作者：施薇，王淑敏，郑友兰，刘志强

【摘要】  　　目的优选黄连生药中盐酸小檗碱的最佳提取工艺 。方法 以水作为提取溶剂，通过正交实验，高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量为指标，考察提取溶剂体积、提取时间以及提取次数对提取效果的影响，优选出最佳的提取工艺。结果黄连生药中盐酸小檗碱的最佳提取工艺为药材加入8倍量水，回流提取2次，1.5h/次,测得盐酸小檗碱含量为6.5499％。 结论该提取工艺条件科学，成本较低，提取得到的盐酸小檗碱含量较高,具有一定的实用价值。

【关键词】  黄连； 盐酸小檗碱； 正交实验； 提取工艺； 高效液相色谱

　　abstract：objectiveto optimize the of extract process of berberine hydrochloride in rhizoma copotidis by l9(34) orthogonal method. methodswith  water as extraction solvent, the contents of berberine hydrochloride determined by hplc as the index, the effects of volume of extraction solvent, time of refluxing and extraction times were investigated and the l9(34) orthogonal experiment was adopted to optimize the process.resultsthe optimum extraction process  was achieved with addition of water as extraction solvent (8 times raw herb in volume) into materials,refluxing 1.5hours and extracting for 2 times. the contents of berberine hydrochloride was 6.5499%.conclusionthe optimum extraction process for berberine hydrochloride is scientific, cost is comparatively low, the contents of berberine hydrochloride is high. this method has wider practical value in production .    

　　key words： berberine hydrochloride ;   orhogonal experiment;   extraction process;   hplc
   
　　黄连为毛茛科（ranunculaceae）植物黄连coptis chinensis franch，三角叶黄连coptis deltoidea c.y. cheng et hsiao 或云连coptis teeta wall.的干燥根茎。WwW.11665.Com药材依次习称为“味连”“雅连”“云连”［1］。黄连性寒，味苦，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒之功效。黄连中主要成分为小檗碱，具有抗腹泻、抗炎、免疫促进、降血压、抗心律失常、降血糖等作用。本文主要通过正交实验优选水提取盐酸小檗碱的最佳工艺，并且利用高效液相色谱法［2～4］ 对盐酸小檗碱的含量进行测定，为其工业化生产提供实验依据。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　waters2690 高效液相色谱仪，2996 uv diode detector 检测器（美国waters 公 司产品）；sanoriusbs110s十万分之一分析天平（北京赛多利斯有限公司产品）； kq－500de型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司产品）。

　　1.2  试药

　　黄连（购于四川江油中坝附子科技发展有限公司, 由长春中医药大学王淑敏教授鉴定为雅连）；盐酸小檗碱对照品（供含量测定，批号：110713-200208，中国药品生物制品检定所）；甲醇为分析纯；超纯水、乙腈、磷酸均为色谱纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交实验设计

　　称取生药30 g,以水为提取溶剂。取提取溶剂体积，回流提取时间，提取次数3个因素，每个因素取3个水平，按l9（34）正交实验设计对提取物进行考察，以盐酸小檗碱含量为考察指标。表1  因素水平（略）

　　2.2  提取工艺的优选

　　2.2.1  色谱条件

　　色谱柱为iamonsil c18（5 μm, 4.6 mm×250 mm），柱温35℃；流动相为乙腈-0.1%磷酸（20∶80）；流速1 ml·min-1；检测波长228 nm。

　　2.2.2  供试液制备

　　精密称取不同提取条件下的黄连提取浸膏0.2 g，置于具塞三角瓶中，加入25 ml甲醇，精密称取重量，超声30 min，放冷，补足重量，滤过，精密量取0.5 ml 滤液置于5 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45 μm滤膜过滤，即得。

　　2.2.3  方法学考察
   
　　标准曲线的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品2.01 mg置于10 ml的量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度,摇匀，得盐酸小檗碱对照品溶液（0.201 mg·ml-1）。在上述色谱条件下，分别精密吸取1，4，6，8，12 μl注入色谱仪，以盐酸小檗碱质量x（mg）对吸收峰面积y回归，得回归方程：y＝3.913x-0.179 3，r=0.999 9,在0.201～2.412 μg 范围内线性关系良好。

   
　　精密度实验：精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定结果的rsd=0.17％，表明仪器的精密度良好。
   
　　稳定性实验：取供试品液分别在2，4，8，12，24 h分别进样10 μl,在上述色谱条件下测定峰面积,测定结果的rsd=0.69％，(n=5)，表明供试品液在24 h内稳定。
   
　　重复性实验：取同一批号样品5份，按含量测定方法进行测定，其结果的rsd＝0.30％（n=5）。表明方法的重复性良好。
   
　　加样回收率实验：精密称取同法测定的已知含量 （7.225 5 mg/g） 样品共5份，分别精密加入对照品适量，依法测定，计算回收率。结果见表2。平均回收率x=99.073％，rsd=1.034％。表明本法准确性较好,方法可行。表2  盐酸小檗碱回收率实验结果（略）

　　2.2.4  样品盐酸小檗碱的含量测定精密吸取正交实验各供试品溶液10 μl，注入色谱仪，以外标法计算盐酸小檗碱的含量。结果见表3～4。 表3  l9（34）正交实验结果，表4 方差分析（略）。

　　根据方差分析表明，提取次数对提取工艺的影响具有显著性意义，为主要影响因素。各因素作用主次顺序为c﹥a﹥b，确定最佳提取工艺为a1b2c2,即药材加8倍量水，提取2次，回流提取1.5h/次。

　　2.2.5  最佳工艺验证实验为考察上述优选提取工艺的稳定性，取黄连3份，每份30 g,按优选出的最佳提取工艺进行提取，在上述色谱条件下测定盐酸小檗碱含量。结果见表5 。  表5   盐酸小檗碱含量（略）
   
　　按正交实验优选的最佳提取工艺进行验证实验，3次结果均处于最高水平，证明该提取工艺稳定、可靠。

　　3  讨论
   
　　本实验通过正交设计优选了黄连的提取工艺，以提取所得浸膏中的小檗碱的含量为考察指标，确定了最佳的提取工艺：药材加入8倍量水，回流提取2次，1.5 h/次。按照优选出的最佳提取工艺进行验证性实验，稳定性较理想，与其他的提取工艺相比较，其提取成本低廉，工艺简单，适合于工业生产，有一定的实用价值。

【参考文献】
  　　［1］李家实. 中药鉴定学，第1版［m］. 上海：上海科学技术出版社，2000：88.

　　［2］孙光文，胡华明，杨先哲，等.hplc 测定黄连膏中小檗碱的含量［j］. 中成药，2004，26（10），25.

　　［3］袁文杰，赵毅山.hplc测定香连丸中盐酸小檗碱的含量［j］. 中成药，2006，28（9）：1395.

　　［4］晃若冰，张浩，庄燕黎，等.高效液相色谱法测定黄连药材中小檗碱型生物碱的含量［j］. 药物分析杂志，2003，23（5）：354.