作者：时维静,胡跃进,王海侠,谭志静
【摘要】 目的 以白头翁皂苷b4作为指标,考察不同来源白头翁的质量,为白头翁的加工和选用提供参考。方法 采用高效液相色谱法,对购自亳州中药材大市场白头翁药材与饮片5个样品和滁州野生白头翁进行含量测定。结果 在0.312 5～10 μg范围内线性关系良好,回归方程y＝276 350x－12 180,r2＝0.999 6。结论 不同来源的白头翁药材皂苷b4含量差异较大。
【关键词】 白头翁；产地；白头翁皂苷b4；含量测定；高效液相色谱法
key words：pulsatilla chinensis；original place pulchinenoside b4；content determination；hplc
白头翁为毛茛科植物白头翁pulsatilla chinensis(bge.) regel的干燥根[1],为多年生草本植物,具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效。目前市场上以野生采集品为主,由于产
地不一,加工和饮片的切制方法不同,对有效成分的含量影响较大。WWw.11665.COM本试验从亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材3种、饮片2种,采集滁州凤阳九华山野生白头翁,计6个样品。以白头翁皂苷b4为对照品,采用高效液相色谱法测定其含量,为白头翁的加工和选用提供参考。
1 材料
美国waters 1525型高效液相色谱仪,2487 dad紫外检测器,breeze色谱工作站(美国waters)；tu-1810spc紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)；bs21s精密电子天平(德国赛多利斯天平有限公司)。白头翁皂苷b4,暨南大学叶文才教授惠赠。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 白头翁样品的采集
市场样品采集于2006年9月,在亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材a、b、c 3种及饮片d、e 2种。a产地长春；b产地河南；c产地安徽；d购自亳州京皖饮片厂,产地内蒙古；e购于亳州中信饮片厂,产地安徽。
滁州凤阳九华山白头翁于2006年8月采集,清水洗净,拭干,立即置105 ℃干燥箱杀酶5 min,取出,待温度降至50 ℃,再放入干燥箱中烘干,编号为f。
2.2 白头翁皂苷b4含量测定
2.2.1 检测波长的确定
取白头翁对照品溶液,以甲醇溶液作空白基线,在400～190 nm波长范围内扫描。结果表明,白头翁皂苷b4在205 nm波长处有最大吸收,甲醇溶液对样品的测定无干扰。
2.2.2 色谱条件
固定相：zorbax sb-c18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-水(28∶72)；体积流量1.0 ml/min；检测波长205 nm；柱温：室温。
2.2.3 标准曲线的制作
称取5.0 mg白头翁皂苷b4置10 ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇均,即得0.5 mg/ml浓度的白头翁皂苷b4溶液,取5 ml置10 ml容量瓶中,甲醇定容至刻度得0.25 mg/ml,依次类推,进行倍比稀释得0.125、0.625、0.031 2、0.015 6 mg/ml 6个梯度浓度的对照品溶液,进样量20 μl。以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程y＝276 350x－12 180,r2＝0.999 6。白头翁皂苷b4在0.312 5～10 μg范围线性关系良好。
2.2.4 供试品溶液的制备
精密称定各样品白头翁粗粉20.0 g,置圆底烧瓶中,加95%乙醇溶液100 ml回流提取2 h,提取3次,过滤,静置12 h。回收乙醇浓缩至20 ml,取1 ml放入100 ml的容量瓶中,加甲醇定容至刻度,即每毫升溶液相当于0.01原药材。于0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2.2.5 系统适用性考察
在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl,注入液相色谱仪,测定。结果表明,供试品中白头翁皂苷b4与其相邻峰的分离好,保留时间适中(近8 min)。结果见图1。
2.2.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液20 μl,注入液相色谱仪中,平行测定5次,在上述色谱条件下测定,对照品峰面积的rsd＝0.72%。结果表明精密度良好。
2.2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液20 μl,注入色谱仪中,在上述色谱条件下,于0、2、4、6、8、12、24 h范围内测定,结果表明,供试品溶液在24 h内稳定性良好,供试品白头翁皂苷b4峰面积rsd＝1.20%。
2.2.8 重复性试验
取滁州凤阳白头翁100 g,粉碎、混匀。分为5份(各20 g),照供试品溶液制备项下操作,制成供试品溶液,在上述色谱条件下测其白头翁皂苷b4的峰面积,rsd＝0.80%,表明重复性良好。
2.2.9 回收率试验
精密称取已知皂苷b4含量的样品0.50 g,分别加入皂苷b4对照品适量,依供试品溶液的制备方法处理成5份,按上述色谱条件进样分析。回收率(n＝5)为99.5%,rsd＝1.10%。
2.3 不同来源白头翁皂苷b4含量比较
(见表1)表1 不同来源白头翁皂苷b4含量测定结果（略）
3 讨论
地理环境和气候条件是有效成分积累的基础[2],所以,来源于不同地区的白头翁药材,白头翁皂苷b4含量有一定的差异。样品c、e、f产地均为安徽,为什么含量相差如此之大？经我们多年研究表明,一是白头翁为多年生草本植物,不同的采收时间对其含量有影响；二是白头翁在干燥过程中存在酶解现象,所以杀酶后再50 ℃干燥,其含量较高；三是白头翁皂苷为水溶性物质,饮片切制过程中润洗不当可导致其丧失,故饮片中其含量较低。
中药材和饮片是中药质量源头,其真伪优劣直接影响到中成药的质量,也关系到中医临床疗效和患者的用药安全[3]。有效成分的含量与产地、采收时间及加工方法密切相关。本试验采用高效液相色谱法,通过比较不同来源白头翁其皂苷b4的含量,为白头翁药材的选用与加工提供了科学数据。
【参考文献】
1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.68.
[2] 盛明智.中药饮片质量应从产地抓起[j].现代医药卫生,2006,22(19)：3003－3004.
[3] 易东阳,胡玉彬.中药行业应加强产地加工的研究与教育[j].卫生职业教育,2004,22(2)：22－23.
