作者：黄晓文，樊轻亚，张煜帆，范华均
【摘要】 目的 优化农吉利中总黄酮微波辐射—溶剂提取的工艺条件。方法 在单因素试验的基础上，以牡荆素作为总黄酮含量的指标，采用正交试验法优化微波辐射功率、微波辐射时间、提取温度、提取时间等因素。结果 微波辐射溶剂提取法的最佳提取工艺为：微波辐射功率560 w，微波辐射时间2 min，液固比20∶1，提取温度70 ℃，提取时间2.0 h。结论 与常规溶剂回流提取法相比，采用微波辐射处理药材后再用溶剂进行提取，总黄酮的提取率明显提高;优选得到的工艺稳定可行。
【关键词】 微波辐射;农吉利;总黄酮;牡荆素;正交设计
abstract:objective to optimize the experimental conditions of microwaveirradiated reflux extraction of total flavonoids from crotalaria sessiliflora l. method orthogonal test was designed including microwave power,irradiation time,extraction temperature,extraction time based on single factor experiments with vitexin as index constituent of the total flavonoids. results optimum conditions were resulted with 20 times of methanol extracting for 2 h at 70 ℃ after irradiation of the medical materials for 2 min under microwave power 560 w. conclusions compared with the conventional solvent reflux extraction,the yield of total flavonoids from crotalaria sessiliflora l. was improved greatly after the pretreatment of microwave irradiation of the medicinal materials,which was feasible,easy and reliable.
key words:microwaveirradiation; crotalaria sessiliflora l; total flavonoids; vitexin; orthogonal design
农吉利系豆科植物野百合crotalaria sessiliflora l.的全草，味甘、淡、平，功能滋阴益肾、清热解毒、抗癌，主要用于痢疾、疮疖、耳鸣耳聋、头晕目眩及多种癌症的 治疗 。wWW.11665.cOM研究表明，农吉利中含有生物碱、黄酮及氨基酸等主要有效成分，其中黄酮类化合物具有保护心脑血管、利胆保肝、抗癌等多种生理活性[1-3]。
微波辐射法是一种用以提高药材提取率的药材辅助处理方法，具有快速高效、节能、节省溶剂等优点[4-5]。本文在参照 文献 [6]的基础上，通过微波辐射农吉利药材，使其细胞破壁，再用溶剂回流法提取其中的黄酮类化合物，并采用正交试验设计对微波辐射及回流提取的条件进行了优化，旨在确定农吉利中黄酮化合物提取的最佳工艺条件，为进一步研究开发农吉利中总黄酮含量的分布 规律 提供基础。
1 仪器与材料
uv1101紫外可见分光光度计(上海天美 科学 仪器有限公司)，pj21can微波炉(美的公司)，hh6恒温水浴锅(江苏金坛宏华仪器厂)，phs25数显ph计(上海精密科学仪器有限公司);re52cs1旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
牡荆素对照品( 中国 药品生物制品检定所，批号111687200501);甲醇(色谱纯，merk公司);其他试剂为分析纯，水为蒸馏水。
农吉利药材购自广州清平中药材市场、广西玉林中药材市场，经广东药学院药用植物与中药鉴定学教研室鉴定为豆科植物野百合crotalaria sessiliflora l.的全草。
2 方法与结果
2. 1 农吉利总黄酮提取液的制备
称取农吉利细粉5.0 g置培养皿中，加入适量水浸润，搅拌均匀、铺平，放入微波炉，按实验要求以不同的辐射功率和辐射时间辐射，再将样品转移到圆底烧瓶中，加入甲醇100 ml，在不同温度下以不同时间进行提取。提取液滤过，旋干，甲醇溶解后转入10 ml量瓶中，摇匀，定容，即得。
2. 2 总黄酮的测定
分别精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml的牡荆素对照品溶液(0.05 mg·ml-1)置10 ml具塞离心管中，加甲醇至刻度，密塞，摇匀。以甲醇作参比溶液，用1 cm比色皿，于328 nm波长处分别测定吸光度，并绘制标准曲线。结果表明：牡荆素的质量浓度在0.5～20.0 mg·l-1范围内线性关系良好，回归方程为a=0.05240c-0.01120，r=0.999 2。取“2. 1”项下提取液作为供试品溶液，依法测定，并 计算 总黄酮含量。
2. 3 单因素试验
以甲醇为溶剂，考察微波辐射功率、辐射时间，溶剂提取液固比、提取时间、提取温度对总黄酮得率的影响，结果见图1。
由图1可知：辐射功率为560 w时，总黄酮得率达到最大值，当功率继续提高，总黄酮得率反而下降;微波辐射时间在2 min时总黄酮得率达到最大值;总黄酮得率随着液固比的增大而升高，但变化不明显，超过20∶1后趋于稳定，从节约成本角度考虑，最佳液固比为20∶1;在70 ℃时农吉利总黄酮得率达到最高，再进一步提高温度，其得率有所下降;提取时间以1.5～2.0 h 为佳。
2. 4 正交试验设计优选最佳工艺
在单因素试验基础上，选取对总黄酮得率影响较大的4个因素：提取温度、提取时间、微波辐射功率、辐射时间作为考察因素，选用l9(34)进行正交试验，确定农吉利总黄酮提取得最佳工艺。结果见表1、表2。
根据极差分析和方差分析结果可知：4个因素对总黄酮提取率的影响程度由大到小依次为：提取温度>微波辐射功率>提取时间>微波辐射时间，优化工艺条件是a2b2c1d2，即：微波辐射功率为560 w，辐射时间为2 min，提取温度70 ℃，提取时间2.0 h。表1 因素水平表 表2 l9(34) 正交试验方差分析表
2. 5 验证实验
按照上述优化工艺进行了3次平行验证，总黄酮提取得率在6.47～6.73 mg·g-1之间，rsd为2.0%，结果稳定，表明该工艺合理可行。
3 讨 论
3.1 采用常规的直接溶剂回流法在相同的条件下进行对比，结果表明：经过微波辐射处理后的药材总黄酮得率明显提高(山东、广西2个产地药材的提取率分别高出了48%和23%)。
3.2 采用微波辐射农吉利药材，可使细胞破壁，再以甲醇为溶剂回流提取农吉利中的总黄酮，工艺方法合理，且设备简单、处理方式简便，可为农吉利中总黄酮提取工艺的改进提供依据。
【 参考 文献 】
[1] hun sung yoo，ji suk lee，chui young kim，et al.flavonoids of crotalaria sessiliflora [j].arch pharm res，2004，27(5)：544-546.
[2] abdul mun’im，osamu negishi，tetsuo ozawa.antioxidative compounds from crotalaria sessiflora[j]. biosci biotechnol biochem,2003，67(2)：410-414.
[3] 靖永谦，李宏善，陈瑞华.农吉利中氨基酸成分的研究[j].中药通报，1987，12(7)：41-43.
[4] 范华均，肖小华，刘玉竹，等.微波辐射溶剂回流法提取石蒜中石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏[j].中山大学学报: 自然 科学 版，2006，45(3)：46-49.
[5] 李学坚，黄海滨.微波浸提技术提取丁香油的研究[j].广西中医药，2000，25(3):49-50.
[6] 张煜帆，樊轻亚，黄晓文，等.微波辐射—溶剂回流提取农吉利中农吉利甲素[j].
