【摘要】 目的 建立荜茇止痛酊中胡椒碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,c18色谱柱,四氢呋喃-甲醇-水(v∶v∶v＝30∶30∶50)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为室温,检测波长为343 nm,进样10 μl,以外标法计算含量。结果 胡椒碱在8.3～41.5 mg/l内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：a＝3 413 186ρ－
7 467.7,r＝0.999 8；其平均回收率为99.7%,rsd＝1.8%(n＝6)。结论 该方法简便,重复性好,空白无干扰,可有效地控制荜茇止痛酊制剂的质量。
【关键词】 荜茇止痛酊；胡椒碱；高效液相色谱法
abstract：objective to establish the method of content determination of piperine in biba zhitong tincture. methods hplc was adopted in determining the content of piperine in biba zhitong tincture. c18 chromatographic column was used with the column temperature being the room temperature. the mobile phase was tetrahydrofuran-methanol-water (v∶v∶v＝30∶30∶50) with the velocity of 1.0 ml/min. the detection wavelength was 343nm, and the sampling volume was 10 μl. external standard method was chosen for content calculation. results the inner peak area of piperine (8.3～41.5 mg/l) showed fine linear relation with mass concentration of control group. its regression equation was a＝3 413 186ρ－7 467.7, r＝0.999 8, with the average recovery ration being 99.7%, and rsd＝1.8% (n＝6). conclusion the method is simple, convenient, good reproducibility and non-interference, and can effectively control the quality of the preparation.
key words：biba zhitong tincture；piperine；hplc
荜茇止痛酊由荜茇、细辛和花椒等6味中药组成,具有祛风散寒止痛的功效,临床用于治疗风寒牙痛。WWW.11665.cOM本制剂生产采用提取挥发油,水煮醇沉等工艺加工制成。荜茇为方中君药,其主要有效成分为胡椒碱,2005版《中华人民共和国药典》(一部)采用内标法测定荜茇中胡椒碱的含量[1],文献报道胡椒碱的含量测定方法有高效液相色谱法[2-4]。本试验采用改进四氢呋喃-甲醇-水系统为流动相,外标法测定胡椒碱的含量,较适用于本中药复方制剂复杂成分的分离,有效控制荜茇止痛酊的质量。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津)lc-6a,包括：spd-6av检测器,c-r4a数据处理机。胡椒碱(批号0775-9702,由中国药品生物制品检定所提供,纯度为98.79%)；荜茇止痛酊(批号041212、041216、041220,无锡山禾药业股份有限公司生产)。甲醇、乙腈为色谱醇,无水乙醇为分析醇,水为熏蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：c18 柱(4.6 mm×250 mm,10 μm),大连依科特科学仪器有限公司；流动相：四氢呋喃-甲醇-水(v∶v∶v＝30∶30∶50)；流速：1.0 ml/min；检测波长：343 nm；柱温：室温；分离度：r>1.5；理论板数按胡椒碱峰计算应大于1 500。
2.2 检测波长的选择
对胡椒碱的乙醇溶液进行紫外区扫描,结果胡椒碱在343 nm处有最大吸收,故选用343 nm作为检测波长。
2.3 流动相的选择
曾试验4种流动相：①甲醇-水(77∶23)；②乙腈-水(70∶30)；③乙腈-0.05 mol/l磷酸二氢钠溶液(70∶30),用磷酸调节ph为3.5、3.1；④四氢呋喃-甲醇-水(30∶30∶50),其中④使胡椒碱峰与杂质峰分离效果好,能基线分离。
2.4 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品10 mg,置50 ml棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5 ml,置50 ml棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1 ml中含胡椒碱20 μg)。
供试品溶液的制备：精密量取荜茇止痛酊1 ml,置25 ml棕色量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,于冰箱中冷藏1.5 h,取出,放置至室温,滤过,取续滤液5 ml,置25 ml棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。
阴性对照液的制备：按处方中药味的比例自配不含荜茇的群药,按其工艺制成阴性制剂,再按供试品溶液制备方法制成空白溶液,即得。
2.5 阴性液干扰试验
精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10 μl注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。
2.6 线性关系的考察
精密吸取胡椒碱对照品(10.38 mg→50 ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分别置25 ml棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10 μl,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果表明,胡椒碱在8.3～41.5 mg/l范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：a＝3 413 186ρ－7 467.7,r＝0.999 8。
2.7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得rsd＝0.93%。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、24 h测定色谱峰面积,计算rsd为1.2%,结果表明,其在24 h内基本稳定。
2.9 回收率试验
精密吸取已知含量的同一批号(批号041212)样品0.5 ml,分别精密加入胡椒碱对照品乙醇溶液,依法测定,结果平均回收率为99.97%,rsd＝1.8%(n＝6)。见表1。 表1 加样回收率试验结果（略）
2.10 样品中胡椒碱含量测定
取3批荜茇止痛酊样品,照“2.4”项测定,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)
3 讨论
本实验采用高效液相色谱法内标法和外标法2种方法进行荜茇药材中胡椒碱含量的对比试验,结果显示,2种方法测定结果基本相同。2005年版《中华人民共和国药典》采用内标法测定含量,结果准确,但鉴于中药复方制剂成分复杂,采用内标法时分离度难以满足要求,因此,本实验研究采用外标法更为实际、可行。
由于荜茇止痛酊所含成分复杂,给含量测定带来一定的困难。我们在样品前处理采用无水乙醇稀释、冰箱中静置除去杂质的方法,使样品得到净化,可满足含量测定的要求,且重现性好。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.163.
[2] 陶淑娟,王桂燕,毕开顺.hplc法测定蒙药那如-3丸中胡椒碱的含量[j].沈阳药科大学学报,2004,21(1)：35－37.
[3] 权丽辉,赵淑平,徐丽珍.rp-hplc测定止痛胶囊中胡椒碱的含量[j].中国中药杂志,2005,30(3)：235,240.
[4] 戴 涌,孙文基.成药泻宝中胡椒碱的hplc测定[j].中成药,1995, 17(3)：12－13.
