作者：静芸芸,单进军,刘嘉,吴皓,狄留庆

【摘要】  目的 建立以hplc法同时测定祖师麻中瑞香素、7-oh香豆素、紫丁香苷含量的方法。方法 采用ymc-pack ods色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；以甲醇-0.5%醋酸-水(19︰8︰1)为流动相；双波长检测,λ1＝327 nm,λ2＝266 nm；流速为1.0 ml/min；柱温30 ℃。结果 3个组分均能达到基线分离,各组分的平均回收率在98.41%～100.18%之间。结论 操作简便,结果可靠,重现性好,可作为该药材质量控制的方法。

【关键词】  祖师麻；高效液相色谱法；瑞香素；7-oh香豆素；紫丁香苷；含量测定

    abstract：objective to establish a hplc method for the determination of daphnetin, 7-oh coumarin and syringing in zushima. methods the separation was performed on ymc-pack ods (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column with a mobile phase consisting of methanol-0.5% acetic acid-water (19︰8︰1) as gradient elution at the flow rate of 1.0 ml/min. the dual detective wavelength was set at 327 nm and 266 nm. the column temperature was 30 ℃. results baseline separation was achieved for the analysis of the three index components. the average recoveries were 98.4%～100.2%. conclusion this method is convenient, rapid and accurate. it can be used for quality control in production of zushima.
   
　　key words：zushima；hplc；daphnetin；7-oh coumarin；syringin；content determination
 
    祖师麻是瑞香科植物黄瑞香daphne giraldii nitsche、陕甘瑞香daphne tangutica maxim或凹叶瑞香daphne retusa hemsl的干燥茎皮及根皮,春秋二季采收剥取、干燥,为民间常用中草药。WWw.11665.coM为了更好地对祖师麻药材进行质量控制,本试验采用hplc双波长法,同时检测祖师麻药材中瑞香素、7-oh香豆素、紫丁香苷3种苯丙素成分的含量。本法操作简便,可靠、灵敏、重现性好,可为祖师麻药材质量控制提供依据。

　　1  仪器与试药

    agilent1100液相色谱仪(美国agilent公司)；bp211d型电子分析天平(德国satrorius公司)；kq-250型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)

    祖师麻由本校中药鉴定教研室吴德康教授鉴定,为瑞香科植物黄瑞香daphne giraldii nitsche的干燥茎皮。瑞香素对照品(中国药品生物制品检定所,批号0900-200102)；7-oh香豆素对照品(中国药品生物制品检定所,批号111739- 200501)；紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号111574-200201)。甲醇(色谱纯,江苏汉邦科技有限公司)；冰醋酸(分析纯,上海化学试剂有限公司)；水为亚沸蒸馏水(自制)。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统试用性试验

    色谱柱：ymc-pack ods柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.5%醋酸-水(19︰8︰1),流速：1.0 ml/min；检测波长：λ1＝327 nm(瑞香素、7-oh香豆素),λ2＝266 nm(紫丁香苷)；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。理论塔板数按瑞香素峰计算不低于3 000,3个组分与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。色谱图见图1、图2。

　　2.2  对照品溶液的制备

    精密称取各对照品适量,置10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。再精密吸取2 ml,置10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含瑞香素277 μg/ml、7-oh香豆素77.2 μg/ml、紫丁香苷274.7 μg/ml的混合对照品溶液。

　　2.3  供试品溶液的制备

    精密称取样品粉末0.5 g,置于250 ml磨口三角瓶中,精密加入50%甲醇50 ml,称定重量,超声处理30 min,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。作为供试品溶液。

　　2.4  方法学考察

　　2.4.1  线性关系考察 

　　分别精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、10 ml各置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制得混合标准溶液系列,按“2.1”项下的色谱条件,各取10 μl进样,测定。以对照品浓度对峰面积平均值作图,经回归分析：瑞香素：y＝78.89x－35.90,r＝0.999 7,线性范围0.027 7～2.77 mg；7-oh香豆素：y＝134.4x－7.666,r＝0.999 9,线性范围0.007 7～0.772 mg；紫丁香苷：y＝46.91x－4.047,r＝0.999 6,线性范围0.027 5～2.747 mg。结果表明：各对照品在各自的线性范围内呈良好线性关系。

　　2.4.2  精密度试验

　　 精密吸取混合对照品溶液1.0 ml于10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制得混合对照品溶液,取10 μl进样,重复6次,以各组分的含量分别计算rsd,结果瑞香素rsd＝0.74%、7-oh香豆素rsd＝1.01%、紫丁香苷rsd＝1.50%,表明本试验仪器的精密度良好。

　　2.4.3  稳定性试验 

　　精密吸取新配制的供试品溶液,按样品含量测定法每隔2 h按10 μl进样测定,以各组分的峰面积分别计算rsd,结果均小于3%,表明供试品溶液在室温条件下10 h内稳定。

　　2.4.4  加样回收率试验 

　　精密称取已知含量的祖师麻0.5 g,平行9份,分别按样品量的80%、100%、120%加入标准品,每个平行3份,按供试品溶液制备方法制成加样回收样品液。按10 μl进样,计算加样回收率。结果见表1～表3。表1  瑞香素加样回收率试验结果(略)表2  7-oh香豆素加样回收率试验结果(略)表3  紫丁香苷加样回收率试验结果(略)
  

　　2.5  样品含量测定
   
　　按“2.3”项制备供试品溶液,进行含量测定。结果见表4。表4  样品含量测定结果(略)

　　3  讨论

    分别对本试验中的3个对照品溶液进行紫外全波长扫描,瑞香素、7-oh香豆素、紫丁香苷的最大吸收波长分别为327、327、266 nm,故本试验采用双波长法,同时测定3种成分的含量。在此条件下,所需检测的各峰分离度及峰形均佳,灵敏度也较高。为使所测瑞香素、7-oh香豆素、紫丁香苷3种成分提取完全,对供试品溶液制备方法进行了考察,结果以50%甲醇提取最完全,故确定50%甲醇为提取溶剂。
   
　　药材生长受产地、气候和生态环境等的影响较大,因此,仅针对其中某一个成分进行定性定量分析,并不能有效地控制药材或中成药的质量。本试验所建立hplc双波长法同时测定祖师麻药材中3种苯丙素成分的含量,可为祖师麻药材的质量评价和控制提供参考。