作者：邓祥敏，何美捷，王建明
【摘要】 目的将苦参制成中药栓剂，研究其体外释放特性。方法选用半合成脂肪酸脂为基质，用热熔法制备栓剂；建立分光光度法测定苦参栓中苦参碱释放度，利用溴甲酚绿结合生物碱后在416 nm处有最大吸收，测定吸光度a，将a与苦参总碱的浓度建立线性关系。结果所制栓剂符合药典栓剂有关规定，苦参栓剂体外30 min完全释放,分光光度法线性范围10～100 mg/l，r=0．999 8，平均加样回收率99.49％，日内精密度和日间精密度分别为1.85％和2.62％。结论该制剂处方合理，制备工艺简单，质量易于控制，体外释放情况良好,预示有较好的临床疗效。
【关键词】 苦参； 栓剂； 释放度
霉菌、滴虫感染是造成妇女带下、阴痒的重要原因，是妇科临床常见病、多发病。苦参为豆科（leguminosae）植物苦参sophora flavescens ait. 的干燥根。 其主要有效成分为以苦参碱(matrine)为主的多种生物碱，是临床常用中药，其性寒、味苦，具有清热燥湿、杀虫止痒的作用，临床可用于治疗湿热所致的白带、皮肤瘙痒、疥癣等。wWW.11665.CoM据文献报道，其对治疗宫颈糜烂、阴道炎和阴道滴虫具有良好的疗效。为此，笔者将苦参制成阴道栓剂，采用酸碱滴定法测定苦参总碱含量，并重点考察体外释放情况，以预测在体内的作用情况。现报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
鸭嘴形栓剂模(浙江诸暨制药设备厂) ，756紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），电子分析天平（ag135型）。
1.2 试药
苦参，经鉴定为豆科植物苦参sophora flavescens ait．的干燥根；羊毛脂（天津市永大化学试剂中心 批号20071106）；溴甲酚绿（上海试剂三厂 批号750221）；邻苯二甲酸氢钾（天津市天新精细化工开发中心 批号20060915）；苦参碱对照品（110805-200507,中国药品生物制品检定所） ；氧化苦参碱对照品（110780-200405,中国药品生物制品检定所） ；所用试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 处方组成［1］苦参总碱 200 g，羊毛脂64 g，半合成脂肪酸脂1 283 g，共制成栓剂1 000粒。
2.2 有效成分的提取及栓剂的制备
2.2.1 苦参总生物碱的提取工艺［2］其流程如下所示：
2.2.2 栓剂的制备先将苦参总碱与羊毛脂混合，研匀，边研磨边加入在45℃水浴锅上融化的半合成脂肪酸脂中，搅拌，待温度恒定45℃时迅速倾入涂有润滑剂的栓模中,冷却后除去溢出部分，起模即得。
2.3 含量测定
2.3.1 测定方法
取本品5粒，置分液漏斗中，加氯仿30 ml振摇，使溶解，用盐酸液（0.2 mol/ml）25，20，10，10，10 ml分次提取，酸液合并于100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取20 ml置另一分液漏斗中，加氯化钠约6 mg使饱和，再加入用氯化钠饱和的氢氧化钠液（0.1 mol/ml）5 ml，用氯仿25，20，10，10，10 ml分别提取，氯仿液依次用同一饱和氯化钠液5ml振摇，洗涤，再依次通过装有无水硫酸钠的漏斗，滤入另一分液漏斗中，漏斗以5 ml氯仿分3次洗涤，合并氯仿液，再精密加入硫酸液（0.05 mol/ml）10 ml及水20 ml振摇30 min，分取酸液于三角烧瓶内，氯仿层再用水洗涤3次，每次10 ml水液与上次酸液合并，置水浴上加热至无氯仿臭，放冷，加入甲基红指示液两滴，用氢氧化钠液（0.1 ml/l）滴定，即得。每毫升的硫酸液（0.05 mol/ml）相当于26.44 mg的氧化苦参碱（c15h24n2o2）。以空白栓同法测定校正结果，计算栓剂苦参总碱含量。本品每粒含苦参总碱以氧化苦参碱（c15h24n2o2）计应在80～100 mg。
2.3.2 吸收波长的选择
溴甲酚绿比色法测定苦参总碱含量，在416 nm处有最大吸收，故选416 nm为测定波长见图1。
2.3.3 缓冲液ph的选择
用500 ml烧杯盛100 ml蒸馏水置恒温水浴中调节至(37±1)℃加入1粒栓剂，开始计时并以100 r/min的速度搅拌，10 min取样6 ml，分别置6个分液漏斗中，每个1 ml，加入ph2.0，ph3.0，ph4.0，ph5.0，ph6.0，ph7.0缓冲液各8 ml，溴甲酚绿（bcg）1 ml，振摇后加入氯仿液10 ml，上下振荡一定时间，静置，待两相彻底分离后，取氯仿层，于416 nm处测定吸光度，以空白栓的氯仿萃取液为空白。结果缓冲液ph3.0时吸光度最大（见表1）。表1 缓冲液ph对吸光度的影响（略）
