【摘要】 目的 建立田七颗粒的质量标准。方法 采用tlc法对处方中的三七进行定性鉴别,用hplc法对制剂中人参皂苷rg1与三七皂苷r1进行定量测定。结果 在tlc鉴别中能检出三七,人参皂苷rg1在0.628～5.652 μg(r＝0.999 8)、三七皂苷r1在0.155～1.395 μg(r＝0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.24%(rsd＝0.84%)和99.14%(rsd＝1.13%)。结论 本方法操作简便,准确,重复性好,精密度高,可作为该制剂的质量控制方法。
【关键词】 田七颗粒；薄层色谱法；人参皂苷rg1；三七皂苷r1；高效液相色谱法
abstract：objective to establish the quality standard for tianqi granule. methods radix notoginseng in tianqi granule was identified by tlc. the ginsenoside rg1 and notoginsenoide r1 in tianqi were determined by hplc. result radix notoginseng could be identified by tlc. the linear ranges of ginsenoside rg1 and notoginsenoide r1 were at 0.628～5.652 μg (r＝0.999 8) and 0.155～1.395 μg (r＝0.999 8), respectively. the average recoveries were 99.24% (rsd＝0.84%) and 99.14% (rsd＝1.13%). conclusion the method is simple, accurate and with good reproducibility and high precision, and can be used for quality control of tianqi granule.
key words：tianqi granule；tlc；ginsenoside rg1；notoginsenoide r1；hplc
田七颗粒主要以三七为原料加工制成,具有活血定痛、祛瘀生新的作用。WWw.11665.COm三七主要含人参皂苷rb1、rg1、re和三七皂苷r1等20余种皂苷成分,其中人参皂苷rb1、rg1和三七皂苷r1是含量最高的3个成分,三七皂苷r1又是三七的特征性成分[1]。本试验对制剂的质量标准进行了研究,用tlc法对处方中的三七进行了定性鉴别,并采用hplc法测定田七颗粒中人参皂苷rg1和三七皂苷r1的含量,方法简便,准确,重现性好,可作为该制剂的质量控制方法。
1 仪器与试药
agilent1100系列高效液相色谱仪：g1311a四元泵,g1313a自动进样器,g1379a脱气机,g1314vwd检测器,agilent1100化学工作站；uv-2201型紫外-可见分光光度仪。
田七颗粒,广西玉林制药有限责任公司生产；人参皂苷rg1和三七皂苷r1对照品(供含量测定用,批号：人参皂苷rg1为0703-9914、0703-9813,三七皂苷r1为0745-200109),均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
取本品2 g,研细,加甲醇20 ml,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2 ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺三七的阴性对照品2 g,同法制成阴性对照品溶液。再取人参皂苷rg1、人参皂苷rb1和三七皂苷 r1对照品,分别加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅵb]试验,吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液各2 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与人参皂苷rg1、人参皂苷rb1和三七皂苷r1对照品相应的位置上,显红色的斑点,而阴性对照液无相应斑点。
3 含量测定
3.1 色谱条件
agilent eclipse xdb-c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(18∶82)；流速：1.0 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。理论塔板数按三七皂苷r1计算应不低于3 000。
3.2 对照品溶液的制备
分别精密称取人参皂苷rg1和三七皂苷r1对照品适量,加甲醇制成每1 ml含人参皂苷rg1 0.396 mg和三七皂苷r1 0.092 mg的混合溶液,摇匀,即得。
3.3 供试品溶液的制备
取本品适量,研细,取约1.2 g,精密称定,加水适量使溶解并转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取3次,每次20 ml,合并正丁醇萃取液,加氨试液洗涤2次,每次20 ml,弃去氨试液,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇溶解并移入10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45 μm滤膜滤过,作为供试品溶液。
3.4 空白试验
按处方及制备工艺制备不含三七药材的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备并测定。按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl,分别注入色谱仪,进行测定。结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,分别有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照在此保留时间无干扰(见图1)。因此,可在此系统条件下对人参皂苷rg1和三七皂苷r1进行定量分析。
3.5 线性关系的考察
精密称取人参皂苷rg1对照品31.4 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为人参皂苷rg1对照品贮备液(0.628 mg/ml)。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml,分别置于10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/ml的溶液。分别精密吸取10 μl,注入液相色谱仪,记录峰面积。以人参皂苷rg1对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：y＝209.713x－0.260,r＝0.999 8,人参皂苷rg1在0.628～5.652 μg范围内呈良好的线性关系。
精密称取三七皂苷r1对照品7.75 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为三七皂苷r1对照品贮备液(0.155 mg/ml)。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml,分别置于10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.139 5 mg/ml的溶液。分别精密吸取10 μl,注入液相色谱仪,记录峰面积。以三七皂苷r1对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：y＝208.065x－2.85,r＝0.999 8,三七皂苷r1在0.155～1.395 μg范围内呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
取对照品溶液,重复进样6次,测定峰面积,人参皂苷rg1和三七皂苷r1的rsd分别为0.56%和0.69%,表明精密度良好。
3.7 重复性试验
取同一批号(030102)的田七颗粒,共6份,按“3.3”项制备,进样,测定峰面积,人参皂苷rg1平均含量为3.708 mg/g, rsd＝1.01%；三七皂苷r1平均含量为0.698 mg/g,rsd＝0.92%。
3.8 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液,分别于制备后12 h内每隔2 h进样1次,测定峰面积,人参皂苷rg1和三七皂苷r1的rsd分别为1.52%和1.47%,表明样品溶液在12 h基本稳定。
3.9 加样回收率测定
取已知含量的样品(人参皂苷rg1含量3.708 mg/g和三七皂苷r1含量0.698 mg/g)6份,精密称定,分别精密加入人参皂苷rg1对照品贮备液4.5 ml和三七皂苷r1对照品贮备液3.5 ml,挥干甲醇后,按供试品溶液的制备方法制备,根据上面色谱条件测定峰面积,计算回收率,结果见表1、表2。 表1 人参皂苷rg1加样回收率试验结果（略）表2 三七皂苷r1加样回收率试验结果（略）
3.10 样品测定
分别精密吸取10 μl对照品溶液和供试品溶液,按上述色谱条件,注入色谱仪,测定,结果见表3。表3 样品测定结果（略）
4 讨论
在定性鉴别项下,曾选用氯仿-甲醇-水(65∶35∶10) 10 ℃以下的下层液作为展开剂,但其相对湿度应控制在50%左右,湿度过高容易使斑点变形移位,所以选用了本试验的正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂。在含量测定项下,供试品溶液制备中还比较了另外的提取方法：乙醚脱脂和超声提取,结果比本文的含量稍低,所以选择了本试验的提取方法。参考文献[2],采用乙腈-0.05%磷酸溶液(23∶77),人参皂苷rg1与三七皂苷r1分离好,但人参皂苷rg1与其右侧干扰峰分不开,调整乙腈-0.05%磷酸溶液比例为(18∶82)时,人参皂苷rg1峰形好,跟干扰峰能达到很好的分离效果。
【参考文献】
[1] 饶高雄,王兴文.三七皂甙的检测与分析方法[j].云南中医学院学报, 2001,24(3)：4.
[2] 冯毅凡,孟 青,梁汉明.田七痛经胶囊质量标准研究[j].中成药, 2005,27(10)：1146.
