p物质在barrett食管黏膜组织中的表达
【关键词】 barrett食管;p物质；免疫组织化学
【摘要】 目的 研究p物质在barrett食管（be）黏膜组织中的表达，探讨其在be发病中的作用。方法应用免疫组织化学方法测定p物质在正常对照组(n=25)及be组(n=58)中的表达，并比较p物质在不同化生程度、伴或不伴胆汁反流be组中表达的差异。结果 p物质在be中的表达低于对照组，且胃化生（+）be组p物质表达高于肠化生（+）be组，差异均有显著性（t=9.98、3.25,p＜0.05)；伴胆汁反流be组p物质表达明显低于不伴胆汁反流be组（t=3.04,p＜0.05)，而伴胆汁反流be组肠化生阳性率高于不伴胆汁反流be组，差异有显著性（χ2=4.99,p＜0.05)。结论 be组存在p物质分泌失调，其可能在be的发生发展中起着一定作用；胆汁反流可能影响be黏膜p物质的分泌，而与肠化生的发生可能有关。
【关键词】 barrett食管;p物质；免疫组织化学
the expression of substance p in mucosa of barrett esophagus
wang shuping, wei hongjun, wang qing, et al
(department of gastroenterology, the affiliated qingdao municipal hospital of qingdao university medical college, qingdao 266071, china) ;
［abstract］ objective to study the expression of substance p (sp) in mucosa of barrett esophagus (be) and its role on pathogenesis of be. methods immunohistochemistry technique was applied to detect the expressions of sp in mucosa of normal esophagus and be, and compare the differences of sp expression in different extents of metaplasia in be with or without bile reflux. results expression of sp in mucosa of be was significantly lower than that of the normal esophagus, and its expression in mucosa of the be with gastric metaplasia was significantly higher than that with intestinal metaplasia (t=9.98,3.25;p<0.05); moreover, expression of sp in mucosa of be with bile reflux was lower than that of be without reflux (t=3.04,p＜0.05). positive rate of intestinal metaplasia found in be with bile reflux was significantly higher than that be without reflux (χ2=4.99,p<0.05). conclusion dyssecretosis of sp exists in be, which, probably, plays a certain effect on the occurrence and development of be. the bile regurgitation may influence the secretion of sp in mucosa, which is likely to be involved in the intestinal metaplasia.
［key words］ barrett esophagus; substance p; immunohistochemistry
barrett食管（be）由barrett于1950年提出。Www.11665.cOm近年来,be及其相关食管腺癌的发生率明显提高, 西方国家尤其明显, 在有反流症状的病人中be的发生率可达15%, 每年大约有1% 的be病人发展为食管腺癌[1]。p物质(sp)为脑肠肽，它可调节食管下括约肌压力(lesp)，与胃食管反流的发生相关。本研究采用免疫组织化学方法研究be黏膜组织中p物质的表达，以探讨p物质在be发病中的作用。现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
所有研究对象均选自2007年1月—2009年8月我院消化内科及胃镜室的受检查，其中be组58例，正常对照组25例。be组，男31例，女27例，年龄20～82岁，平均(51.47±13.52)岁；其中be 胃化生（+）40例，be 肠化生（+）18例。伴或不伴胆汁反流be组分别为11、47例。病人均符合2006年美国胃肠病学会公布的蒙特利尔定义中关于be的诊断标准[2]。排除标准：有胃肠道器质性病变者，严重的心、肺、肾、内分泌疾病及神经性疾病者；曾行脑部、食管、胃肠道及胆管等手术者；有精神障碍者；近2周应用抑酸药物或胃肠动力药物者；孕妇或哺乳期妇女及拒绝取食管活检者等。正常对照组25例,男13例，女12例；年龄28～66岁，平均（47.70±14.68）岁。正常对照组入选标准：①胃镜检查结果食管部分正常，镜下齿状线清晰；②无反酸、胃灼热、胸痛等表现者。
