作者：范婧娴，刘友平，李旻，李惠勇，张玲
【摘要】 目的研究大孔吸附树脂纯化干姜中姜酚类成分的工艺条件及参数。方法以姜酚类成分的精制度为指标，考察大孔吸附树脂对姜酚的吸附性能和洗脱 参数。结果最佳工艺条件为树脂类型选用ab-8型；树脂用量是2.25 g·g-1（药材:干树脂）；蒸馏水6 bv、40％乙醇5 bv、80％ 乙醇4 bv以1 bv·h-1速度依次洗脱，收集80％ 乙醇洗脱部位。结论通过大孔吸附树脂富集与纯化，姜油含姜酚34.3%，精制度为357.7%。该法可以较好地纯化干姜姜酚类成分。
【关键词】 姜酚； 干姜； 大孔树脂； 纯化
abstract：objectiveto study the technological parameters of purifying gingerols with macroporous resin．methodswith the purity as indexes，the absorption characteristics and elution parameters were studied．resultsthe best technological parameters is using macroporous resin of ab-8 and was washed with 6bv of distilled water，5bv of 30％ ethanol and 4bv of 70％ ethanol，successively．gingerols was enriched in the 80％ ethanol elution．conclusionenriched an d purified by macroporou resin，the contents of gingers in ginger oil was 34.3％ and the purity reached 357.7％.so the established method is feasible．
key words： gingerols； zingibers； macropomus resin； purification
干姜为姜科植物姜zingiber officinale rose.的干燥根茎，为常用中药［1］，始载于《神农本草经》，味辛、性热，有温中散寒、回阳通脉、温肺化饮等功效，常用于脘腹冷痛及寒饮喘咳等症的治疗。www.11665.coM干姜主要有效成分有挥发油、姜酚类、二苯基庚烷三大类成分［2］。其中姜酚是干姜呈多种药理作用的主要功能因子［3～5］。本文对大孔吸附树脂纯化干姜姜酚类成分的工艺条件进行了研究。
大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，具有吸附快、解吸快、吸附容量大、易于再生等特点，已被广泛应用于天然药物有效成分的纯化和富集。大孔吸附树脂纯化中药有效成分的影响因素可从提取液、树脂类型及性质、洗脱过程3个方面考虑，对其纯化效果可以通过吸附量、解吸率、吸附动力学试验等指标进行综合评价［6，7］。本研究以姜酚类成分的精制度为指标，通过树脂筛选及洗脱过程各因素考察，确定了大孔吸附树脂纯化干姜姜酚类成分的工艺条件。
1 仪器与试药
lc-10a高效液相色谱仪（日本岛津公司）；class-vp工作站（日本岛津公司）；bp211d电子分析天平（十万分之一），bp121s电子分析天平（万分之一）（德国sartorius公司）；w201b恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司）。
甲醇、乙腈（色谱纯，tedia公司），其它试剂均为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）。辣椒碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0773-9506，含量测定用）。dm301，d101，da201大孔吸附树脂(天津农药有限公司树脂分公司)，d140大孔吸附树脂(晨光化工研究院) ，ab-8大孔吸附树脂(天津市光复精细化工研究所)。
干姜药材2008-01购自四川犍为干姜gap基地。
2 方法及结果
2.1 色谱条件的建立色谱条件：色谱柱为hypersil bds c18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特分析仪器有限公司)；流动相为乙腈∶0.1%磷酸水∶甲醇（55∶44∶1）；检测波长为280 nm；柱温为30℃；流速为1.0 ml·min-1。
2.2 对照品溶液的配制及标准曲线的制备辣椒素对照品溶液的制备：精密称取辣椒碱对照品适量，置同一量瓶中，加甲醇制成每毫升含辣椒碱0.26mg的溶液，即得。
系统适应性溶液的制备：分别精密吸取1 ml辣椒碱对照品溶液及1 ml供试品溶液混合均匀，即可。
标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液1，2 ，4，6 ，8，10 μl注入液相色谱仪，按上述条件测定辣椒碱色谱峰面积，以辣椒碱量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程：y=551 100x-4 721.8，r=0.999 9，表明辣椒碱在0.26～2.60 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.3 大孔吸附树脂纯化酚酸类成分的工艺条件研究
