作者：刘振丽,宋志前,巢志茂,王淳,吕署一,李林福
【摘要】 目的 研究采用薄层层析(tlc)鉴别方法区别何首乌生品与炮制品的可行性。方法 研究样品为来自全国不同地区的3个批次的何首乌样品与10个批次的制何首乌样品,以及道地产地何首乌生品通过不同炮制工艺、不同炮制时间制备的炮制品。tlc鉴别条件：硅胶g薄层板,5-羟甲基糠醛为对照品,以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。结果 供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,制何首乌显相同颜色的斑点,何首乌没有显示相同颜色的斑点。结论 建立的tlc鉴别方法可以区分何首乌生品与炮制品。
【关键词】 何首乌；薄层层析；5-羟甲基糠醛
abstract：objective to study the method for distinguishing the crude and processed radix of polygonum multiflorum thunb. by tlc. methods some of the samples were collected from different cities in china, some of them were prepared following the pharmacopoeia standard or local standard. tlc conditions：5-hydroxymethyl-furfural (5-hmf) was used as a standard matter with the developing solvent of petroleum ether (60～90 ℃)-ethyl acetate (1∶1) on a silica g thin layer plate, sprayed with 15% α-naphthol in ethanol solvent, heated and detected in daylight. results tlc chromatogram showed that crude and processed product of polygonum multiflorum thunb. were different. conclusion tlc method for distinguishing the crude and processed polygonum multiflorum thunb. was established.
key words：radix of polygonum multiflorum thunb.；tlc；5-hydroxymethyl-furfural
何首乌为蓼科植物何首乌polygonum multiflorum thunb.的干燥块根,经炮制后为制何首乌。wWW.11665.Com2005年版《中华人民共和国药典》(一部) [1]对何首乌生品与炮制品采用了相同的薄层层析(tlc)鉴别方法,鉴别的对象为何首乌对照药材,也没有涉及具体的化学成分,故而采用tlc鉴别方法无法区别何首乌生品与炮制品。前期研究发现,何首乌炮制后hplc图谱显示有新的色谱峰出现[2],经提取分离和结构鉴定,确定新产生的成分之一为5-羟甲基糠醛(5-hmf)[3]。本试验以5-hmf为对照品,对采用tlc鉴别方法区别何首乌生品与炮制品的方法进行了研究。
1 材料
薄层扫描成像系统(gel2020d)。5-hmf为本实验室从制何首乌中提取分离得到(纯度98%以上)。采集或采购的何首乌与制何首乌样品来自安徽巢湖、湖北恩施、广西桂林、山东荣成、北京同仁堂、湖南浏阳、江西九江、广东德庆、山东泰山、福
建福田。实验室炮制的何首乌药材采集于广东德庆县德城镇家种品,加工制成何首乌生品,然后依据《中华人民共和国药典》制备黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸的制何首乌样品[1],另依据地方炮制标准制备黑豆汁高压蒸的制何首乌样品[4]。不同炮制时间制何首乌样品为采用《中华人民共和国药典》黑豆汁炖法制备8、16、24、32、40 h的样品。硅胶g薄层板(青岛海洋化工厂分厂),乙醇、石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、磷钼酸、α-萘酚均为分析纯(北京化学试剂公司)。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备
取5-hmf对照品,加乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备
分别取何首乌生品和炮制品粉末(过4号筛)4 g,加乙醇40 ml,超声处理40 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水5 ml使溶解,过聚酰胺柱(1 g,内径10～15 mm),用水25 ml洗脱,收集洗脱液,40 ℃以下减压蒸干,残渣加乙醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。
2.3 薄层层析条件
依2005年版《中华人民共和国药典》(一部)薄层色谱法(附录ⅵb)试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各5 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。不同炮制方法、相同炮制方法不同炮制时间、不同地区制何首乌色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点,何首乌生品色谱都没有显示相同颜色的斑点。结果见图1～图3。
3 讨论
由于缺乏统一的炮制规范,全国各省市何首乌炮制方法有多种,有黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸,还有高压蒸[4]等,炮制时间由3 h到40 h不等。不同炮制方法tlc图谱结果显示,采用黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸以及高压蒸法制备的制何首乌样品,在与5-hmf色谱相应的位置上,都显示相同颜色的斑点,而何首乌生品没有显示相同颜色的斑点(见图1)。何首乌采用黑豆汁炖8、16、24、32、40 h得到的不同炮制时间的样品,tlc图谱结果显示,与5-hmf色谱相应的位置上,都显示相同颜色的斑点,并且随炮制时间延长,在点样量相同的情况下,斑点的大小逐渐增大(见图2),表明制何首乌中的5-hmf含量随炮制时间延长逐渐升高,与hplc含量测定的结果一致(结果另文报道)。不同地区采集或采购的3个批次的何首乌生品与10个批次的制何首乌样品tlc鉴别结果显示,在与对照品色谱相应的位置上,制何首乌显示相同颜色的斑点,但各批次相应斑点的大小有一定差异,表明不同地区制何首乌中5-hmf含量存在明显差异,而3个批次的何首乌样品在相应的位置上,没有显示相同颜色的斑点(见图3)。本结果表明,所建立的tlc鉴别方法可以用于区别何首乌与制何首乌。
在方法建立过程中,首先参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)熟地黄鉴别项下有关5-hmf的tlc方法进行[1],供试品采用乙醇提取,结果显示,制何首乌与5-hmf对应位置斑点不很清晰。表明制何首乌中5-hmf含量不及熟地黄中高。参考何首乌中5-hmf提取分离方法[3],采用乙醇提取后用乙酸乙酯萃取,结果10个批次的制何首乌样品有6个批次在与5-hmf对应位置有较清晰的斑点,但由于蒽醌类成分的存在,有一定背景干扰。改用乙醇提取聚酰胺柱纯化方法,得到了理想结果。试验过程中还比较了2种tlc条件,一种是硅胶gf254薄层板,紫外光灯(254 nm)下检视；另一种是硅胶g薄层板,喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90 ℃加热至斑点显色清晰,日光下检视。结果表明,后者制何首乌斑点更清晰,因此采用后一种鉴别条件。斑点的颜色随加热时间由紫红色变成摹仿蓝紫色。
根据2005年版《中华人民共和国药典》(一部)的鉴别方法,可以判断是否为何首乌或其炮制品。在本试验建立的tlc方法,可以实现区别何首乌生品与其炮制品,并且在一定程度上可以根据斑点颜色、大小的对比判断炮制的完善程度。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.122,83.
[2] 刘振丽,李林福,宋志前.何首乌炮制前后高效液相图谱的变化[j].中草药,2005,36(11)：1622.
[3] 刘振丽,李林福,宋志前,等.何首乌炮制后新产生成分的分离和结构鉴定[j].中药材,2007,30(12)：1519.
[4] 天津市卫生局.中药饮片切制规范[m].南昌：江西科学技术出版社, 1975.53.
