【摘要】 目的 建立疣清颗粒质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对制剂中香附、白芍进行定性鉴别；对组方中有效成分黄芪甲苷用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(rp-hplc-elsd)进行定量分析。结果 薄层色谱中斑点清晰,易于识别；rp-hplc-elsd法精密度、重现性良好,黄芪甲苷在1.032～5.16 μg范围内具有较好的线性关系,平均加样回收率为99.051 6%,rsd＝1.05%。结论 在本研究基础上制定的质量标准可以控制本品的内在质量,方法是可行的。
【关键词】 疣清颗粒；黄芪甲苷；反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法；薄层色谱法
abstract：objective to establish the quality control method for youqing granules. methods qualitation discrimination of rhizoma cyperi and raidix paeoniae in this formula was identified by tlc. quantitive analysis of astragaloside a which is the effective element of the formula was adopted by rp-hplc-elsd. result the specks in tlc were clear and easy to discriminate. the precision and reproducibility of the rp-hplc-elsd method were fine. in 1.032～5.16 μg, the content of astragaloside a had good linear relationship. the average recovery rate of sample was 99.051 6%, and rsd＝1.05%. conclusion the quality standard established on this study can control the quality of the products, the method is viable.
key word：youqing granules；astragaloside a；rp-hplc-elsd；tlc
疣清颗粒由黄芪、白芍、香附、薏苡仁等药物组成,具有清热解毒、托毒排脓、敛疮生肌功效,主要用于治疗尖锐湿疣等皮肤病。wWW.11665.cOm本试验采用薄层色谱法对方中黄芪、香附、白芍进行薄层鉴别。黄芪是方中主药,因此,选定黄芪甲苷为该制剂的含量测定项目,采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(rp-hplc-elsd)进行检测,以制定该制剂的质量控制标准。
1 仪器、试剂与药品
日本岛津hw-2000高效液相色谱仪(日本岛津公司)；kq-500e型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)；td5a低速台式离心机(长沙湘仪离心机有限公司)；ay220电子天平(岛津)；lichropher c18(5 μm,4.6 mm id×15 cm)色谱柱(淮阴汉邦科技有限公司；硅胶g(青岛海洋化工厂)。
黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为110781-200511)。黄芪、白芍、薏苡仁、香附等药材购自辽宁省药材公司,经鉴定,符合2005年版《中华人民共和国药典》(一部)有关标准。疣清颗粒样品自制,批号为060611,060613, 060615。甲醇为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 白芍 [1]
取本品3 g,加乙醇10 ml,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取白芍对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。再取除白芍外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺白芍的阴性样品,取适量阴性样品同法制成缺白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅵb]试验,分别吸取上述3种溶液10 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以二氯甲烷-甲醇-丙酮(8∶4∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
2.1.2 香附[2]
取本品4.6 g,加温水(50 ℃)30 ml,超声处理10 min,水溶液用乙醚提取2次,每次30 ml,合并乙醚液,挥去乙醚,残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取香附对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。另按处方及工艺分别制备不含香附的阴性样品,同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅵb]试验,吸取上述溶液各5 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以二氯甲烷-甲苯(3∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液,放置1 h,斑点渐变为橙红色,而阴性对照液在相应位置上无此斑点。
2.2 黄芪甲苷的含量测定
2.2.1 色谱条件[3]
色谱柱为lichrospher c18(5 μm,4.6 mm id×15 cm,淮阴汉邦科技有限公司)；流动相：甲醇-水(80∶20)；流速：1 ml/min；柱温：25 ℃。elsd检测温度：92 ℃；气体流量2.24 l/min。
2.2.2 对照品溶液的制备和线性关系的考察
精密称取黄芪甲苷对照品5.16 mg置于10 ml容量瓶中并定容至刻度,得到浓度为0.516 mg/ml的对照品溶液。分别取对照品溶液,用甲醇稀释成0.103 2、0.206 4、0.309 6、0.412 8、0.516 mg/ml黄芪甲苷溶液,按上述色谱条件测定。以黄芪甲苷的进样量常用对数为纵坐标,黄芪甲苷的峰面积常用对数为横坐标,回归得标准曲线：loga＝0.779 133logc＋7.380 524,r＝0.999 973。结果表明,黄芪甲苷的进样量在1.032～5.16 μg范围内,与其峰面积有良好的线性关系。
2.2.3 供试品溶液的制备与测定
取疣清颗粒2.5 g,混匀,精密称定,置于锥形瓶中,加水50 ml,浸泡30 min,超声波处理30 min,放冷,用水饱和正丁醇萃取3次(40、40、30 ml),分取正丁醇层置于上述分液漏斗中,加入40%氨试液洗涤2次,每次40 ml,弃去氨试液,分取正丁醇提取液,水浴蒸干,残渣加蒸馏水3～5 ml溶解,放冷,通过d101大孔树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水50 ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 ml洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继续用70%乙醇50 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇转移并定容至5 ml容量瓶中。从该溶液中取一部分用0.45 μm微孔过滤器过滤后即得疣清颗粒供试品溶液。取上述供试品溶液10 μl注入液相色谱仪,测定峰面积。
2.2.4 精密度考察
按选定的黄芪甲苷hplc测定条件,精密吸取同一对照品溶液,进样10 μl,重复进样6次,测定黄芪甲苷峰面积,结果rsd＝1.19%(n＝6)。
2.2.5 重复性试验
精确称取疣清颗粒2.5 g,共6份,按上述供试品溶液的制备方法制备,各进样10 μl,每份样品进2针,测定黄芪甲苷峰面积,rsd＝0.92%(n＝6)。
2.2.6 稳定性考察
将同一样品溶液,在0、2、8、12、16、20 h分别进样10 μl,记录峰面积,结果表明,峰面积的rsd＝0.71%(n＝6)。说明供试品溶液在20 h内是稳定的。
2.2.7 加样回收率试验
取已测知含量的样品适量,共6份,分别加入等同于样品中黄芪甲苷含量80%、100%、120%的黄芪甲苷对照品,按“2.2.3”项下同法测定,用外标两点法计算含量。结果见表1。表1 黄芪甲苷加样回收率测定结果（略）
2.2.8 含量测定
取疣清颗粒3批样品(自制,批号为060611、060613、060615),按供试品溶液制备方法制备样品液,按上述色谱条件进行测定,进样10 μl,每份重复进样2次,测定疣清颗粒中黄芪甲苷含量。结果见表2。表2 疣清颗粒样品含量测定结果(略)
3 讨论
疣清颗粒中白芍、香附薄层鉴别与阴性对照品相比无干扰,且重现性较好。香附薄层色谱鉴别参照有关文献报道,喷以2,4-二硝基苯肼乙醇试液,放置片刻后斑点显现不明显,根据试验结果,需放置1 h后斑点渐显,且在较长时间内斑点明显,不褪色。黄芪甲苷含量测定方法已报道有比色法、薄层扫描法、hplc法等,其中hplc法大多用紫外检测器于203 nm处检测。在预试验中,曾使用紫外检测器检测,结果干扰较大,基线漂移严重,测定结果不稳定,而改用rp-hplc-elsd进行检测,空白无干扰,结果准确可靠,重现性好,适合于疣清颗粒的质量控制。
【参考文献】
[1] 郭 炜,袁志芳,张兰桐.归芍软胶囊质量标准研究[j].中成药,2006, 28(3)：351.
[2] 覃金玲,廖建维,冯灵平,等.逍遥妇乐颗粒质量标准研究[j].中药新药与临床药理,2006,17(2)：127.
[3] 黎俊华.复方止血颗粒的质量标准研究[j].中国药房,2006,17(8)：615.
