作者：王乃婕,邱琳,杜丰,梁秉文,叶祖光

【摘要】  目的 通过对压敏胶、结晶抑制剂、促渗剂的筛选,研究溶解型青蒿素贴剂的处方工艺。方法 采用tk-6a型透皮扩散仪,以sd大鼠腹部皮肤为透皮屏障,以透皮速率为考察指标,筛选压敏胶、结晶抑制剂、促渗剂。结果 青蒿素在国民淀粉压敏胶中透皮速率最高,pvp k30对青蒿素结晶抑制效果较好,各促渗剂对青蒿素促渗作用大小依次为：丙二醇(pg)＞氮酮(azone),两者配伍使用有协同作用。结论 国民淀粉压敏胶、pvp k30、pg＋azone分别作为分散型青蒿素贴剂的压敏胶、结晶抑制剂、促渗剂。

【关键词】  青蒿素；贴剂；压敏胶；结晶抑制剂；促渗剂

　　abstract: objective to determine the effect of pressure-sensitive adhesives, additives and penetration enhancers on the percutaneous absorption of artemisinin, and study on the formulation of artemisinin transdermal delivery systems. methods the effects of various additives on the crystallization of artemisinin in polyacrylate adhesive matrix were investigated. the effects of pressure- sensitive adhesives, various additives and penetration enhancers on the in vitro permeation of artemisinin across sd rat abdominal skin were studied. results national starch polyacrylate pressure-sensitive adhesive was found to be the most efficient adhesive matrix. pvp-k30 significantly inhibited the crystallization of artemisinin in polyacrylate adhesive matrix. the enhancing effectiveness of the enhancers decreased in the order: pg＞azone. pg combined with azone showed a higher synergic effect of enhancing effectiveness. conclusion national starch polyacrylate pressure-sensitive adhesive was the most effective pressure-sensitive adhesive matrix, pvp-k30 was the most effective crystallization inhibitor, pg combined with azone were the most effective penetration enhancers.

　　key words：artemisinin；patch；pressure-sensitive adhesive；crystallization inhibitor；penetration enhancers
 
    青蒿素具有退热快、原虫转阴时间短的特点,尤其适于抢救凶险型疟疾,但存在半衰期短、疟原虫易复燃等缺点。wwW.11665.CoM为了克服青蒿素半衰期短的缺点,我们将其制备成经皮给药缓释制剂。经皮给药制剂可避免肝脏的首过效应和对胃肠道的破坏、维持较长的作用时间、减少给药次数、维持恒定的有效血药浓度、降低药物毒性和不良反应、提高疗效等,在减少给药剂量的同时,大大降低疟原虫复燃率。本研究通过体外透皮试验对溶解型青蒿素贴剂的处方工艺进行了研究,为青蒿素贴剂的新药开发提供参考。

　　1  仪器与试药

    waters高效液相色谱仪；工作站：2695-2996版；泵：waters2695四元泵；检测器：waters2996紫外检测器；透皮扩散使用仪tk-20a,上海锴凯科技贸易有限公司；电子天平,美国mettler toledo ab135-s；甲醇为色谱纯,水为自制超纯水,其他试剂均为分析纯；青蒿素对照品,批号100202-200402,
购于中国药品生物制品检定所。

　　2  方法与结果

　　2.1  皮肤的处理

    雄性sd大鼠,体重180～200 g,处死后用电动剃毛器将其脱毛,取腹部皮肤。剥离脂肪层,用蒸馏水冲洗后备用。

　　2.2  体外透皮试验

　　2.2.1  试验条件 

　　采用立式franz扩散池(体积：6 ml,扩散面积：2.92 cm2)；水浴温度：(37±1)℃；转速：400 r/min。将预处理皮肤置于扩散室与接受室之间(角质层面向扩散室),在角质层表面贴上药贴,固定好。在接收室中加入40%peg 400约6 ml,液面恰与皮肤内层接触,在设定的时间(2、4、6、8、24 h)取样,每次取完,补充相同体积的新鲜接收液。

　　2.2.2  体外透皮试验含量测定方法的建立

　　2.2.2.1  色谱条件 

　　色谱柱：kromasil c18(4 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(0.01 mol/l na2hpo4-nah2po4)＝60∶40；流速：1.0 ml/min；检测波长：260 nm；柱温：30 ℃[1-2]。在此条件下青蒿素与其他成分能达到基线分离,青蒿素对照品色谱图见图1,样品色谱图见图2。

　　2.2.2.2  供试品溶液的制备

　　取接收液5.0 ml置10 ml容量瓶中,加2.0 ml 0.56%氢氧化钠溶液,摇匀,于50 ℃水浴中反应30 min,取出,放冷,加0.19 mol/l冰醋酸至刻度,摇匀,过微孔滤膜,即得。

　　2.2.2.3  阴性对照试验 

　　在选定的色谱条件下,取不含青蒿素的空白贴片,按照“2.2.1”项下条件进行试验,得阴性对照接收液,按照供试品溶液制备方法制备阴性对照供试液,进样测定,结果表明,阴性对照液在青蒿素色谱峰位置无相应峰出现。色谱图见图3。

