【摘要】 目的 研究何首乌对小鼠学习记忆的影响及其抗疲劳作用。 方法 采用跳台试验、水迷宫实验与爬杆试验、负重游泳试验和肝糖原测定(抗疲劳作用)，分别观察低、中、高剂量(2.6、7.8、23.4 g/kg )何首乌提取物对小鼠改善记忆作用和抗疲劳作用的影响。结果 ①跳台实验结果显示高剂量组在第1天测试和24 h后重测试时，动物平均错误次数显著减少(p<0.05);水迷宫实验结果显示高剂量组动物平均错误次数减少(p<0.05)。②在抗疲劳实验中，爬杆试验的结果显示中高剂量的何首乌提取物能够显著延长小鼠在有机玻璃杆上的坚持时间(p<0.05)。负重实验发现高剂量组动物负重游泳的生存时间与正常组相比明显延长，解剖后的肝糖原测定发现低剂量组肝糖原量明显降低。 结论 23.4 g/kg的何首乌对小鼠的记忆获得有改善作用，用药量大于7.8 g/kg的何首乌对抗疲劳功能有明显改善作用。
【关键词】 何首乌;记忆获得;记忆再现;抗疲劳
abstract:objective to explore the memory and antifatigue effects of polygonum multiflorum on mice. methods the effects of polygonum multiflorum extract on memory and antifatigue in mice were studied by step down test,morris water maze test,poleclimbing test,weightloaded swimming test and hepatic glycogen test (antifatigue experiment) at low,medium and high doses (2.6,7.8,and 23.4 g/kg) ,respectively. results ①in the step down test,the average number of mistakes reduced significantly in the mice in the group intragastrically administered with polygonum multiflorum at high dose in the first day of testing and the retest after 24 hours (p<0.05)，while fewer error times were recorded in the group of mice intragastrically administered with polygonum multiflorum at high dose in water maze test;②in antifatigue effect experiments,it was showed that the time in the glass rod was prolonged significantly in the group of mice intragastrically administered with polygonum multiflorum extract at high doses (p<0.05). and it was found that the survival time of swimming of the mice fed with polygonum multiflorum extract at high doses in weightloaded swimming test was significantly longer than that in the normal group. significant decrease of liver glycogen in the group ingrastrically administered with polygonum multiflorum extract at low dose was found in hepatic glycogen assay after biopsy.conclusion memoryimproving effects in mice intragastrically administered with polygonum multiflorum extract at the dose of 23.4 g/kg were observed,and anti-fatigue effects in mice intragastrically administered with polygonum multiflorum extract at the doses higher than 7.8 g/kg were observed.
key words:polygonum multiflorum; memory acquisition; memory representation; antifatigue
何首乌为蓼科植物何首乌polygonum multiflorum thunb.的块根，性温，味苦、甘涩，制首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、壮筋骨的作用;用于眩晕耳鸣、须发早白、腰膝酸软等。wwW.11665.COm既往研究表明其具有抗衰老作用以及增强机体免疫功能[1]。本文通过研究何首乌提取物对小鼠学习记忆能力的改善作用和对抗疲劳能力的作用，为其在临床益智健脑和强身健体的推广应用提供客观依据。
1 材料和方法
1.1 材料
spf级昆明种成年小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，由广东省实验动物中心提供，动物合格证粤监证2008a03，小鼠实验期间自由采食饮水。
