作者：钱一帆,尹慧晶,狄斌,濮存海
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为甲醇-水-乙酸-三乙胺(88∶12∶0.04∶0.02)；流速为1 ml/min；检测波长为220 nm。结果 在38.88～972.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率为100.81%,rsd=0.54%。结论 本方法简单、灵敏,结果准确、快速,可用于复方灵贞胶囊的质量控制。
【关键词】 复方灵贞胶囊；齐墩果酸；高效液相色谱法；含量测定
abstract：objective to establish a method for determination the content of oleanolic acid in compound lingzhen capsules by hplc. methods c18 column (lichrospher 6.0 mm×150 mm, 5 μm) was applied with ch3oh-h2o-ch3cooh-(c2h5)3n (88∶12∶0.04∶0.02) as its moble phase (flow rate：1 ml/min). detection wavelength was 220 nm. results the linearity of oleanolic acid was in the range of 38.88～972.0 μg/ml, r=0.999 2. average recovery of oleanolic acid was 100.81% with rsd=0.54%. conclusion this method was simple and sensitive, the results were accurate and quick. it is available for the quality control of compound lingzhen capsules.
key words：compound lingzhen capsules；oleanolic acid；hplc；content determination
复方灵贞胶囊由灵芝(ganoderma)孢子粉和女贞子(fructus ligustri lucidi)组成,具有益气养阴、扶正固本的功效。WWW.11665.cOM主要用于气阴两虚证肺癌、胃癌、肝癌患者的辅助治疗。女贞子中所含齐墩果酸为该药的有效成分。2005版《中华人民共和国药典》[1]采用薄层色谱扫描法对女贞子进行质量控制。采用hplc法测定齐墩果酸含量也多有报道[2-6],但样品中的齐墩果酸和熊果酸往往难以分离。本试验参照文献报道,对色谱条件进行摸索选择,建立了采用hplc法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸含量的方法,并进行了方法学研究。
1 仪器与试药
日本岛津lc-10at高效液相色谱仪,spd-10a紫外检测器,n2000色谱工作站。
甲醇为色谱纯,乙酸、乙醇、三乙胺均为分析纯；水为蒸馏水。齐墩果酸对照品(供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所,批号110709-200304；复方灵贞胶囊供试品,南京中科生化技术有限公司生产,批号分别为20030501、20030502、20030503。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为汉邦lichrospher c18(6.0 mm×150 mm,5 μm)；以甲醇-水-乙酸-三乙胺(88∶12∶0.04∶0.02)为流动相；流速为1 ml/min；检测波长220 nm；进样20 μl；柱温为室温。齐墩果酸峰与熊果酸峰分离度大于1.5。见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在60 ℃减压干燥4 h的齐墩果酸对照品适量,加甲醇制成每1 ml约含200 μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10 g,研细,取细粉约150 mg,精密称定,置10 ml容量瓶中,加甲醇约8 ml,超声处理20 min,放冷至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
按处方称取缺女贞子的其它各药味和辅料适量,依制剂工艺制成不含女贞子的阴性对照品,按照“2.3”项下方法依法制成阴性对照品溶液。
2.5 专属性试验
精密吸取阴性对照溶液20 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。另按照“2.2”项下的方法制备对照品溶液,吸取20 μl,注入液相色谱仪进行测定。结果表明,此种方法对本品齐墩果酸含量的测定具有专属性,并且无干扰。
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为甲醇-水-乙酸-三乙胺(88∶12∶0.04∶0.02)；流速为1 ml/min；检测波长为220 nm。结果 在38.88～972.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率为100.81%,rsd=0.54%。结论 本方法简单、灵敏,结果准确、快速,可用于复方灵贞胶囊的质量控制。
【关键词】 复方灵贞胶囊；齐墩果酸；高效液相色谱法；含量测定
determination of oleanolic acid in compound lingzhen capsules by hplc
qian yi-fan, yin hui-jing, di bin, et a
1.nanjing zhongke biochemical technology co.ltd, nanjing 210008, china；2.yanbian university, yanji 133000, china；3.china pharmaceutical university, nanjing 210009, china
abstract：objective to establish a method for determination the content of oleanolic acid in compound lingzhen capsules by hplc. methods c18 column (lichrospher 6.0 mm×150 mm, 5 μm) was applied with ch3oh-h2o-ch3cooh-(c2h5)3n (88∶12∶0.04∶0.02) as its moble phase (flow rate：1 ml/min). detection wavelength was 220 nm. results the linearity of oleanolic acid was in the range of 38.88～972.0 μg/ml, r=0.999 2. average recovery of oleanolic acid was 100.81% with rsd=0.54%. conclusion this method was simple and sensitive, the results were accurate and quick. it is available for the quality control of compound lingzhen capsules.
