的免疫组化表达情况（略）
a: 一例转移性pda瘤细胞psap阳性，基底样细胞呈环状强阳性表达; b: 筛状型pda瘤细胞p504s阳性.
图3 肿瘤细胞的免疫组化表达情况（略）
2.2.2 pda区的肿瘤细胞免疫组化表达 本实验发现30例（筛状型21例，实体型9例） pda中巢团状肿瘤区域的瘤细胞p504s（±～）（图3b）；5例（筛状型癌4例，实体型癌1例）癌细胞（-）. 所有病例的癌细胞psa和psap均阳性（+）或强阳性（～）表达.
2.2.3 pda癌周浸润癌组织免疫组化表达 结果显示，pda周围可见少量异形癌性腺泡和/或散在小片状癌浸润，免疫组化检测发现这些病灶中，28例癌细胞p504s（+），且34βe12、p63均无表达（-），提示基底细胞完全缺失；7例导管腺癌周围浸润的异型小腺泡，上皮细胞p504s（+），腺管边缘34βe12或p63显断续（+）表达，提示基底细胞部分缺失(表1).
表1 pda的34βe12, p63, p504s, psa, psap的表达和基底细胞的缺失情况（略）
※：1-25为筛状型癌，26-35为实体型癌.
3 讨论
前列腺的基底细胞核呈条状与基底膜平行，深染，胞质缺少或缺乏. 电镜观察此类细胞体积小，细胞器较少，细胞间可见桥粒或半桥粒结构，细胞质内未见到成熟的肌丝，并且其34βe12阳性和s100、sma阴性，表明该细胞属于基底细胞而不是肌上皮细胞. 在he切片中，本组无一例能明确分辨出基底细胞是否完全缺失，其中一例转移至耻骨联合上缘的pda实体癌，镜下观察认为肿瘤癌巢周围“基底细胞”明确存在且较完整，但34βe12和p63均阴性，可见在前列腺癌诊断中，尤其在he切片中，应当谨慎 应用 基底细胞缺失这一关键性诊断指标，在he切片中观察到基底样细胞时，应采用免疫组化证实. 34βe12和p63是 目前 已广泛应用的两种基底细胞标记，应用其辨认基底细胞比肉眼光镜观察准确得多.
34βe12定位于基底细胞的胞膜和胞质. 但是，34βe12 在前列腺良性增生、萎缩、腺病和不典型增生中可有假阴性［1］. 因此，单独采用34βe12标记基底细胞有一定局限性，34βe12只能作为前列腺癌诊断中的一个重要的辅助指标［2-3］. p63蛋白选择性地表达于基底细胞胞核中,而在分泌腺细胞和神经内分泌细胞中不表达. shah等［4］比较基底细胞对34βe12和p63的特异性,发现p63 比34βe12灵敏度更高,在复杂病例中更有诊断优势. 二者联合应用可减少假阴性,可进一步提高检测结果的稳定性. 基底细胞标记对前列腺癌来说是一种阴性标记抗体,有时抗体质量、标记技术和标本处理等方面的 问题 会造成假阴性结果. 如果能联合使用前列腺癌的阳性标记抗体，则更有利于明确诊断. p504s 是目前公认的前列腺癌的阳性标记抗体，它在良性前列腺上皮中低表达,而在前列腺癌的上皮内高表达. 因此p504s 和34βe12、p63 都已成为鉴别前列腺良恶性病变的重要工具. 如果结构异常的腺体中出现大核仁,免疫标记证实这些腺上皮细胞表达p504s，腺体周围的基底细胞不表达34βe12和p63,癌的诊断几乎可以肯定. 本实验联合应用该三种抗体，对35例前列腺导管腺癌进行标记，发现癌巢周围，37.2%（13/35）的病例大于80%的基底细胞存在，8.6%（3/35）的病例10%～80%的基底细胞存在. 这提示在前列腺导管腺癌中，基底细胞并不是完全缺失，而且残存的比率较高,基底细胞缺失并非诊断前列腺导管腺癌的必备条件，应引起在病理诊断中的注意.
本实验联合应用p504s 和34βe12，p63标记前列腺导管腺癌这一特殊类型癌,发现该类肿瘤中基底细胞残存比率较高. 尤其是在前列腺穿刺的小组织中，如果发现一些可疑为癌的筛状结构、裂隙状结构、肾小球样结构时，应该考虑到使用这三种抗体进行标记. 但是值得注意的是，在这些小标本中，若观察到基底细胞大部分残存，也不应该排除前列腺癌的诊断. 正如蒋智名等［5］的实验中发现有30%的前列腺癌穿刺组织中找不到核仁一样. 另外我们发现，35例导管腺癌中28例肿瘤次要区域存在小片状浸润腺癌和/或小腺泡癌，其基底细胞细胞完全缺失，且p504s均有表达；7例肿瘤周围弥散的小腺泡，p504s阳性表达，基底细胞部分缺失. 同时13例基底细胞基本完整的导管腺癌周围均可见癌性腺泡和/或弥散的小片状癌. 因此，在难以确诊的导管腺癌周围，如能找到癌性成分也是一个重要的佐证.
【 参考 文献 】
［1］ 金行藻,周晓军. 前列腺癌活检的病理诊断［j］.诊断病理杂,2003,10(5):257-260.
［2］ 胡志宏，徐 晓，彭 进. ck34βe12、p63 表达在乳腺癌和前列腺癌诊断中的应用价值［j］.山东医药,2005,45 (32):10-12.
［3］ 肖 芹, 印洪林, 陆珍凤,等.前列腺癌gleason 分级评分与血清psa、原位psa的变化和34βe12、p504免疫表型的 研究 ［j］.中华男 科学 ,2004,10(5):362-365.
［4］ shah rb, zhou m, leblanc m, et al. comparison of the basal cellspecific markers, 34betae12 and p63, in the diagnosis of prostate cancer［j］. am j surg pathol,2002,26(9):1161-1168.
［5］ 蒋智铭,张惠箴.几种特殊类型前列腺癌的病理特点［j］.中华病 理学 杂志,2001,30(6):474-476.