2.3.1 树脂的预处理与装柱取大孔吸附树脂用乙醇浸泡24 h，乙醇湿法装柱，乙醇洗脱，检测流出的乙醇液，至乙醇液与水混合(1∶5) 不呈白色浑浊，再以蒸馏水洗至无醇味。
2.3.2 大孔吸附树脂类型的选择以吸附量和解吸率为指标，对d101 ，da201 ，dm301，d140，ab-8大孔吸附树脂进行考察，以确定纯化干姜姜酚类物质的大孔吸附树脂类型。各类大孔吸附树脂物理性能见表1。表1 各类大孔吸附树脂物理性能（略）
精密量取各型树脂（干重约1g）置150 ml具塞锥形瓶中，分别精密加入川芎提取液75 ml(约含生药量0.1 g·ml-1)静置24 h，充分吸附后，滤过，测定滤液中剩余姜酚量，计算吸附量；将吸附平衡后的树脂转移至锥形瓶中，用100 ml 95%的乙醇解吸，测定解吸液中姜酚的含量，计算解吸率。见表2。表2 各类大孔吸附树脂对姜酚的吸附量和解吸率（略）
吸附量=上样液中姜酚量（mg）-泄漏液中姜酚量(mg)
解吸率(%) =［解吸液姜酚量（mg）/吸附量（mg）］×100%
由表2可知，考察的几种大孔吸附树脂中，ab-8大孔吸附树脂有最大吸附量和最大解析率，分别为39.64 mg和91.62%，故选择ab-8大孔吸附树脂纯化干姜姜酚类物质。
2.3.3 上柱药液浓度的确定量取一定体积的药液，分别稀释成不同浓度，通过装有约6 g ab-8树脂的吸附柱中，以2～3 ml·min-1流速进行吸附，收集流出液，测定姜酚量，计算树脂比吸附量见表3。表3 上样液浓度考察（略）
结果表明，上柱药液生药浓度为0.15 g·ml-1时，ab-8大孔吸附树脂对姜酚的比吸附量最大，故确定上柱药液生药浓度为0.15 g·ml-1。
2.3.4 比上柱量的确定比上柱量表示达吸附终点时，单位质量干树脂吸附夹带成分的总和，表示树脂吸附、承载的总体能力，比上柱量越大则树脂的承载能力越强。将总体积为120 ml的药液（生药0.15 g·ml-1）通过约6 g ab-8型树脂柱，以2～3 ml·min-1的流速进行动态吸附，分段收集流出液，每份10 ml。测定流出液中姜酚量，绘制动态泄漏曲线（见图1），由泄露曲线确定比上柱量为 2.25 g·g-1（药材:干树脂）。
2.3.5 洗脱溶媒的确定按上述确定的工艺条件，精密量取上样药液90 ml（生药0.15 g·ml-1），依法上柱，先用蒸馏水6 bv洗脱，再依次用30％乙醇，50％乙醇，60％乙醇，70％乙醇，80％乙醇，95％乙醇各5 bv洗脱，收集洗脱液，测定姜酚量及固形物量，计算洗脱率。见表4。洗脱率(%)=［洗脱液中姜酚量(mg)/树脂吸附姜酚量(mg)］×100%。表4 不同浓度乙醇洗脱实验数据（略）
结果表明，50%以上浓度的乙醇都可将姜酚不同程度的洗脱下来，且80％乙醇能将大部分姜酚洗脱下来，故确定以80％乙醇作为干姜姜酚类成分的洗脱溶媒；蒸馏水、30％乙醇洗脱时均有一定量的固形物存在，说明蒸馏水、30％乙醇洗脱达到纯化了姜酚类成分。
2.3.6 洗脱溶媒用量的确定精密吸取上样药液（生药0.15 g·ml-1）90 ml，按上述确定工艺依法上柱，依次用蒸馏水、30%乙醇，80％乙醇各6 bv洗脱，洗脱速度为2～3 ml·min-1，以1 bv/份收集流份。测定各流份中姜酚含量及固形物量，计算洗脱率。见表5。表5 洗脱溶媒用量实验数据（略）
结果表明， 40％乙醇洗脱时，在流份中未检出姜酚类成分，而固形物量较高，说明40％乙醇洗脱可达到除杂质的目的，当40％乙醇用量至5 bv，几乎无固形物说明溶于40％乙醇的杂质已除去，故确定40％ 乙醇用量为5 bv；80％乙醇洗脱用量至4 bv时，姜酚已基本被解吸附完全。故确定洗脱溶媒用量为蒸馏水6 bv、40％乙醇5 bv、80％乙醇4bv，收集80％乙醇洗脱部位。
综上所述，初步确定最佳工艺为ab-8大孔吸附树脂纯化干姜中姜酚类成分，蒸馏水6 bv、40％乙醇5 bv、80％ 乙醇4 bv以1 bv·h-1速度依次洗脱，收集80％乙醇洗脱部位。
2.4 工艺验证实验上述确定的工艺条件，量取3份0.15 g·ml-1药液90 ml进行验证实验。结果见表6。精制度（%）=(80%乙醇洗脱液固形物中姜酚含量/上柱液固形物中姜酚含量)× 100 上柱液固形物中姜酚含量为9.6%。表6 大孔树脂纯化工艺验证实验数据（略）
结果表明，干姜提取物经大孔树脂纯化后有效地降低了固形物的含量，提高了姜酚的含量，且该工艺稳定、可行。
3 讨论
目前，虽已有文献报道［8，9］采用大孔树脂分离纯化干姜总姜酚，但尚未对其制备工艺进行系统深入的研究，且使用甲醇或正己烷-乙醇洗脱，以上洗脱剂价格昂贵且毒性大，不适于工业生产。本实验选用不同浓度的乙醇洗脱，并且对干姜大孔树脂吸附纯化工艺进行了深入的研究，选取了5种树脂进行实验，筛选出吸附分离纯化姜酚的最佳树脂为ab-8大孔吸附树脂；对ab-8大孔吸附树脂分离、富集总姜酚的性能、洗脱参数等进行了研究，筛选出了ab-8大孔吸附树脂纯化干姜总姜酚的工艺参数。
【参考文献】
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