【摘要】  目的 阐释金玄痔科熏洗散抗炎和镇痛作用的物质基础。方法 采用蛋清致大鼠足跖肿胀实验及二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验,观察金玄痔科熏洗散提取纯化物质的抗炎作用;并采用热板致痛实验观察其对小鼠的镇痛作用。结果 金玄痔科熏洗散方中的超临界co2萃取物、皂苷与黄酮合提物和矿物药分别对蛋清所致大鼠足跖肿胀具有消肿作用,皂苷与黄酮合提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的急性炎症模型有显著抑制作用,3种药物组分均对热刺激所致小鼠疼痛有明显的镇痛作用,可显著提高痛阈值。结论 金玄痔科熏洗散有效部位群为超临界co2萃取物、皂苷与黄酮合提物和矿物药。

【关键词】  金玄痔科熏洗散;抗炎镇痛;超临界co2萃取物;皂苷与黄酮合提物;矿物药

study on active sites of anti-inflammatory and analgesic in jinxuan zhike xunxi san zhang wen-ying, zhou lu, wen li, et al (hubei key laboratory of resource science and chemistry in chinese medicine, hubei college of tcm, wuhan 430061, china)

　　abstract：objective to explain the material foundation of anti-inflammatory and analgesic effects of jinxuan zhike xunxi san. methods the foot swelling experiments in rat and xylene-induced ear edema experiments in mouse were adopted to observe the anti-inflammatory effects of the material extracted and purified from jinxuan zhike xunxi san. the hot plate-induced pain experiment for studying the analgesic effect was established. results the material of supercritical co2 extract, saponins and flavonoids extract and minerals in jinxuan zhike xunxi san had a inhibiting effect on egg-induced foot swelling in rat, saponins and flavonoids extract had a distinct inhibiting effect on xylene-induced ear edema in mouse. every extract had obvious analgesic effects on hot plate-induced pain and significantly increased the threshold of pain. conclusion the active ingredient groups of jinxuan zhike xunxi san are the material of supercritical co2 extract, saponins and flavonoids extract and minerals.

　　key words：jinxuan zhike xunxi san;anti-inflammatory and analgesic;the material of supercritical co2 extract;the saponins and flavonoids extract;minerals

　　金玄痔科熏洗散为武汉马应龙药业集团股份有限公司生产的中药制剂,是著名老中医陈继民在多年临床经验基础上研制开发的新药品种。WWw.11665.Com该制剂由玄明粉、马齿苋、金银花、枯矾、荆芥组方制成,为浅棕黄色粉末剂,具有清热解毒、消肿止痛、祛风燥湿之功效。为探讨该制剂的药效物质基础,笔者对其各化学物质部位进行了药理筛选研究,以期探讨金玄痔科熏洗散的药效物质基础,为其临床治疗痔科疾患提供科学依据。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　　昆明种小鼠,18～22 g,雌性;wistar大鼠,雄性,120～150 g,均为spf级,湖北疾病预防医学科学院动物中心提供,动物许可证号：scxk(鄂)2008-0005。

　　1.2 药物与仪器

　　金玄痔科熏洗散,武汉马应龙药业集团股份有限公司生产,批号090311;空白对照药：双蒸水,实验室自制;玄明粉、马

　　齿苋、金银花、枯矾、荆芥为马应龙药业集团股份有限公司提供;金玄痔科熏洗散超临界co2萃取物、大孔吸附树脂水洗部位和大孔吸附树脂醇洗部位(皂苷与黄酮合提物)由本实验室自制。分析天平bp211d,电子天平ja2003,恒温水浴锅。

　　1.3 供试药物的制备

　　金玄痔科熏洗散的药液制备：取金玄痔科熏洗散药粉283 g,加入1 ml吐温80,继加入双蒸水至1 000 ml,配制成相当于0.49 g原药材/ml的药液。超临界co2萃取物的药液制备：按金玄痔科熏洗散处方配伍比例,取植物药金银花、荆芥和马齿苋10 kg,采用超临界co2萃取得超临界co2萃取物360 g,取超临界co2萃取物37.4 g,加入1 ml吐温80,继加入双蒸水至1 000 ml,配制成相当于1.04 g原药材/ml的药液。大孔吸附树脂纯化物的药液制备：萃取后的药渣以60%乙醇渗漉,收集渗漉液100 l,浓缩至25 l,加入d101大孔吸附树脂柱,分别用水和70%乙醇洗脱。收集水洗部位150 l,浓缩至7.2 l,取浓缩液754 ml,加入1 ml吐温80,继加入双蒸水至1 000 ml,配制成相当于1.04 g原药材/ml的药液;收集70%醇洗部位250 l,浓缩至8.6 l,取浓缩液897 ml,加入1 ml吐温80,继加入双蒸水至1 000 ml,配制成相当于1.04 g原药材/ml的药液。矿物药液的制备：取玄明粉313 g,枯矾157 g,加入1 ml吐温80,继加入双蒸水至1 000 ml,配制成相当0.47 g原药材/ml的药液。