2.3.4 标准曲线
精密称取omat（氧化苦参碱）对照品10 mg，置10 ml容量瓶中，用蒸馏水定容。再精密量取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0置6个1 ml容量瓶中，配成100，200，400，600，800，1 000 μg/ml 的溶液后,处理如下:溶液1 ml，加入ph3.0缓冲液8 ml，溴甲酚绿（bcg）1 ml,振摇后加入氯仿液10 ml,上下振荡一定时间，静置，待两相彻底分离后，取氯仿层，于416 nm处测定吸光度，取1ml蒸馏水按上述方法处理作为空白。于416 nm处测定吸收度a，将浓度c(mg/l)对a值作线性回归，得标准曲线方程：a=0.006 1c+0.036 7，r=0.999 8，线性范围10～100 mg/l 。
2.3.5 精密度及重现性实验
配制800 μg/ml omat的对照品溶液，按“2.3.4”操作处理,分别在1 d内测定3次及每天测定1次，共测3 d。日内值分别是0.521，0.509，0.528，平均值为0.519±0.009 6，rsd为1.85％，日间值分别是0.521，0.542，0.516，平均值为（0.526±0.013 8），rsd为2.62％。
2.3.6 加样回收率测定
精密称取一定量苦参总碱，配制成浓度为0.312 g/l的样品溶液。取样品溶液1 ml，置3个5 ml容量瓶中，分别加人1 g/l氧化苦参碱对照品溶液120，150，180 μl，用蒸馏水定容，充分混匀，按上述方法测定，每个样测定两次。平均回收率99.49％ ，rsd值2．69％。
2.3.7 百分之百释放度的测定
用500 ml烧杯盛100 ml蒸馏水置恒温水浴中调节至(37±1)℃,加入1粒栓剂，开始计时并以100 r/min的速度搅拌，放置24 h并不断搅拌，取1ml，加入ph3.0缓冲液8ml，溴甲酚绿（bcg）1 ml，振摇后加入氯仿液10 ml，上下振荡一定时间，静置。待两相彻底分离后，取氯仿层，于416 nm处测定吸光度，以空白栓的氯仿萃取液为空白。重复5次，平均值为（0.622±0.001 6），rsd为0.26％。
2.4 释放度测定
2.4.1 试验方法［3］
用500 ml烧杯盛100 ml蒸馏水置恒温水浴中调节至(37±1)℃,加入1粒栓剂，开始计时并以100 r/min的速度搅拌，间隔5 min取样一次，每次5 ml，取样后立即补充5 ml蒸馏水。每次取样的处理方法如下：样品1 ml，ph3.0缓冲液8 ml，溴甲酚绿（bcg）1 ml,振摇后加入氯仿液10 ml,上下振荡一定时间，静置。待两相彻底分离后，取氯仿层，于416 nm处测定吸光度，以空白栓的氯仿萃取液为空白。
2.4.2 结果 本品在30 min释放100%，数据如表2，释放曲线如图2。表2 释放度测定测定结果（略）
2.4.3 关于释放机制根据ritger-peppas模型，采用mt/m∞=ktn（mt/m∞为药物在某一时间的累积释放分数%,t为释放时间，k为常数，n为ritger-peppas方程中表示释放机制的特征参数），以lg mt/m∞对lgt作图，得斜率n值为0.838，如图3所示，在0.45～0.89之间，说明苦参栓的释放是通过非fick扩散机制，为混合机制，也就是fick扩散和凝胶骨架溶蚀两种机制协同作用的结果，并且以溶蚀性机制为主。
3 讨论
苦参及其制剂以苦参碱为指标的含量测定方法有酸碱滴定法、薄层扫描法、高效液相色谱法（hplc法）、高效毛细管电泳法 (hpce)等，以苦参总碱为指标的含量测定方法有酸碱滴定法、酸性染料比色法、溴甲酚绿比色法［4］。本文采用酸碱滴定法测量苦参总碱的含量，方法简便，可操作性强。
苦参中生物碱大都属于喹喏里西啶类生物碱，均含有仲胺或叔胺基团或者兼而有之，它们与bcg在一定的ph值条件下结合产生较强的可见吸收，因此体外释放度考察选用溴甲酚绿比色法测定苦参总碱含量［5］。根据参考文献［3］，合适的ph值是主要影响因素，其他条件对测定结果影响较小，且氯仿萃取液的吸收值相当稳定。因此，缓冲液及显色剂用量和显色时间不再作为考察对象。
【参考文献】
［1］高 华.最新国家药品标准实施手册［s］. 北京:社会科学文献出版社，2004，1156 （ws3-b-1593）.
［2］匡海学.中药化学，第ⅰ版［m］.北京：中国中医药出版社，2004：356.
［3］孟祥松，时 军. 溴甲酚绿比色法测定苦参总碱含量的研究［j］. 安徽医药，2007，11（1）：41.
［4］国家药典委员会．中国药典［s］. 北京：化学工业出版社，2005：141．
［5］韩宪忠，刘 新，聂 进，等.苦参碱缓释片的制备及释放度研究［j］. 中成药, 2008,33（3）:365.