何首乌购于广州致信药业，经鉴定均为蓼科植物何首乌的干燥块根。将何首乌加水浸泡20 min后，煎煮2次，每次1.5 h，混合过滤，滤液80 ℃水浴浓缩至浓度为1.17 g/ml。东莨菪碱注射液(广州明兴制药厂，批号20040302，国家sfda的批准文号国药准字h32022136);健脑补肾口服液(山东临清华威药业有限责任公司，批号20050511，国家sfda的批准文号国药准字z37020805);人参蜂王浆(北京三九药业有限公司，批号20040805，国家sfda的批准文号卫食健字(2002)第0093号)。
游泳缸、爬杆、跳台仪、水迷宫按《保健食品技术规范》设计制作; dt200型跳台仪(成都泰盟科技有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 何首乌对记忆的影响
1.2.1.1 跳台法 小鼠随机分为5组，每组14只，分别是蒸馏水组、健脑补肾口服液对照组、何首乌低、中、高3个剂量组(剂量分别为2.6 g/kg、7.8 g/kg、23.4 g/kg)，连续给药30 d，每日1次，给药25 d后，除正常对照组外其余各组每天均腹腔注射浓度1.25 mg/kg东莨菪碱注射液，末次给药1 h后将小鼠放入跳台适应3 min，然后立即通以36 v交流电，动物受到电击，跳回平台开始计时，记录5 min内小鼠第1次跳下平台的时间(潜伏期)和5 min内的错误次数，24 h重做测验。
1.2.1.2 水迷宫法 小鼠随机分为5组，其分组和给药剂量同跳台法实验。连续给药30 d，每日1次，25 d给药后，除正常对照组外其余各组每天均腹腔注射1.25 mg/kg东莨菪碱注射液，末次给样次日开始测试5 d，第1次测试前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3次。水迷宫全程共5个错误记录点，第1天从倒数第2个错误点处开始计时，第2天从倒数第3个错误点处开始计时，第3天从倒数第4个错误点处开始计时，第4天和第5天从迷宫起点开始计时，每天连续测试3次，记录第3次到达终点的时间。连续测试5 d，最后累计每只小鼠在5 d测试期间到达终点的时间，以此作为学习成绩。
1.2.2 何首乌抗疲劳作用
1.2.2.1 爬杆试验 昆明种小鼠随机分为5组，每组14只，分别是蒸馏水组、人参蜂王浆对照组、何首乌2.6、7.8、23.4 g/kg(低、中、高)3个剂量组，连续给药30 d，每日1次，将爬杆架置于水温15 ℃，深约10 cm的水盆中，末次给药30 min后将小鼠放在有机玻璃爬杆上，记录小鼠从有机玻璃杆上跌落下来的时间，第3次落水时终止试验，累计3次的时间为爬杆成绩。
1.2.2.2 负重游泳试验 小鼠随机分为5组，其分组和给药剂量同爬杆试验。末次给药30 min后，置小鼠在游泳箱中游泳，水深不少于30 cm，水温(15±0.5) ℃，鼠尾根部负荷5%体质量的铅皮，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。小鼠经90 min游泳后，处死，取肝，蒽酮试验测定肝糖原。
1.2.3 数据处理和分析 以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用spss12.0统计软件进行分析，p<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 何首乌对记忆获得的影响
2.2.1 何首乌对记忆的影响(跳台法) 何首乌高剂量组潜伏期长于空白对照组，其错误次数少于空白对照组，两组比较差异有显著性(p<0.05)，见表1。
2.1.2 水迷宫试验 何首乌高剂量组小鼠到达终点时间明显低于空白对照组，两组比较差异有显著性(p<0.05)，见图1。
2.2 对小鼠抗疲劳作用的影响
2.2.1 爬杆试验 何首乌中剂量组、高剂量组小鼠坚持在有机玻璃杆的时间明显延长，与空白对照组比较差异有显著性(p<0.05)，见图2。
2.2.2 负重游泳 何首乌高剂量组小鼠负重游泳生存时间明显延长，与空白对照组比较差异有显著性(p<0.05)，见图3。
2.2.3 生化指标(肝糖原含量) 何首乌低剂量组明显低于空白对照组，两组比较差异有显著性(p<0.05)，见图4。表1 何首乌汁对小鼠记忆获得的影响(跳台试验)
3 讨论
本实验研究表明，何首乌提取物对小鼠被动回避反应(跳台试验)及空间辨别能力(水迷宫试验)的记忆获得有改善作用，对东莨菪碱引起的记忆减退以及再现减退(跳台试验和水迷宫试验)有拮抗作用。其中，23.4 g/kg组记忆改善情况最好，而7.8 g/kg组又优于2.6 g/kg组，提示何首乌对小鼠学习记忆能力的改善有一定的剂量效应关系;在抗疲劳实验中，爬杆试验的结果显示中高剂量的何首乌提取物能够显著延长小鼠在有机玻璃杆上的坚持时间，负重实验也发现高剂量组动物负重游泳的生存时间与正常组相比明显延长，解剖后的肝糖原测定发现低剂量组肝糖原量明显降低，通过对爬杆试验、负重游泳试验及肝糖原测定等小鼠抗疲劳作用的研究，发现何首乌提取物有一定的抗疲劳作用。
本试验中抗疲劳试验数据误差比较大，通过对数据进行分析，推测原因可能因小鼠的个体差异、每组小鼠数目较少及实验中的操作所致。在以后的实验中，可通过增加每组小鼠的数目、更加规范实验操作来减少这些方面的误差。
学习是指新行为(经验)的获得和 发展 ，记忆是指获得的行为(经验)的保持和再现[2]。本研究采用基于操作性条件反射原理的学习记忆行为学实验，同时结合采用化学物致记忆障碍的动物模型来综合评价何首乌改善学习记忆的作用，这是目前多种评价体系如保健食品评价程序和新药临床前研究评价体系指定、中药药 理学 试验方法中推荐使用的方法[3,4-5,6]，既往研究表明：何首乌可增加小鼠脑内去甲肾上腺素(na)、多巴胺(da)、5羟色胺(5ht)等单胺递质的含量，从而改善中枢神经系统突触信息传递功能，间接地增强学习记忆能力[1,7-10]。本实验为何首乌的进一步研发成为中药保健食品提供了有力的依据。
【 参考 文献 】
[1] 杨秀伟.何首乌醇提取物对易老化小鼠肝脏和脑单胺活性的影响[j].