key words：compound lingzhen capsules；oleanolic acid；hplc；content determination
复方灵贞胶囊由灵芝(ganoderma)孢子粉和女贞子(fructus ligustri lucidi)组成,具有益气养阴、扶正固本的功效。主要用于气阴两虚证肺癌、胃癌、肝癌患者的辅助治疗。女贞子中所含齐墩果酸为该药的有效成分。2005版《中华人民共和国药典》[1]采用薄层色谱扫描法对女贞子进行质量控制。采用hplc法测定齐墩果酸含量也多有报道[2-6],但样品中的齐墩果酸和熊果酸往往难以分离。本试验参照文献报道,对色谱条件进行摸索选择,建立了采用hplc法测定复方灵贞胶囊中齐墩果酸含量的方法,并进行了方法学研究。
1 仪器与试药
日本岛津lc-10at高效液相色谱仪,spd-10a紫外检测器,n2000色谱工作站。
甲醇为色谱纯,乙酸、乙醇、三乙胺均为分析纯；水为蒸馏水。齐墩果酸对照品(供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所,批号110709-200304；复方灵贞胶囊供试品,南京中科生化技术有限公司生产,批号分别为20030501、20030502、20030503。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为汉邦lichrospher c18(6.0 mm×150 mm,5 μm)；以甲醇-水-乙酸-三乙胺(88∶12∶0.04∶0.02)为流动相；流速为1 ml/min；检测波长220 nm；进样20 μl；柱温为室温。齐墩果酸峰与熊果酸峰分离度大于1.5。见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在60 ℃减压干燥4 h的齐墩果酸对照品适量,加甲醇制成每1 ml约含200 μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10 g,研细,取细粉约150 mg,精密称定,置10 ml容量瓶中,加甲醇约8 ml,超声处理20 min,放冷至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
按处方称取缺女贞子的其它各药味和辅料适量,依制剂工艺制成不含女贞子的阴性对照品,按照“2.3”项下方法依法制成阴性对照品溶液。
2.5 专属性试验
精密吸取阴性对照溶液20 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。另按照“2.2”项下的方法制备对照品溶液,吸取20 μl,注入液相色谱仪进行测定。结果表明,此种方法对本品齐墩果酸含量的测定具有专属性,并且无干扰。
2.6 线性关系的考察
取齐墩果酸对照品适量,加甲醇溶解并稀释制成每1 ml含0.972 mg的溶液,作为贮备液；分别精密量取贮备液0.4、1.0、2.0、5.0 ml于10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得一系列浓度为38.88、97.2、194.4、486 μg/ml的齐墩果酸对照品溶液；吸取贮备液和上述4份对照品溶液各进样20 μl,按上述色谱条件测定,记录色谱图。以浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标进行回归,得回归方程为y=3 814.9x–30 769, r=0.999 2。齐墩果酸对照品溶液在38.88～972.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验
2.7.1 重复性试验
取同一批复方灵贞胶囊供试品,照“2.3”项下方法制成供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,1 d内共分析6次,测得平均含量为3.64 mg/粒,rsd=2.0%。表明此方法的精密度良好。
2.7.2 中间精密度试验
不同人员及不同时期每次从独立制样开始,按照“2.3”项下方法制供试品溶液,依上述色谱条件,分别测定齐墩果酸含量,计算中间精密度,结果平均含量为3.59%±6.75%,rsd=1.9%。
2.8 进样精密度试验
精密吸取浓度为194.4 μg/ml的齐墩果酸对照品溶液,按上述色谱条件进行测定,重复进样6次,测得峰面积积分值,rsd=1.7%。结果表明进样精密度良好。
2.9 溶液稳定性试验
取供试品溶液,室温下放置,在0、1、2、4、6、8 h分别进样分析,测得齐墩果酸峰面积,rsd=1.7%。结果表明齐墩果酸含量测定溶液在8 h内是稳定的。
2.10 加样回收率试验
精密称取齐墩果酸对照品适量,用甲醇溶解并稀释制成每1 ml含509.6 μg的溶液作为对照品贮备液；分别精密量取对照品贮备液1.2、2.0、2.8 ml,分别加于约75 mg内容物内,混匀；每个浓度的混合物各配制3份,按上述色谱条件进行测定；测得3个浓度的回收率分别为100.2%±1.0%、100.9%±1.2%、101.3%±1.7%。见表1。 表1 加样回收率试验结果（略）
2.11 含量测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl,依上述色谱条件进行含量测定,结果见表2。表2 样品含量测定结果（略）
3 讨论
复方灵贞胶囊的君药灵芝孢子粉通常用紫外分光光度法测定其多糖成分,干扰因素多,误差比较大,有使用hplc法进行含量测定的报道,但需要衍生化,操作比较繁琐,或者需要特殊的色谱柱和检测器。齐墩果酸为女贞子中的有效成分,采用hplc法测定齐墩果酸的含量所得结果准确、快速,方法可靠,能有效控制本品质量。
hplc法分离齐墩果酸与熊果酸通常较困难,经过摸索,本色谱条件所得谱图基线稳定,齐墩果酸与熊果酸的色谱峰能得到有效分离,且无干扰,为复方灵贞胶囊的质量控制提供了可靠的依据。
【参考文献】
[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[s](一部).北京：化学工业出版社,2005.31.
[2] 石心红.hplc法测定女贞子中齐墩果酸、熊果酸的含量[j].海峡药学,2005,17(4)：41－43.
[3] 徐德然.hplc法测定山茱萸及知柏地黄丸中齐墩果酸、熊果酸的含量[j].中草药,2002,33(11)：996－997.
[4] 赵伟贤.hplc法测定精宝丸中齐墩果酸的含量[j].中国中医药信息杂志,2005,12(5)：46－47.
[5] 王红梅.高效液相法测定生津胶囊中女贞子齐墩果酸的含量[j].黑龙江中医药,2002,(4)：57－58.
[6] 魏舒畅.hplc测定祛斑养颜颗粒剂中齐墩果酸的含量[j].中成药, 2003,25(7)：598－599.