　　2.2.2.4  线性关系考察

　　精密称取青蒿素对照品10 mg,置10 ml容量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀。精密吸取上述青蒿素对照品1.0 ml,置25 ml容量瓶中,加40% peg 400至刻度,摇匀,分别精密吸取此溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0 ml于10 ml容量瓶中,补充40% peg 400至5.0 ml。加2.0 ml 0.2%氢氧化钠溶液摇匀,于50 ℃水浴中反应30 min。冷却至室温,加0.19 mol/l冰醋酸至刻度,摇匀,过微孔滤膜,作为对照品溶液；分别吸取20 μl进样,按上述色谱条件测定,以青蒿素对照品的量(ng)为横坐标,相应峰面积积分值为纵坐标,计算回归方程为：y＝1 024.3x＋1 362.5,r＝0.999 4,n＝3。青蒿素在8～80 ng范围内呈良好的线性关系。

　　2.2.2.5  精密度试验 

　　精密吸取供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪,测定,并重复进样6次。结果rsd＝1.58%。

　　2.2.2.6  稳定性试验 

　　取同一供试品溶液,分别于0、4、8、12、24 h进样测定。结果表明,样品供试液在24 h内稳定。

　　2.2.2.7  回收率试验
 
　　分别吸取青蒿素标准品溶液(56.62 μg/ml) 0.2、0.5、0.8 ml,各3份,置10 ml容量瓶中,用阴性对照接收液补足至5.0 ml,按供试品溶液制备方法制备,进样测定,计算回收率,9份平均回收率为102.59%,rsd＝5.53%,本法回收率符合规定。

　　2.3  压敏胶的筛选
   
　　根据压敏胶的性质,丙烯酸酯压敏胶的载药量较聚异丁烯类和硅酮类高,因此,我们分别对国民淀粉duro-tak 87-2677、罗门哈斯rodermtmmd-607和江门3家公司生产的丙烯酸酯类压敏胶进行筛选,考察青蒿素的透皮速率。结果青蒿素在国民淀粉压敏胶中透皮速率最大,故选择国民淀粉压敏胶。见表1。表1  压敏胶对青蒿素透皮速率的影响（略）

　　2.4  载药量的考察
   
　　载药量为70、100、150 mg/4 g压敏胶时,分别考察其体外透皮速率,并考察青蒿素在基质中的状态。结果青蒿素在国民淀粉压敏胶中的载药量为4%左右,当青蒿素含量达到6%时,其体外透皮速率达到稳态。故青蒿素的含量确定为6%,并通过加入结晶抑制剂的方法解决其结晶问题。见表2。表2  载药量的考察（略）

　　2.5  结晶抑制剂的考察

　　参考文献[3-4],分别考察了pvp k30和peg 4000、peg 6000对青蒿素的结晶抑制作用,试验发现,pvp k30对青蒿素的结晶抑制作用较好,且不影响压敏胶性质,而peg 4000和peg 6000对压敏胶的粘度有较大影响,故选择pvp k30作为结晶抑制剂,通过透皮速率和制剂成型结果,考察其加入量。结果结晶抑制剂的加入影响青蒿素的透皮速率,加入10%pvp k30即可解决青蒿素结晶问题,故确定pvp k30的加入量为10%。见表3。表3  结晶抑制剂的考察（略）

　　2.6  促渗剂的筛选

    2005年版《中华人民共和国药典》收载的促渗剂有丙二醇(pg)、氮酮(azone),故分别考察这2种促渗剂对青蒿素的促渗作用,结果2.5%pg、2%azone对青蒿素的透皮效果较好。见表4。 表4  促渗剂的考察（略）

　　2.7  促渗剂配伍及贴片厚度考察
   
　　将上述2种促渗剂配伍使用,考察其是否有协同作用,并分别考察厚度对其透皮速率的影响,结果2种促渗剂配伍使用具有协同作用,厚度对其透皮速率没有影响。见表5。表5  促渗剂配伍及贴片厚度考察（略）

　　3  讨论
   
　　贴剂一般载药量较小,只适合于活性高、用量少的药物。本试验针对临床用药剂量较高的青蒿素贴剂进行了研究,通过添加结晶抑制剂的方法提高了压敏胶载药量,使药物长时间维持稳定的透皮速率,为临床剂量较高的药物经皮给药制剂的研究提供了新的思路。
   
　　各促渗剂对青蒿素促渗作用大小依次为：pg＞azone,两者配伍使用时有协同作用,贴剂的厚度对透皮速率没有影响,只是起到单位面积增加药量的作用,可以延长药物作用时间。

【参考文献】
  　　[1] 曾美怡,赵世善.青蒿素分析中的各种定量反应[j].药物分析杂志, 1986,6(3)：183－185.

　　[2] 汪文来.hplc法测定类风湿胶囊中青蒿素的含量[j].中国中医基础医学杂志,2003,9(12)：43,47.

　　[3] wang q, tomohiro h, kakuji t. skin penetration enhancement by the synergistic effect of supersaturated dissolution and enhancers[j]. j chem eng japan,2003,36(1)：92－97.

　　[4] kim jh, choi hk. effect of additives on the crystallization and the permeation of ketoprofen from adhesive matrix[j]. int j pharm,2002,236：81－85.