【摘要】 目的 测定贵州产五倍子中没食子酸的含量,并评价贵州不同产地五倍子的质量。方法 采用hplc法测定贵州不同产地五倍子中没食子酸的含量。色谱柱为alltima c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；以甲醇-水-磷酸(15∶85∶0.085)为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长为270 nm。结果 贵州不同产地五倍子中没食子酸的含量为51.43%～60.25%。结论 贵州不同地区五倍子质量均高于2005年版《中华人民共和国药典》(一部)要求,各地区之间有明显差异。
【关键词】 贵州；五倍子；没食子酸；含量测定
abstract：objective to determine the content of gallic acid and evaluate the quality of galla chinensis of different habitats in guizhou province. methods hplc method was used to determine the content of gallic acid on alltima c18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with the mobile phase of methanol-water-phosphoric acid (15∶85∶0.085). the flow rate was 1.0 ml/min and the detective wave length was 270 nm. results the contents of gallic acid in galla chinensis of 10 different habitats in guizhou province were 51.43%～60.25%. conclusion the quality of galla chinensis in different habitats in guizhou province are up to the chinese pharmacopoeia, and the individual varibility is significant.
key words：guizhou；galla chinensis；gallic acid；content determination
五倍子(galla chinensis)为漆树科植物盐麸木rhus chinensis mill.、青麸杨rhus potaninii maxim.或红麸杨rhus punjabensis stew.var sinica (diels) rehe.et wils.叶上的虫瘿,主要由五倍子蚜melaphis chinensis (bell) baker 寄生而形成。WWW.11665.coM具有敛肺降火、涩肠止泻、固精缩尿、收敛止汗、止血、解毒、敛疮的功效,可治肺虚久咳、久痢久泻、外伤出血、肿毒、疮疖[1]。五倍子中主要含有鞣酸和没食子酸(gallic acid)。本试验通过测定五倍子中没食子酸的含量,评价了贵州不同产地五倍子的质量。
1 仪器与试药
lc-20at高效液相色谱仪(spd-20a检测器,lcsolution/ lite工作站)；远红外干燥箱(yhg-600-s-ⅱ,上海贺德实验设备有限公司)；十万分之一电子天平(auw220d,岛津),超声清洗机(hs10260d,天津恒奥科技公司)。
没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110770- 2005110)；甲醇(色谱醇,天津科密欧公司)；水(重蒸水)；其余试剂均为分析纯。
五倍子药材于2007年10月采自贵州省都匀、清镇、赤水、关岭、镇远、花江、坪坝、沿河、遵义、道真。经贵阳中医学院生药教研室周汉华副教授鉴定为五倍子。样品粉碎后过40目筛,保存。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品5.68 mg,用甲醇定容至100 ml,溶解,即得浓度0.056 8 mg/ml的没食子酸对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备
取本品粉末(过4号筛)约0.5 g,精密称定,精密加入4 mol/ml盐酸溶液50 ml,水浴中加热水解3.5 h,放冷,滤过。精密量取续滤液1 ml于100 ml容量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.2 色谱条件
色谱柱为alltima c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；以甲醇-水-磷酸(15∶85∶0.085)为流动相；流速1.0 ml/min；检测波长为270 nm；柱温为30 ℃；理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于3 000；进样量为10 μl。色谱图见图1。
2.3 线性关系考察
取对照品溶液(0.056 8 mg/ml),分别进样2、4、6、8、10、12 μm,以峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为：y＝306 4731x－1 736.434,r＝0.999 9。表明在0.113 6～0.681 6 μg浓度范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl,按上述色谱条件测定,连续进样6次,没食子酸蜂面积的rsd＝0.25%。
2.5 重复性试验
精密称取五倍子样品粉末6份,每份约0.5 g,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,在上述色谱条件进行测定。分别求出其含量,计算,平均含量为55.13%,rsd＝2.6%。
2.6 稳定性试验
用考察精密度所用的没食子酸对照品溶液,分别于0、4、8、12、16 h进行测定,计算其rsd＝2.5%,结果表明没食子酸至少在16 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的五倍子样品粉末(清镇)5份,每份约0.25 g,加入没食子酸适量,按供试品溶液的制备方法进行制备,按上述色谱条件进行测定,结果平均回收率为99.86%,rsd＝1.89%。结果见表1。表1 加样回收率测定结果(略)
2.8 样品测定
在上述制备方法和色谱条件下,测定不同产地五倍子药材中没食子酸含量,结果见表2。表2 五倍子样品检测结果(略)
3 讨论
在流动相的选择过程中,我们曾参考文献[2-3]方法,结果表明,以甲醇-0.1%磷酸水溶液系统为流动相测定没食子酸,可使没食子酸的分离度、理论塔板数、峰的对称性及出峰时间达到满意的结果。并通过紫外扫描,最终确定最佳检测波长为270 nm。
分别对提取溶剂的酸度和提取时间以及水浴温度进行了考察,结果表明,盐酸浓度4 mol/l、95 ℃水浴3.5 h时测得没食子酸含量最高,说明已水解完全[3]。
共测定10批五倍子药材,没食子酸的含量在51.43%～60.25%,均达到《中华人民共和国药典》规定的标准[4]。
【参考文献】
[1] 肖培根.新编中药志(第3卷)[m].北京：化学工业出版社,2000.919.
[2] 侯惠婵,梁 前,卢迅聪.五倍子、没食子中没食子酸的含量测定[j].中国药品标准,2005,6(3)：38－39.
[3] 刘起中,张可可.hplc法测定五倍子中没食子酸的含量[j].中草药, 2005,33(5)：42.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.45.
