作者：郑明彬，龚萍，杨雪梅，吴喜仁，梅俊
【摘要】 目的制备包载甲氨蝶呤（mtx）的聚乙交酯丙交酯（plga）纳米颗粒并研究体外释药机制。方法采用溶剂挥发法制备包载mtx的plga纳米颗粒，对其形貌、大小进行表征，测定体外释药曲线，并采用药学模型进行拟合。结果纳米颗粒平均粒径为175.9nm，具有明显的缓释作用，释药行为最符合双相动力学方程。结论该研究为开发mtx的新剂型提供了实验依据。
【关键词】 甲氨蝶呤； 聚乙交酯丙交酯； 纳米颗粒； 拟合
abstract：objectiveto prepare methotrexate(mtx) loaded poly(lactic-co-glycolic) (plga) nanoparticles and investigate the mechanism on release in vitro.methodsmtx-loaded nanoparticles were prepared by emulsion solvent evaporation method. the morphology and size of nanoparticles were studied, and in vitro release curve was measured. moreover, the release data were fitted with different mathematical models. resultsthe mean size of nanoparticleas was 175.9nm, and the obtained nanoparticles showed evidently sustained release effect. the release behavior of mtx loaded nanoparticles was well fitted to the double phase dynamic equation.conclusionthe work provides an experiment basis for the development of novel ideal administration of mtx.
key words：methotrexate; poly(lactic-co-glycolic); nanoparticles; fit
甲氨蝶呤（mtx）是一种抗代谢类抗肿瘤药物，对乳腺癌、急 性白血病、骨肉瘤等都具有显著的疗效，但其有引起骨髓抑制细胞下降，肝肾功能损伤等毒副作用，甚至危及患者生命［1,2］。wWw.11665.coM为降低mtx的毒副作用，提高药物疗效，本研究以生物可降解材料聚乙交酯丙交酯（plga）为材料，制备了包载mtx的plga纳米颗粒，考察其在pbs缓冲溶液的释放行为，并采用多种数学模型拟合体外实验数据，确定最佳的拟合模型。
1 器材
zeta sizer 3000hs型激光粒度分析仪（英国malvern公司）；spa-400原子力显微镜（日本精工公司）；vc 130 探头式超声处理机（美国sonics&materials公司）；uv-1600紫外-可见分光光度计（北京瑞利）。聚乙交酯丙交酯（plga，成都航利生物材料研究所）；聚乙烯醇（湘中精细化学品厂）。甲氨蝶呤（mtx，浙江万马药业公司）。
2 方法
2.1 纳米颗粒的制备与表征参照文献方法［3］，加以改进，称取mtx 5 mg和50 mg plga［l:g=50:50，l:g为共聚物plga中乳酸（lactide）和乙醇酸（glycolide）单体的质量比］溶于2 ml二氯甲烷，滴加入8 ml质量百分比为2.5%聚乙烯醇水溶液中，在冰浴下用探针式的超声波超声10 min。减压除去二氯甲烷，3 000 r/min离心分离，所得的沉淀用超纯水洗涤3次，制得包载mtx的plga纳米颗粒。
取少许颗粒加水混匀稀释，取样滴于云母片上，自然干燥后，利用原子力显微镜表征纳米颗粒形貌。载药的纳米颗粒的平均粒径、粒度分布以及zeta电位通过malvren zetasizer 3000hs分析仪测定。
2.2 纳米颗粒的体外释放冻干包载mtx的plga纳米颗粒，精确称取冻干粉末10 mg，溶于3 ml氯仿中，然后加入7 ml甲醇，沉淀聚合物，10 000 r/min离心10 min，以分光光度法测得上清液中mtx的含量。
精密称取10 mg冻干纳米颗粒置于透析袋中，加入pbs缓冲溶液（ph=7.4）5 ml，将透析袋置于50 ml pbs缓冲溶液中，保持温度37℃，每隔一定时间取1 ml（同时补充等量同温介质），用分光光度法测定各时间点的mtx的含量，计算药物的释放率，绘制释药曲线。
2.3 模型模拟法制剂的体外释放数据采用表1中的数学模型进行拟合，以推测释药机理［4～6］。表1 数学模拟模型（略）
3 结果
3.1 纳米颗粒的特性表征本研究制备的包载mtx的plga纳米颗粒为浅棕色的物质，zeta电位为-18.7 mv，纳米颗粒的原子力图见图1（a），制备出来的纳米颗粒都为较完整的球形，分散性好，颗粒粒径较均匀。粒径分布如图1（b）所示，颗粒的平均粒径为175.9 nm，粒径分布范围为18～225 nm，其中小于51 nm占99%，颗粒大小基本上与原子力图吻合。
3.2 体外药物释放曲线包载mtx的plga纳米颗粒的体外释放如图2所示，该纳米颗粒的体外释放存在两相，前4h处于快速释放期，释放的mtx累积量达到加入总量的42.9%，在该阶段，存在于颗粒表面的药物较快地释放出来；此后进入缓慢释放期，随后的68h释放量相当于药物总量的36.9%，存在于颗粒中的药物逐渐释放出来。
3.3 模型拟合r2为决定系数，是判断回归方程拟合度的重要指标。r2越趋向于1，拟合的效果越好［4，5］。由表2可见，包载mtx的plga纳米颗粒的释药过程采用双相动力学方程拟合得到的r2为0.995 7，最接近1。说明整个释药过程分为两相，前期为快速释放相，后期为缓慢释放相，此释药特点符合缓释原理。表2 释放模型拟合结果（略）
4 结论
本文以生物相容性好、可降解材料plga为载体，采用溶剂挥发法，制备了新的mtx纳米药物制剂，其制备工艺简便易行。 包载mtx的plga纳米颗粒的颗粒呈典型的球形，粒径较均匀，分散性好。 体外释药研究表明，纳米颗粒显示了显著的缓释作用，采用双相动力学方程拟合效果最佳。
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