【摘要】 目的 采用高效液相色谱法对小蓟中芦丁成分进行定量。方法 采用lichrospher c18色谱柱(4.6 mm×200 mm,
5 μm),柱温30 ℃,甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长254 nm。结果 小蓟中芦丁的含量为0.580 8 mg/g。结论 经过系统的方法学考察,该方法具有简便、专属、稳定、可重复的特点,可用于小蓟中芦丁的含量测定。
【关键词】 小蓟；芦丁；含量测定；高效液相色谱法
abstract：objective hplc was used to establish a method for determination of rutin in herba crisii. methods lichrospher c18 column (4.6 mm×200 mm, 5 μm) was used with methoanol-acetic acid (35∶65) as mobile phase, flow rate being 1.0 ml/min, column temperature at 30 ℃, detection wavelength at 254 nm. results the content of rutin in herba crisii was 0.580 8 mg/g. conclusions the method is proved to be simple, rapid, and accurate. it can be applied to content determination of rutin in herba crisii.
key words：cirsium setosum (willd.) mb.；rutin；content determination；hplc
小蓟为菊科植物小蓟[cirsium setosum(willd.)mb.]的干燥地上部分或根,具有凉血止血、祛瘀消肿的功能,可用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒等。wWw.11665.coM小蓟中所含有机酸中有芦丁、咖啡酸等,文献记载芦丁、咖啡酸为其止血活性成分。本实验采用高效液相色谱法测定小蓟中芦丁的含量,方法稳定、快速、重现性好。
1 实验材料
1.1 仪器
lc-10at高效液相色谱仪,spd-10a检测器,class-lc10色谱工作站；sartorius bp211d电子天平；shimadzu ay220电子天平；kq-500型超声波清洗器。
1.2 试剂与药物
甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。芦丁购自中国药品生物制品检定所(批号0080-9705)。小蓟药材分别购自江苏(南京医药股份有限公司,批号020313)、安徽(安徽省亳州市永刚饮片有限公司,批号031205)、上海(上海华宇药业有限公司,批号040802),经本院药用鉴定教研室陈建伟教授鉴定为小蓟正品[cirsium setosum(willd.)mb.]。
1.3 色谱条件及系统适用性试验
1.3.1 色谱条件的选择
色谱柱：lichrospher c18(4.6 mm×200 mm,5 μm),柱温30 ℃,流动相：甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65),流速1.0 ml/min；检测波长：254 nm。对照品、样品的高效液相色谱图见图1。
1.3.2 提取溶剂的考察
取本品2份,各1.0 g,精密称定,置2个50 ml具塞锥形瓶中,分别加入50 ml甲醇和50 ml 40%甲醇,称重,浸置1 h,超声处理(功率500 w,频率50 khz)40 min,补足称重,滤过；微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。分别吸取上述2份溶液各10 μl,注入高效液相色谱仪,按外标法以峰面积计算。结果表明,以体积分数为40%甲醇为提取溶剂效果较好。
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品0.98 mg,置25 ml容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2.1.2 供试品溶液的制备
各取3个产地药材粉末(过2号筛) 1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加入50 ml 40%甲醇,称重,浸置1 h,超声处理(功率500 w,频率50 khz)40 min,补足称重,过滤,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。
2.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 ml稀释10 ml,依次精密吸取稀释的对照品溶液10 μl注入液相色谱仪,测定其峰面积值,以芦丁的浓度(g/l)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归。得回归方程为：y＝25 845 255x－28 716, r＝0.999 6。结果表明,芦丁在0.003 92～0.019 6 g/l范围内具有良好的线性关系。
2.3 精密度试验
吸取3号对照品溶液10 μl,重复进样5次,测定其峰面积积分值,rsd＝1.503%。表明本法精密度较好。
2.4 稳定性试验
分别于0、1、2、4、6、12、24 h精密吸取同一份供试品溶液20 μl进样,测定其峰面积积分值,计算6 h内rsd＝1.972%。结果表明,供试品溶液在6 h内常温保存基本稳定。
2.5 重复性试验
取同一批号小蓟样品共5份,每份1.0 g,精密称定,按供试品溶液的制备方法平行制备5份,分别进样10 μl,每份测定2次,平均含量为0.703 5 mg/g,rsd＝1.129%。
2.6 回收率试验
精密称取小蓟样品6份,各1.0 g,分别精密加入芦丁对照品适量,按供试品溶液的制备方法制备,每次进样10 μl,每份测定2次,取平均值,计算加样回收率,平均加样回收率为98.70%,rsd＝2.88%。见表1。表1 芦丁加样回收率测定结果(略)
2.7 样品测定
取3个产地的小蓟样品,按供试品溶液的制备方法制备,分别精密吸取对照品溶液和样品溶液,注入液相色谱仪,测量峰面积,按外标法计算,结果总平均值为0.580 8 mg/g。见表2。表2 小蓟中芦丁含量测定结果(略)
3 小结
对于小蓟中芦丁的含量测定,有人曾采用聚酰胺薄层扫描法[1],此法受薄膜表面光洁度、均匀度、厚薄等因素影响而不太稳定,张氏等[2]采用hplc法测定苦荞麦中芦丁含量。查阅文献,还未曾有人用过hplc法测定小蓟中芦丁含量。本实验采用hplc法测定芦丁含量,具有简便快速、结果准确可靠的特点,可以作为小蓟药材及饮片质量控制方法。
【参考文献】
[1] 周文序,田 珍.中药大、小蓟中柳穿鱼甙和芦丁的薄层扫描法定量分析[j].药物分析杂志,1994,14(6)：39－40.
[2] 张 琪,刘慧灵.苦荞麦中总黄酮和芦丁的含量测定方法研究[j].食品科学,2003,24(7)：113－116.
