【关键词】 mmp 9 rab5a 胃癌 免疫组化
胃癌的发生发展是一个长时间多步骤多阶段逐步演进的过程。我们采用免疫组化法检测46例胃癌组织，癌旁及正常组织中mmp9和rab5a蛋白的表达，旨在探讨其在胃癌形成过程中的变化规律及其与临床病理特征的相互关系。
1 资料与方法
1.1 临床资料
收集河北医科大学附属第二临床医院2004年10月～2005年10月间手术切除的胃癌标本46例，其中男性35例，女性11例，在院期间年龄最大85岁，最小27岁，平均年龄56.44岁；收集外伤和良性溃疡标本12例作为对照。均经4g/l甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片，he染色病理确诊，所有患者术前均未接受放、化疗。
1.2 实验方法
应用免疫组织化学sp染色法。一抗分别为小鼠抗人mmp9单克隆抗体和兔抗人rab5a单克隆抗体，购自美国santacruz公司。sp试剂盒和dab染色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。sp染色主要步骤参考试剂盒说明进行，光镜下观察结果。用已知阳性切片作为阳性对照，pbs代替一抗作为阴性对照。www.11665.com
1.3 结果判断
只有明显胞浆染色的细胞被判定为正常染色；如染色不连续，明显减弱或缺失，则被评定为不正常染色。染色阳性结果判断：染色定位于胞膜和（或）胞浆并行定性分析。按染色阳性细胞数分ⅳ级计分：阴性为0分（－），0%＜y≤25%为1分，25%＜y≤50%为2分，50%＜y为3分；染色强度计分（分四级）：染色无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；采用阳性强度积分与阳性数量积分相加，阳性强度上，阳性细胞在阳性数目上所占比例（y）：染色强度积分与阳性数量积分相加，0分为（－），2分为（+），3～4分为（++），5～6分为（+++）。本试验将（－）和（+）记为阴性结果，将（++）和(+++)记为阳性结果。
1.4 统计学方法
应用spss13.0统计学软件。χ2检验分析各研究对象间mmp9、rab5a的表达差异，p＜0.05为差异有统计学意义， mmp9和rab5a之间的相关性用spearman等级相关分析。
2 结果
2.1 mmp9在胃癌原发灶中和癌旁3.0cm组织中的表达 mmp9在胃癌原发灶中表达明显增高[1]。mmp9在癌旁3.0cm组织中的表达增高，与原发灶中的表达差异无统计学意义，见表1。mmp9在胃癌组织中的表达与年龄、性别、肿瘤大小差异无统计学意义；与组织学类型，侵及范围，淋巴结转移差异有统计学意义，见表2。表1 mmp9 和rab5a在不同部位的表达情况
组别例数mmp9rab5a阳性数阳性率%阳性数阳性率%胃癌组①463882.613678.26癌旁3.0cm②463065.222963.04正常胃粘膜③120000
mmp9：①与③比较，χ2=25.208，p=0.001; ②与③比较，χ2=16.211，p=0.001；rab5a：①与③比较，χ2=21.546，p=0.001; ②与③比较，χ2=15.130，p=0.0012.2 rab5a在胃癌原发灶和癌旁3.0cm中的表达 在胃癌原发灶中rab5a的表达明显升高。在癌旁3.0cm组织中的表达增高，二者差异无统计学意义，见表1。rab5a在胃癌中表达与年龄、性别、肿瘤大小差异无统计学意义；与组织学类型，侵及范围，淋巴结转移差异有统计学意义，这与相关研究一致[2]，见表2。
2.3 mmp9和rab5a在正常胃粘膜中的表达
mmp9在正常胃粘膜（外伤或病理证实为良性表2 mmp9 和rab5a在胃癌中的表达与其临床病理特征之间的关系
临床资料例数mmp9阳性数阴性统计量prab5a阳性数阴性数统计量p年龄≤55752＞55393360.0940.760433270.9480.330性别男35305女11830.2870.592278920.0001.000直径≥3cm32275<3cm141130.0030.9562661040.1260.723组织学类型高分化826中低分化腺癌3836217.7800.0012634412.5800.001浸润范围肌层1275浆膜层343134.5700.0335731310.0350.002淋巴结转移无1486有323026.7150.0106830211.9860.001
溃疡）中表达阴性，与胃癌原发灶比较差异有统计学意义。rab5a在正常胃粘膜中表达阴性，与原发灶比较差异有统计学意义，见表1。
2.4 胃癌组织中 mmp9与rab5a表达的相关性 实验证明mmp9与rab5a在胃癌组织中的表达具有正相关性，见表3。表3 mmp9与rab5a在胃癌组织中的表达情况
癌组织mmp9＋－rprab5a＋342－460.5920.000
3 讨论
mmp9是一种加速肿瘤浸润、转移的蛋白水解酶，其表达量的增加使得原本均匀、稳定的基底膜和细胞外基质结构被降解破坏，为肿瘤细胞的转移开辟道路[3]。rab5a作为位于细胞膜、质膜内体的重要蛋白运输和gdp/gtp循环的调控因子，对细胞的功能起关键性的作用[4]，可引起细胞生长调控紊乱，无限生长、增殖，最终导致细胞癌变。本次研究发现两者在分化程度较低，有淋巴结转移，侵及全层的胃癌组织中出现更高的表达，同时mmp9和rab5a的正相关性可能说明两者均能促进恶性肿瘤的浸润和转移，两者在肿瘤发生发展的过程中互相促进，共同加快肿瘤的进展。mmp9作为金属蛋白酶破坏了基底膜iv型胶原，使基底膜失去其完整性，这就为肿瘤的转移创造了先决条件， rab5a基因突变引起细胞生长调控紊乱，无限生长、增殖，从而与mmp9一起导演了肿瘤从增殖到转移的过程。与单因素肿瘤研究相比，mmp9 和rab5a的研究结果为肿瘤的转移机制研究提供更加全面的思路和方法同时也为肿瘤的诊断和早期治疗提供了依据。但是肿瘤进展是多个基因以正或负的调节方式协同表达的结果，因此，mmp9 和rab5a的研究还不足以全面解释肿瘤细胞的发生发展的机制，且两者在共同作用促进肿瘤进展的具体机制还有待于进一步研究。
【参考文献】
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