【摘要】 目的 建立醒脑再造胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法。方法 采用hplc-elsd法,phenomenex gemini c18色谱柱(250 mm×4.60 mm,5 μm),流动相：乙腈-水(36∶64)；流速：1.0 ml/min；漂移管温度：105 ℃；载气流速：2.7 l/min。结果 黄芪甲苷在0.486～2.43 μg范围内呈线性关系,r＝0.999 7；平均回收率为100.5%(n＝6),rsd＝0.3%。结论 本方法准确、灵敏度高、重复性好,可作为该药品的质量检测标准。
【关键词】 醒脑再造胶囊；黄芪甲苷；高效液相色谱-蒸发光散射检测法；含量测定
abstract：objective to establish a quantitative method for astraloside in xingnao zaizao capsules by hplc-elsd. methods hplc-elsd separation was achieved on phenomenex gemini c18 column (250 mm×4.60 mm, 5 μm) and mobile phase consisted of acetonitrile-water (36∶64). the flow rate was 1.0 ml/min, drift tube temperature was 105 ℃, and gas flow rate was 2.7 l/min. results the calibration curve was linear in the range of 0.486～2.43 μg (r＝0.999 7). the average recovery rate was 100.5% (n＝6), rsd was 0.3%. conclusion the method is rapid, accurate and reliable, and the method can be used as the quality standard for xingnao zaizao capsules.
key words：xingnao zaizao capsules；astraloside；hplc-elsd；content determination
醒脑再造胶囊收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第4册,具有化痰醒脑、祛风活络功效。www.11665.cOm用于神志不清、语言蹇涩、口角流涎、肾虚痿痹、筋骨酸痛、手足拘挛、半身不遂及脑血栓形成的恢复期和后遗症[1]。参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)中黄芪甲苷的含量测定方法[2],本试验建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(hplc-elsd)测定醒脑再造胶囊中黄芪甲苷的含量。本方法准确,灵敏度高,重复性好,可用于醒脑再造胶囊的质量控制。
1 仪器与试药
日本岛津lc-10at vp高效液相色谱仪,日立alltech elsd2000型蒸发光散射检测器,spd-10at vp型自动进样器。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110781-200512；规格：20 mg,供含量测定用)。醒脑再造胶囊由吉林华侨药业股份有限公司提供(批号20060903、20061010、20061221)。乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：phenomenex gemini c18(250 mm×4.60 mm,5 μm),流动相：乙腈-水(36∶64)；流速：1.0 ml/min；柱温：40 ℃；日立alltech elsd2000型蒸发光散射检测器,漂移管温度：105 ℃；载气流速：2.7 l/min[3]；理论塔板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000,分离度(r)＞1.5。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品,混匀,研细,取约0.7 g,置索氏提取器中,加甲醇适量,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4 h。提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10 ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40 ml。合并正丁醇提取液,用氨试液充分洗涤2次,每次40 ml。弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水10 ml使溶解,放冷。通过d101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水50 ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 ml洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇80 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶内,加甲醇至刻度,摇匀,即得。黄芪甲苷对照品、样品和阴性对照色谱图见图1。
2.4 线性关系考察
精密称取黄芪甲苷对照品的甲醇溶液(0.097 2 mg/ml),分别精密吸取5、10、15、20、25 μl测定,以对照品质量的自然对数为横坐标,以峰面积的自然对数为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,黄芪甲苷在0.486～2.43 μg范围内线性关系良好,其线性对数方程为：y＝1.952 6x＋13.628 6(r＝0.999 7)。
2.5 稳定性试验
取醒脑再造胶囊(批号20060903),按“2.3”项下方法制备供试品溶液,分别于配制后0、2、4、8、12、24 h精密吸取样品溶液20 μl,注入液相色谱仪,测定峰面积。结果表明,黄芪甲苷在24 h内基本稳定,rsd＝1.0%。
2.6 精密度试验
精密吸取供试液20 μl,注入液相色谱仪,重复进样6次,结果rsd＝0.6%。
2.7 重复性试验
分别取同一批样品6份,按“2.3”项下方法制备供试液,测定,含量为0.203 7 mg/粒,结果rsd＝1.1%。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的同批供试品(批号20060903,含量为0.203 7 mg/粒)6份,分别精密加入对照品溶液(0.101 6 mg/ml) 2.0 ml,依法测定,计算平均回收率为100.5%,rsd＝0.3%,结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
(见表2)表2 黄芪甲苷含量测定结果（略）
3 讨论
在色谱条件的选择过程中,曾对乙腈-水(32∶68)、乙腈-水(34∶66)、乙腈-水(36∶64)流动相做了系列比较,结果表明,采用乙腈-水(36∶64)作为流动相系统分离效果好,峰形对称,保留时间适宜,杂质峰达到基线分离,阴性无干扰,因此,本试验采用乙腈-水(36∶64)作为流动相。
不同的样品需要不同的条件,蒸发光散射检测器的载气流速和漂移管温度对结果影响比较大,是影响本试验结果的重要参数,本试验选择的条件可获得理想的信噪比和基线。
【参考文献】
[1] 中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂(第4册)[s]. 1991.218.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.212.
[3] 马艳蓉,刘 泓,柴国林,等.hplc-elsd测定黄芪中黄芪甲苷含量及相关试验条件选择的探讨[j].现代中药研究与实践,2003,17(6)：17－19.
