作者：区计明 ,邓瑞云 ,陈永刚 周改莲，林励 ,成陈波 李明
【摘要】 目的 建立hplc法测定保健食品脑忆源胶囊中淫羊藿苷含量的方法。方法 采用色谱柱:luna c18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈水(体积比30∶70)，流速：1.0 ml·min-1，检测波长：270 nm。结果 淫羊藿苷在0.069 ～0.483 μg范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为95.39%,rsd为2.5%(n=5)。结论 所建立的含量测定方法简便准确，可用于脑忆源胶囊的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法;脑忆源胶囊;淫羊藿苷;含量测定
abstract:objective to determine icariin in naoyiyuan capsules by hplc.methods hplc was performed on luna c18column(150 mm×4.6 mm，5 μm)with the mobile phase consisted of acetonitrilewater(30∶70)at a flow rate of 1.0 ml·min-1，and the detection wavelength was at 270 nm.results good linearity resulted in the concentration range of 0.069-0.483 μg，r=0.999 9.the average recovery was 95.39% with rsd of 2.5% (n=5).conclusion this method is simple and accurate，and can be used for quality control of naoyiyuan capsules.
key words:hplc; naoyiyuan capsules; icariin; determination
中医学认为“肾生髓，脑为髓海”，即通过补肾益脑可达到辅助改善记忆功能的作用。www.11665.com保健食品脑忆源胶囊以补肾要药巴戟天为君药，淫羊藿为臣药，伍以枸杞子和山药研制而成，具有改善记忆、缓解疲劳的功能。研究已证实，巴戟天和枸杞子含有大量的糖类物质，可用于改善记忆力、缓解体力疲劳及抗衰老等[1，2]。淫羊藿含有丰富的黄酮类物质[3]，可增加脑血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢,抗衰老等 [4]。
方中君药巴戟天中作为功能因子的糖类物质无紫外吸收[5]，定量分析难度较大。本实验选择臣药淫羊藿中主要有效成分淫羊藿苷作为脑忆源胶囊检测指标，建立其含量测定方法。
1 仪器与试药
天美液相色谱议(lc2030型紫外检测器，l2200型进样器，lc2130型泵);elo2116729型紫外分光光度计;bs110s 电子 天平(sartorius 公司)。脑忆源胶囊样品 (自制，批号20080624、20080819、20080916);淫羊藿苷对照品( 中国 药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0737200111);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，甲醇、乙醇均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备[6]
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇溶解制成每1 ml含淫羊藿苷34.5 μg的溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取本品3粒(批号20080819,平均粒重0.45 g)，去囊壳，取内容物约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加体积分数为80%乙醇25 ml，称定重量，超声处理30 min，再称定重量,用体积分数为80%的乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.1.3 阴性样品溶液的制备 取除淫羊藿外的药材，按处方比例添加辅料，按脑忆源胶囊制备工艺制得阴性制剂样品，再按“2.1.2”项下方法制备，即得。
2.2 色谱条件[7]及系统适应性试验
色谱柱：luna cl8(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈水(体积比30∶70)，流速：1.0 ml·min-1，检测波长：270 nm。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl进样测定，记录色谱图。淫羊藿苷峰保留时间为6.2 min，阴性样品在淫羊藿苷峰位置无干扰峰，供试品中淫羊藿苷与其他组分分离完全，分离度为2.09。理论板数以淫羊藿苷峰计不低于6 000，见图1。
2.3 线性关系考察
精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12、14 μl，按上述色谱条件测定，以峰面积(y)为纵坐标，进样量(x)为横坐标，进行线性回归,得回归方程：y=132307 x-10726，r=0.999 9,结果表明淫羊藿苷在0.069～0.483 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，淫羊藿苷峰面积rsd为0.95%(n=5)，表明仪器精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批号样品(20080819)5份，按“2.1.2”项下方法制备，进样10 μl，测定淫羊藿苷含量，结果rsd为2.7%，表明此方法重复性良好。
2.6 稳定性试验
取“2.1.2”项下供试品溶液10 μl，分别于0、4、8 h进样，测定淫羊藿苷峰面积，结果峰面积积分值rsd为0.59% (n=3)，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.7 加样回收试验
精密称取已知含量的样品(20080819)5份，每份约0.05 g，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液1.0 ml (0.49 mg·ml-1),按“2.1.2”项下方法制备加样回收供试品溶液,进样10 μl测定， 计算 回收率，结果见表1。
2.8 样品测定
精密称取3批样品各0.1 g，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μl，依法测定淫羊藿苷的峰面积，照外标一点法计算含量，结果见表2。表1 淫羊藿苷加样回收率试验表2 样品测定结果
3 讨论
3.1 选择检测波长时,对供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液分别进行紫外扫描,结果显示对照品和供试品均在270 nm处有最大吸收,阴性对照溶液在270 nm处无吸收,故选择270 nm作为检测波长。
3.2 考察了不同比例的乙腈水为流动相进行测定,结果乙腈水的比例为30∶70时，淫羊藿苷峰形良好，各组分分离效果好，阴性样品无干扰。
3.3 根据本试验测定结果，暂定脑忆源胶囊中淫羊藿苷的含量不得低于3.7 mg·粒-1，为今后建立制剂的正式质量标准提供 参考 。
【参考 文献 】
[1] 黄琳娟,林颖,田庚元,等.枸杞子中免疫活性成分的分离、纯化及物理化学性质的研究[j].药学学报,1998,33(7):512-516.
[2] 肖凤霞,林励.巴戟天补肾壮阳作用的初步研究[j].食品与药品,2006,5(8):45-46.
[3] 陈永刚,刘晓涵,区计明,等.不同测定方法测定淫羊藿中总黄酮含量的比较[j].食品科技,2009(5)：291-294.
[4] 沈自尹.淫羊藿总黄酮延缓衰老的研究[j].世界 科学 技术-中医药 现代 化,2005,7(1):12-15.
[5] 刘晓涵,陈永刚,林励,等.不同产地巴戟天中糖类成分hplcelsd指纹图谱研究[j].中草药,2009,40(10):1641-1643.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部[m].北京:化学 工业 出版社,2005:229.
[7] 钟涧.高效液相色谱法测定龟鹿补肾胶囊中淫羊藿苷的含量[j].广东药学院学报,2004,20(4):625-626.
