【摘要】 目的 建立健脾增肥片中橙皮苷的测定方法。方法 采用hplc法，色谱柱：kromasilc18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇醋酸水(体积比35∶4∶61)，柱温为室温，流速为1.0 ml·min-1，检测波长为283 nm。结果 橙皮苷在0.300 8～2.105 6 μg范围与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9，n=7)，平均回收率为101.68%，rsd为1.45%。结论 该方法精密度高、重现性好，可用于健脾增肥片的质量控制。
【关键词】 健脾增肥片;橙皮苷;hplc法
abstract:objective to establish a determination method for hesperidins in jianpizengfei tablets by hplc. methods hplc was performed on a kromasil c18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm) with methanolacetic acidwater(35∶4∶61) as the mobile phase at a flow rate of 1 ml·min-1 and the detection wavelength was at 283 nm.results it showed a good linearity at the range of 0.300 8～2.105 6 μg (r=0.999 9,n=7) and the average recovery of hesperidins was 101.68%(rsd=1.45%).conclusion the method is sensitive, accurate, reproducible, specific and can be used for the quality control of jianpizengfei tablets efficiently.
key words:jianpizengfei tablets; hesperidins; hplc
健脾增肥片由白术、黄芪、陈皮等十三味药材制成，具有补气、健脾、安神的功效，主要用于胃口呆滞、发育不良、体重减轻、睡眠不宁等。Www.11665.com本方重用白术为君药，黄芪补气固表、止汗脱毒，陈皮理气健脾、调中、燥湿，共为方中臣药。陈皮含有陈皮素、橙皮苷、新橙皮苷等成分，其中橙皮苷具有较强的生物活性， 文献 [1～4]也多用橙皮苷作为药材或制剂的检测指标。为了利于健脾增肥片的市场推广，本研究采用hplc法测定该制剂中橙皮苷的含量，在 参考 2005年版《 中国 药典》[1]基础上加以改进，大大缩短了测定周期。经方法学验证，所建立的方法分析快速、准确、灵敏度高、重现性好，可用于健脾增肥片中橙皮苷的含量测定，为建立健脾增肥片 科学 、可行的质控标准提供依据。
1 仪器与试药
waters高效液相色谱仪(2487型dad检测器)，kromasilc18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);德国bp211d sartorius 电子 天平(十万分之一);橙皮苷对照品(批号0721200010)购自中国药品生物制品检定所;健脾增肥片(自制，批号090326、090411、090606);甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1 ml中含75.2 μg的溶液，摇匀，0.2 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取本品研细，称取细粉约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密移入甲醇25 ml，精密称重，超声90 min，取出，放冷至室温，以甲醇补足重量，摇匀，0.2 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.1.3 阴性对照液的制备 取处方组成中除陈皮外的其余各味药材，按健脾增肥片生产工艺制成缺陈皮的阴性对照品，按“2.1.2”项下的方法制备得阴性对照液。
2.2 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：kromasil c18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相：甲醇醋酸水(体积比35∶4∶61);流速：1.0 ml·min-1;检测波长：283 nm。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液10 μl注入液相色谱仪，橙皮苷的保留时间约为20.1 min，理论塔板数以橙皮苷峰计不低于5 000，橙皮苷与其他物质可基线分离，且阴性对照液无干扰，见图1。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取橙皮苷对照品溶液4、8、12、16、20、24、28 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(y)为纵坐标，橙皮苷进样量(x)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为y=1507500 x-11112，r=0.999 9(n=7)，表明橙皮苷在0.300 8～2.105 6 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样6次，峰面积的rsd为0.73%，表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验 取健脾增肥片(批号090326)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6 h进样10 μl，记录峰面积。结果峰面积的rsd为1.48%，表明供试品溶液在6 h内稳定，可满足测定需要。
2.6 重复性试验 取同一批号样品(批号090326)样品6份，按“2.1.2”项下方法制备并进行测定，经外标法 计算 ，橙皮苷平均含量为4.253 mg·g-1，rsd为0.38%，结果表明本方法具有较好的重复性。
2.7 加样回收率试验 取已知含量的健脾增肥片(批号：090326)0.5 g，精密称定，共6份，分别精密加入橙皮苷对照品储备液(每1 ml中含橙皮苷0.504 mg)5.0 ml，精密移入甲醇20 ml，依法测定，橙皮苷平均加样回收率为101.68%，rsd1.45%。结果见表1。表1 橙皮苷加样回收率试验结果
2.8 样品含量测定 取3批健脾增肥片(090326、090411、090606)，按 “2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μl，记录峰面积，外标法计算橙皮苷的含量，结果3个批号样品的含量分别为4.253、4.145、4.075 mg·g-1。
3 讨论
3.1 将超声提取法与2005年版《 中国 药典》(一部)[1]收载的陈皮药材含量测定项下索氏提取法进行了比较，结果发现药典方法耗费时间很长(共约12 h)，提取效率却比超声法低;而且索氏提取法制成的供试品溶液颜色较深，提示其提取的杂质亦较多，故选用超声法进行提取。同时考察了超声提取30、60、90 min橙皮苷的提取效率，结果表明，超声不同时间的提取率有明显差异，超声时间越长，橙皮苷提取效率越高。因此确定供试品溶液提取方法为超声提取90 min。
3.2 白术为本方君药，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎等功效，含有挥发油、白术内酯等成分。有学者研究了白术或含白术的复方制剂中苍术酮[5]、白术内酯[6,7]的含量，但所采用的苍术酮、白术内酯等对照品均为实验室自制，不被中国药品生物制品检定所对照品目录收载，故作为建立质量标准使用并不合适。黄芪为方中臣药，具有补气固表、利尿托毒等功效，黄芪甲苷为其主要药效成分，也是含量测定常用的指标成分之一。但药典中[1]黄芪甲苷的测定方法供试液制备步骤繁琐，需经多次有机相水相液液萃取，不利于成本控制和环境保护，且黄芪甲苷色谱峰存在不明杂质的干扰。故本研究选用另一臣药陈皮中橙皮苷作为指标成分进行含量测定，具有操作步骤简单、避免使用有毒溶剂的优点。
3.3 由样品含量测定结果可知，3批次健脾增肥片中橙皮苷含量接近，说明健脾增肥片的原料性质、制备工艺均比较稳定，制剂质量可控性高。用本法测定健脾增肥片中橙皮苷的含量，方法简单、重现性较好，便于推广。
【 参考 文献 】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部[m].北京:化学 工业 出版社,2005:132,212.
[2] 关宏峰,刘晓秋,兰洲,等.hplc法同时测定中药柳穿鱼中柳穿鱼苷和橙皮苷的含量[j].沈阳药科大学学报,2009,26(2):119-122.
[3] 鄢燕,汤宏敏,饶毅,等.多波长高效液相色谱法测定血府逐瘀口服液中5种有效成分[j].药物分析杂志,2009,29(3):347-350.
[4] 郑玉光,李国川,朱学梅,等.高效液相色谱法测定香砂养胃浓缩丸橙皮苷含量[j].
