作者：魏舒畅,武晓玉,金辉,李曙光

【摘要】  目的 优选萎胃宁浓缩丸制剂的最佳提取工艺。方法 以芍药苷提取量、正丁醇浸出物、乙酸乙酯浸出物为指标,采用均匀设计法筛选最佳提取工艺。结果 乙醇浓度60%,提取次数2次,溶剂用量16倍,每次提取时间65 min为最佳提取工艺。结论 所得提取工艺稳定性好,可用于萎胃宁浓缩丸的制备。

【关键词】  均匀设计；芍药苷；萎胃宁浓缩丸；提取工艺

    abstract：objective to find out the optimum extraction process for weiweining pill. methods the extraction process was studied by uniform design with the yield of extracted paeoniflorin, n-butanol extract and ethyl acetate extract as markers. results the optimum extraction process was adding 16 times amont of 60% alcohol, refluxing and extracting for 2 times, 65 min for each time. conclusion this extraction process shows good stability and is available for the production of weiweining pill.

    key words：uniform design；paeoniflorin；weiweining pill；extraction press
 
    近数十年来,经国内学者的不懈努力,在慢性萎缩性胃炎(cag)的治疗方面打破了以往胃黏膜萎缩腺体不可逆转的局面,并得出中医治疗优于现代医学治疗的结论[1]。Www.11665.CoM萎胃宁以半夏泻心汤为主、旋覆代赭汤为辅组方。为扩大该处方的临床使用面,减小服用剂量,拟将该方由蜜丸制成浓缩丸。本试验主要研究处方中需提取部分药材的提取工艺,为浓缩丸的后续研究做好前期工作。

　　1  仪器与试药

    高效液相色谱仪(agileng1100化学工作站,agileng1100二元泵,agileng1100柱温箱,agileng1100 dad检测器,安捷伦科技有限公司),电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),真空抽滤泵(郑州杜甫仪器厂),真空干燥箱(上海益恒实验仪器有限公司)。
    白芍、党参、北山楂、黄芩、黄连等药材购自兰州黄河药市,经甘肃中医学院生药教研室鉴定均为《中华人民共和国药典》品种；芍药苷对照品由中国药品生物制品鉴定所提供(批号110736-200617)。95%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  因素水平的选择

    以乙醇浓度、提取次数、提取时间、溶剂用量为考察因素,各因素水平的取值见表1。表1  因素水平(略)

　　2.2  提取样品的制备

    采用u7(76)均匀设计表安排试验[2](见表2)。称取处方量白芍、党参、生山楂、黄芩、甘草等需提取药材14份,每份96 g,用乙醇回流提取。每试验号作平行样2份。将14份提取液低速离心(3 200 r/min),离心液水浴回收乙醇并用容量瓶定容到1 000 ml,备用。表2  试验安排表(略)

　　2.3  正丁醇浸出样品的制备

    将“2.2”项下定容好的样品液摇匀后精确量取50 ml,共14份,水浴挥去乙醇后用水饱和的正丁醇萃取,每次20 ml,萃取4次,合并萃取液,回收正丁醇,残渣置烘箱中60 ℃烘至恒重,取出,冷却至室温后精密称量,结果见表3。

　　2.4  乙酸乙酯浸出样品的制备
  
　　将“2.2”项下定容好的样品液摇匀后精确量取50 ml,共14份,水浴挥去乙醇后用水饱和的乙酸乙酯萃取,每次20 ml,萃取4次,合并萃取液,回收乙酸乙酯,残渣置烘箱中60 ℃烘至恒重,取出,冷却至室温后精密称量,结果见表3。

　　2.5  芍药苷提取量的测定[3]

　　2.5.1  色谱条件 

　　采用hplc法,色谱柱：hypersil-ods c18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相：乙腈-水-磷酸(15∶85∶0.02),检测波长：230 nm,柱温：25 ℃,流速：1.0 ml/min。

　　2.5.2  对照品溶液的制备及工作曲线的建立 

　　精密称取用p2o5干燥至恒重的芍药苷对照品8.0 mg,置10 ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。分别取该贮备液1.0、1.5、2.0、3.0 ml,置5 ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别取各稀释液及贮备液各进样20 μl,按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,芍药苷含量为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：y＝9.479×10-10a－6.75×10-4,r＝0.999,在0.08～0.8 mg/ml浓度范围内线性关系良好。 2.5.3  样品含量测定  将14份正丁醇浸出物分别用甲醇溶解、定容到100 ml容量瓶中,得芍药苷含量测定用样品。按“2.5.1”项下条件进样测定,进样量20 μl。并计算96 g处方药材中的芍药苷提取量,结果见表3。表3  样品含量测定结果(略)

　　2.6  数据处理

    将所得实验结果用spss10.0采用向后剔除法进行多元线性回归,可信限95%。分析结构如下：以正丁醇萃出物量为y,得方程y＝0.421－1.60×10-2c＋1.068×10-3d,以乙酸乙酯萃出物量为y,得方程y＝0.142＋5.244×10-3c－5.17×10-4d,以芍药苷提取量为y,得方程y＝0.359＋1.176×10-2c＋1.857×10-3d。

    从数据处理结果可知,溶剂用量与提取时间在选定的取值范围内对提取的结果无显著影响,而乙醇浓度、提取次数对3个考察指标均有显著影响。综合3种结果,提取工艺最后确定为：16倍量60%乙醇,提取次数2次,每次65 min。

　　3  优化工艺复核

    按处方比例称取药材5份,每份96 g,回流提取,分别制备正丁醇萃出物、乙酸乙酯萃出物并称重,测定芍药苷提取量,结果见表4。表4  提取工艺复核结果(略)

    经5次复核试验,正丁醇萃出物量、乙酸乙酯萃出物量、芍药苷提取量的平均值均高于工艺优化时的各试验,显示所得工艺基本稳定,芍药苷平均转移率为78.44%。

　　4  讨论

    中药复方成分复杂,在工艺筛选过程中如选用一种物质作为评价指标可能会由于评价指标的代表性差而导致所得工艺缺乏严谨性。本试验根据处方药材中皂苷类、黄酮类成分较多的实际情况,采用不同溶剂浸出物和单一化合物同时作为评价指标,代表性强,所得工艺更加合理。

    均匀设计与正交设计相比虽然舍弃了“整齐可比”的特点,但试验点均匀分散,具有试验次数少、容纳水平数多的优点,由于在不增加试验次数的同时可对考察因素设置较多的取值,因此,能降低试验设计中确定考察因素取值范围时的难度。本试验采用均匀设计优化提取工艺,扩大了乙醇浓度、溶剂用量、提取时间的取值范围,可使所得工艺更加合理。

    由于溶剂用量与提取时间对提取的结果无显著影响,结合药材对溶剂的吸收量和处方中成分性质,溶剂用量选16倍,提取时间选130 min。

【参考文献】
  　　[1] 张士卿,邓 沂,于善哉,等.中国百年百名中医临床家丛书·于己百[m].北京：中国中医药出版社,2000.7．

　　[2] 方开泰.均匀设计与均匀设计表[m].北京：科学出版社,1994.13－53.

　　[3] 邓 沂,魏舒畅,金 辉.高效液相色谱法测定于氏萎胃宁浓缩丸中芍药苷的含量[j].中医药学刊,2004,22(6)：1023－1024.