1.2 主要试剂
兔抗人p物质多克隆抗体由北京中杉金桥生物公司生产；envision及dab显色试剂盒由福建迈新公司提供。
1.3 方法
内镜检查由同一名有经验的内镜医师进行。取食管下段内镜疑似食管化生（esem）部位的黏膜组织2块。所取黏膜组织使用40 g/l的甲醛溶液固定，24 h内脱水、包蜡，然后切片。采用免疫组织化学pv 9000法测定黏膜组织p物质的表达。选取正常小肠组织作为阳性对照；以pbs代替一抗作为空白对照。
1.4 结果判定
p物质主要在上皮层细胞胞浆表达，以胞浆呈细颗粒状棕黄色、棕褐色为染色阳性。在olympus bx51 光学显微镜下观察食管黏膜组织p物质阳性产物的分布和形态。首先低倍镜下观察阳性分布情况，高倍镜下(400倍)观察其阳性表达情况，并随机选取互不重叠的5个视野，用vidas计算机图像分析系统测定每个视野阳性染色累积吸光度（a）值。累积a值=染色强度×染色面积，取其平均值作为该切片食管黏膜组织p物质的表达水平。
1.5 统计分析
采用ppms 1.5[3]统计软件进行统计分析，计量资料数据以±s表示，两组比较采用t检验；率的比较采用χ2检验。
2 结果
2.1 p物质在两组中的表达
正常对照组与be组食管黏膜组织p物质的表分别为26.98±4.03、15.68±4.99， be组食管黏膜组织p物质的表达明显低于正常对照组，差异有显著性（t=9.98，p＜0.05）。
2.2 不同化生类型be组食管黏膜组织p物质的表达
肠化生（+）be组及胃化生（+）be组病人食管黏膜组织中p物质的表达分别为13.57±4.81、17.52±4.45，两组比较差异有显著意义（t=3.25，p<0.05）。
2.3 伴或不伴胆汁反流be组p物质表达及肠化生阳性率比较
伴或不伴胆汁反流be组p物质的表达分别为11.83±4.95、16.58±4.61，伴胆汁反流be组食管黏膜组织p物质表达明显低于不伴胆汁反流be组，差异有显著性（t=3.04，p＜0.05）。伴或不伴胆汁反流be组发生肠化生者分别为7、11例，伴胆汁反流be组肠化生阳性率明显高于不伴胆汁反流be组，差异有显著性（χ2=4.99，p＜0.05）。
3 讨论
be为胃食管反流病的食管并发症之一。关于be的发病机制，较多学者认为是胃十二指肠内容物反流刺激食管黏膜，食管下段黏膜复层鳞状上皮的多能干细胞在反流物的不断刺激下,其促上皮生长因子受体被激活, 进而引发了细胞分化异常[45]，化生为耐酸的柱状上皮。而单独的十二指肠胃反流被认为不但可引起be，且其可能是be发生的最重要的独立因素[6]。
p物质是由11 个氨基酸组成的脑肠肽,在全身均有分布,以胃肠道和中枢神经系统浓度最高。它为一种兴奋性肽能神经递质，可引起食管下段括约肌（les）收缩。曾有学者给负鼠静脉注射p物质，结果显示负鼠的lesp明显升高。smid 等[7]对伴反流的be病人，用p物质刺激les，但并未显示明显的les收缩。本文实验结果显示，be组p物质表达明显低于正常对照组，推测be存在p物质的分泌失调，抑制了les收缩，进而加重反流，导致食管黏膜损伤。较早研究显示，p物质通过作用于cajal间质细胞（icc）调节食管下段平滑肌的收缩功能。jason 等[8]研究显示，p物质直接作用于平滑肌上特异受体，引起非选择性内向电流导致细胞膜去极化，lca2+通道开放，导致肌细胞内ca2+释放，引起les的收缩。
伴肠化生的be被认为是食管腺癌的癌前病变。但be肠化生发生机制仍尚不清楚。hackelsberger等[9]研究显示，胃食管反流为be肠化生的高风险因素。本研究显示，肠化生（+）be组p物质表达较胃化生（+）be组低，可能be的化生程度影响黏膜组织p物质的表达，这与oberg等[10]的研究结果相符。肠化生（+）be组与胃化生（+）be组比较，可能存在更明显的食管黏膜神经递质的表达失调，推测肠化生（+）be组反流重于胃化生（+）be组，肠化生（+）be可能是伴或不伴胆汁反流be组胃化生（+）be进一步被反流物刺激所致。p物质的分泌失调，是否在肠化生癌变的发展中亦起一定作用，仍需进一步探讨。
胆汁反流由十二指肠胃反流所致，主要为胆汁酸、胰液等的反流。胆汁反流引起be的机制：胆汁反流能破坏细胞膜从而使得食管上皮通透性增高，胆汁酸则可诱导细胞形成囊泡,最终导致细胞器损伤、细胞膜渗漏及细胞破裂。有研究显示，非糜烂性食管炎病人，胆汁酸可刺激p物质的释放[11]。亦有研究显示，胃动素、p物质、生长抑素水平与十二指肠胃反流的发生无关。而本研究显示，在be伴胆汁反流组食管黏膜p物质的表达降低，可能胆汁反流物抑制了p物质的分泌，或反流物对食管黏膜的损伤导致p物质分泌的减少。
国内外文献均证实，胆汁反流性胃炎与胃黏膜肠化生、萎缩有关[12]。胆汁反流可能是特异性肠上皮化生发生、发展至食管黏膜恶变病理过程的重要致病因素[13]。本研究结果显示，伴胆汁反流be组中食管肠化生的发生率偏高，表明胆汁反流在食管肠化生的发生中亦起一定作用。可能胆汁反流物影响p物质的分泌，lesp下降，反流加重，使反流物与食管黏膜接触时间延长，导致食管的肠化生。
综上所述，p物质为一种兴奋性神经递质，它参与胃食管反流的调节，在be的发生发展中起一定作用。同时，胆汁反流可能影响p物质的分泌，且与食管肠化生发生相关。因此，对p物质的研究可能对barrett食管发病机制的探究有较大帮助。
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