　　2 统计学方法

　　应用spss13.0统计软件进行方差齐性分析,各组采用lsd检验,计数数据以x±s表示。

　　3 实验方法及结果

　　3.1 对蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响[1-2]

　　选取wistar大鼠100只,按体重随机分成10组,即空白对照组(空白组)、金玄痔科熏洗散组(金玄组)、超临界co2萃取物高剂量组(萃高组)、水洗部位高剂量组(水高组)、皂苷与黄酮合提物高剂量组(合高组)、矿物药高剂量组(矿高组)、超临界co2萃取物低剂量组(萃低组)、水洗部位低剂量组(水低组)、皂苷与黄酮合提物低剂量组(合低组)、矿物药低剂量组(矿低组)。每组按表1所示剂量,每日于40 ℃以300 ml药液熏洗30 min,空白组在相同条件下以等量的水熏洗,连续6 d。实验当日于每鼠右后足踝关节处用记号笔作一清晰横线,测量大鼠足趾容积为原始足跖容积。于每鼠右后足跖皮下注射50%蛋清溶液0.05 ml之后立即给药1次,分别于1、2、4、7 h测量鼠足跖容积,计算足跖肿胀率[足跖肿胀率(%)=(肿胀后各时间点足容积-肿胀前足容积)/肿胀前足容积×100%]。结果见表1。表1 对蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响注：与空白组相同时间点比较,★p<0.05,★★p<0.01(下同)

　　3.2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[2-3]

　　取昆明种小鼠100只,均为雌鼠,体重20～22 g,按体重分层随机分成10组(同“3.1项”分组)。每组按表2所示剂量,每日用40 ℃药液1 ml涂抹右耳1次,30 min后重复1次,空白组在同等条件下用等量水涂抹,连续6 d。于末次给药30 min后,将二甲苯0.05 ml涂抹于小鼠右耳两面,左耳不涂作为对照,15 min后将小鼠脱颈椎处死,用直径9 mm的打孔器分别在小鼠左、右耳同一部位打下圆耳片,精密称重,计算耳肿胀度[耳肿胀度(%)=(右耳重-左耳重)/左耳重×100%]。结果见表2。

　　3.3 对热刺激所致小鼠疼痛的影响[2-3]

　　取雌性昆明种小鼠,体重18～22 g,选取基础痛阈在10～30 s之间的小鼠120只,按体重分层随机分成10组(同“3.1项”分组)。每组按表3所示剂量,每日用40 ℃、30 ml药液泡足30 min,空白组在同等条件下用等量的水泡足,连续5 d。于实验前日测定小鼠的基础痛阈。测量给药后30、60、90 min的小鼠痛,比较各组间痛阈差异。结果见表3。表2 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响表3 对热板所致小鼠痛阈的影响

　　4 讨论

　　中医理论认为,肛肠疾患多为风、湿、热、瘀侵袭人体所致,痔疮是肛肠疾病中的常见病和多发病。中药熏洗疗法是中医学治疗肛肠疾病的一种独特方法,相对于口服、外用膏栓剂等给药途径具有明显优势,先熏后洗能使药物直接作用于肛肠的病变部位,令患处腠理舒畅、气血流通。金玄痔科熏洗散方中君药玄明粉清热消肿,臣药马齿苋和金银花清热解毒、凉血消肿,佐药枯矾和荆芥收湿敛疮、止血化腐、祛风胜湿。诸药合用,共奏清热解毒、消肿止痛、祛风燥湿之功效。

　　为阐释金玄痔科熏洗散抗炎镇痛的药效物质基础,笔者采用热板法疼痛模型和蛋清致大鼠足跖肿胀、二甲苯致小鼠耳廓肿胀等急性炎症模型,将方中植物药视为整体,对其不同提取纯化物质部位及矿物药进行筛选研究,并与金玄痔科熏洗散进行比较。研究结果表明,金玄痔科熏洗散对蛋清所致大鼠足跖肿胀、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀等急性炎症模型均有明显的抑制作用,对热刺激所致小鼠疼痛有明显的镇痛作用。综合比较,金玄痔科熏洗散方中3味植物药不同提取纯化物质部位及矿物药的药理作用,皂苷与黄酮合提物抗炎镇痛作用最强,其次是超临界co2萃取物和矿物药部分。提示金玄痔科熏洗散抗炎镇痛的药效物质基础为方中多种物质的协同作用。

【参考文献】
  　[1] 李仪奎.中药药理实验方法学[m].上海：上海科学技术出版社,1991. 300.

　　[2] 李国栋,贾 菲.金玄痔疮熏洗剂的药效学研究[j].中国临床医生杂志, 2007,35(11)：46-48.

　　[3] 徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学[m].第3版.北京：人民卫生出版社,2002.882.