【摘要】 目的 应用高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量。方法 采用shim-pack-c18柱(5 μm,
150 mm×4.6 mm),甲醇-0.1%磷酸(25.3∶74.7)为流动相,流速0.9 ml/min,检测波长为250 nm。结果 线性范围为0.114~0.570 μg,r=0.999 6,回收率为98.74%,rds=0.67%。结论 该方法简便、准确、灵敏,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法;葛根素;降脂减肥颗粒
abstract:objective to determine the content of puerarin in jiangzhijianfei granules by high performance liquid chromatography. methods the determination was conducted by hplc using a shim-pack-c18 column (5 μm, 150 mm×4.6 mm) and a mobile phase of methanol-0.1% phosphoric acid water (25.3∶74.7). the flow rate was 0.9 ml/min and the detection wavelength was 250 nm. results good linear relationship between area and amount was noted for 0.114~0.570 μg of puerarin, with a correlation coefficient of 0.999 6. the average recovery of was 98.74%, rsd was 0.67%. conclusion the established method is simple, accurate, sensitive and can be applied to the quality control of the preparation.
key words:hplc;puerarin;jiangzhijianfei granules
降脂减肥颗粒是由何首乌、葛根、三七等10味中药组成,具有滋补肝肾、养益精血、扶正固本、通络定痛、健脾豁痰、明目生津、润肠通便的功效,用于各型高血脂症、心脑血管硬化、单纯性肥胖、习惯性便秘、痔疮出血。WwW.11665.CoM方中葛根为主要药物。本实验采用高效液相色谱法对制剂中葛根素进行含量测定,以便更好地控制其产品质量。
1 仪器与试药
日本岛津lc-10 at高效液相色谱仪,spd-10a紫外检测器,kq-250型超声波处理器。葛根素对照品购于中国药品生物制品检定所(批号0537-9910,hplc面积归一化法,测定含量为99.26%);降脂减肥颗粒(6 g/袋)由吉林森工健今药业有限公司提供。其它化学试剂均为国产,ar级。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[1]
色谱柱:diamonsil-c18柱(5 μm,4.6 mm×150 mm);流动相为甲醇-0.1%磷酸(25.3∶74.7);流速:0.9 ml/min;紫外检测波长:250 nm;理论塔板数按葛根素计算,不低于3 000;柱温为室温。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取葛根素对照品适量,加甲醇制成每1 ml含0.05 mg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品20 g,研细,取1 g,精密称定,加入30%乙醇30 ml,置具塞锥形瓶中,称定重量,超声处理20 min,放冷,再称定重量,以30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方量制备不含葛根药材的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl,注入液相色谱仪中,按上述条件测定。结果表明,阴性对照溶液色谱图中与对照品位置处无干扰,此法可行(见图1)。
2.5 线性关系考察
精密吸取葛根素对照品溶液4、8、12、16、20 μl,分别注入高效液相色谱仪中进行分析。以对照品进样量(μg)为横坐标,以对照品的峰面积为纵坐标作图,得一条通过原点的直线,回归方程为:y=2 490 376.534x+19 847.951,r=0.999 6。结果表明,葛根素在0.114~0.570 μg间呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密吸取供试品溶液连续5次重复进样,测得相对偏差rsd=0.53%。
2.7 稳定性试验
精密吸取供试品溶液在0、2、4、8 h分别进样,结果葛根素峰面积的rsd=0.24%,表明在8 h内供试品溶液的葛根素含量稳定。
2.8 重现性试验
精密称取同一批号样品5份,按供试品溶液的制备方法制备,依法进样分析,样品中葛根素含量的rsd=1.05%,表明其重现性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取葛根素对照品适量,加入已测葛根素含量的降脂减肥颗粒样品(取约1.0 g,精密称定)中,置具塞锥形瓶中,精密加30%乙醇100 ml,按供试品溶液的制备方法制备,进样,测定,计算回收率。结果见表1。表1 回收率试验测定结果(略)
2.10 含量测定
按上述方法制备供试品溶液,测定3批降脂减肥颗粒中葛根素的含量,结果见表2。表2 降脂减肥颗粒中葛根素含量测定结果(略)
3 讨论
根据葛根素的溶解性,分别以乙醇、30%乙醇为提取溶媒进行试验,结果表明,以30%乙醇提取制备供试品溶液能使葛根素提取完全,以甲醇为溶媒制备的溶液中杂质峰较少,含量偏低,故选择以30%乙醇为溶媒制备供试品溶液。
有关葛根素的高效液相色谱法含量测定方法较多,流动相有采用乙腈、甲醇、水、冰醋酸等系统[2]。我们采用甲醇、水系统,色谱分离效果较为满意,分离度及峰形对称性较好。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京:化学工业出版社,2000.267.
[2] 苗明三.现代实用中药质量控制技术[m].北京:人民卫生出版社,2000. 994.