作者：希尔艾力吐尔逊,吐尔洪卡地尔,斯拉甫艾白

【摘要】  目的 测定祖卡木颗粒中大黄素和大黄酚的含量。方法 采用高效液相色谱法,shim-pack ods c18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),柱温35 ℃,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15),检测波长为254 nm,流速1.0 ml/min。结果 大黄素在0.4～4 μg/ml间呈良好的线性关系,r=0.999 4,平均回收率95.43%,rsd=1.42%；大黄酚在0.848～8.48 μg/ml间呈良好的线性关系,r=0.999 2,平均回收率95.80%,rsd=1.40%。结论 该法具有操作简单、准确的优点,分离效果显著。

【关键词】  祖卡木颗粒；高效液相色谱法；大黄素；大黄酚；含量测定

    abstract：objective to determine the contents of emodin and chrysophonol in qingrejiedu granules. methods hplc method was used. separation was performed on a shim-pack ods c18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), column temperature was 35 ℃. the mobile phase consisting of methanol- 0.1% phosphoric acid water solution (85∶15) and uv detection wavelength at 254 nm, the flow rate was 1.0 ml/min. results emodin showed a good linearity in the range of 0.4～4 μg/ml, r=0.999 4, average reclaim rate was 95.43%, rsd=1.42%. chrysophanol showed a good linearity in the range of 0.848～ 8.48 μg/ml, r=0.999 2, average reclaim rate was 95.80%, rsd=1.40%. conclusion the hplc method was simple, sensitive and specific, easy to operate.

    key words：qingrejiedu granules；hplc；emodin；chrysophanol；content determination

    祖卡木颗粒由大黄、睡莲花、薄荷、菊花等药材经过提取加工浓缩制成的颗粒,具有调节异常气质、清热、解毒的作用。wwW.11665.cOM用于感冒引起的发热无汗、咽喉肿痛、鼻塞流涕。为确保药品质量,我们以方中大黄素及大黄酚作为指标成分,用hplc法进行含量测定,结果被测成分分离完全,操作简单,定量准确[1-2]。

　　1  仪器与试药
   
　　spd-10avp型高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括lc-10atvp泵,spd-10avp检测器,cto-10asvp柱温箱, scl-10avp系统控制器；libroraeg-200电子天平(日本岛津公司)；ls-3120超声波发生器(美国科学系统公司)。

　　祖卡木颗粒由本所自制。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所,批号0766-200011),大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所,批号0736-200116)。硅胶g(青岛海洋化工有限公司生产)。甲醇为色谱级,其它试剂均为分析纯；水为超纯水。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

    shim-pack ods c18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；检测波长：254 nm；流动相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15)；流速：1.0 ml/min；柱温：35 ℃。分别取样品溶液、阴性样品溶液和对照品溶液各10 μl,按上述色谱条件分别进样测定,绘制色谱图,结果理论塔板数大黄素大于4 000,大黄酚大于5 000。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取大黄素、大黄酚对照品各5 mg,分别置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀；分别精密吸取大黄素溶液0.5 ml、大黄酚溶液1 ml,分别置25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,得每1 ml含大黄素2 μg及每1 ml含大黄酚4 μg的溶液。冰箱保存,备用。

　　2.3  供试品溶液的制备

    取本品颗粒适量,研细,精密称取1.0 g,置100 ml圆底烧瓶中,加2.5 mol/l硫酸溶液20 ml,超声处理5 min,再加氯仿20 ml,加热回流60 min,冷却,移置分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,并入分液漏斗中,分取氯仿层,酸液用氯仿提取2次,每次约10 ml,合并氯仿液,移至蒸发皿中,水浴蒸干,残渣加甲醇微热使溶解,放冷后,移至25 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,使用前过0.45 μm微孔滤膜,弃去初滤液,取续滤液,即得供试品溶液。

　　2.4  线性关系的考察

    分别吸取大黄素贮备液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,从中分别取10 μl注入液相色谱仪,测定。以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归,得标准曲线方程为：a=41 711c-1 615.9,r=0.999 4。大黄素在0.4～4 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

    精密吸取大黄酚贮备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0 ml,分别置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,从中分别取10 μl注入液相色谱仪,测定。以进样浓度为横坐标,峰面积为纵坐标进行回归,得标准曲线方程为：a=58 968c-5 672.3,r=0.999 2。结果大黄酚在0.848～8.48 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

　　2.5  阴性试验

    按样品工艺制备缺大黄的阴性对照品,按供试品溶液的制备方法操作,进样10 μl,结果hplc 图谱在与大黄素和大黄酚相应位置上没有吸收峰,表明其他成分对大黄素和大黄酚测定无干扰(见图1)。

　　2.6  精密度试验

    精密量取同一供试品(批号031007),照供试品溶液方法制备,重复进样5次,每次进样10 μl,求得大黄素rsd=1.94%,大黄酚rsd=2.46%。

　　2.7  重现性试验

    取同一批号(批号031007)样品5份进样测定,求得大黄素rsd=1.51%,大黄酚rsd=1.39%。

　　2.8  稳定性试验

    同一批样品(批号031007)分别在同一天的不同时间(每隔2 h)用含量测定方法重复测定5次,计算大黄素和大黄酚总量的rsd=1.16%；同一批样品(批号031007)分别在不同天(连续5 d)用含量测定方法重复测定,计算大黄素和大黄酚总量的rsd=1.98%。

　　2.9  回收率试验

    采用标准添加法测定回收率。精密称取供试品(批号031007)0.5 g,共7份,分别置具塞锥形瓶中,第1、2份作为空白回收,其余5份分别加入浓度为35.0 μg/ml的大黄素对照品溶液1.0 ml,再分别加入浓度为115.0 μg/ml的大黄酚对照品溶液1.0 ml,照2.3项下方法制备,并进样10 μl测定含量。结果大黄素平均回收率为95.43%,rsd=1.42%；大黄酚平均回收率为95.80%,rsd=1.40%。

　　2.10  最小检测限测定及定量限测定

    配制浓度适当的大黄素对照品溶液,进样10 μl,当信噪比s/n为3时,其最小检测浓度约为50 ng/ml。

　　3  结论
   
　　本品为复方制剂,药味复杂,笔者结合该样品的特点对供试品的提取条件进行了考察,结果超声5 min、氯仿回流提取1 h含量最高。2000年版《中华人民共和国药典》(一部)“大黄”[含量测定]项下收载了大黄素和大黄酚的含量测定方法,并规定大黄中含大黄素和大黄酚的总量不得少于0.5%,本测定结果符合其规定[1]。大黄素和大黄酚的含量测定方法阴性对照无干扰,经方法学考察,稳定可行,重现性好,可作为该制剂的质量控制指标。

 

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2000.18.

　　[2] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)[s].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社,1999.111.