作者：赵兰芬，符滇海，冯进仪
【摘要】 目的 改进不同剂型清开灵中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为agilent tcc18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm )；流动相为水甲醇冰醋酸（体积比55∶45∶1）；检测波长为274 nm；流速为1 ml·min-1。结果 黄芩苷的质量浓度在0.01057～0.2114 mg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好，r=0．999 9；精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。结论 本法可行、准确，可为不同剂型清开灵药品的标准修订提供依据。
【关键词】 清开灵；黄芩苷；高效液相色谱法；含量测定
abstract:objective to improve the determination method for the content of the baicalin in different preparations of qingkailing．methods baicalin was analyzed on an agilent tcc18 colum (150 mm×4.6 mm，5 μm)．the mobile phase consisted of watermethanolacetic acid (55∶45∶1)． the flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was at 274 nm．results baicalin had a good linearity in the range of 0.01057-0.2114 mg·ml-1 (r=0．999 9) with satisfied precision, repeatability, stability and recovery．conclusion this method was practicable and accurate, and it provided the basis for revision of the standards．
key words:baicalin;hplc;content determination
清开灵组方源于中医 治疗 急性热病传统处方“温病三宝”中的安宫牛黄丸，由胆酸、猪去氧胆酸、黄芩苷、珍珠母、栀子、水牛角、板蓝根、金银花组成，迄今为止已形成系列产品［1］。Www.11665.COm其具有清热解毒、镇静安神的作用，用于外感风热时毒，火毒内盛所致高热不退，烦躁不安，咽喉肿痛，舌质红绛、苔黄、脉数者；上呼吸道感染，病毒性感冒，急性扁桃体炎，急性咽炎，急性气管炎，高热等症属上述证候者［2］。黄芩苷是清开灵中含量最高的主要有效成份，故对其进行定量分析，是控制该制剂质量的关键［3］。本实验 参考 清开灵注射液、口服液中黄芩苷含量测定项下的样品处理方法［4］，改进清开灵颗粒、清开灵片和清开灵胶囊的样品处理方法，为清开灵系列药品中黄芩苷含量测定方法的统一和简化提供可靠的依据。
1 仪器与试药
岛津lc2010a/c型高效液相色谱仪lcsolution色谱工作站,mettler toledo十万分之一 电子 天平，tu1901双光束紫外可见分光光度计；甲醇为色谱纯，实验用水为超纯水，冰醋酸、乙醇为分析纯；黄芩苷对照品（ 中国 药品生物制品检定所，批号110715200815，含量：95.2%,供含量测定用）；清开灵颗粒、清开灵片和清开灵胶囊均为市售。
2 方法与结果
2．1 色谱条件［2，5，6］色谱柱
agilent tcc18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：水甲醇冰醋酸（体积比55∶45∶1）；检测波长：274 nm；流速：1 ml·min-1；进样量：10 μl。理论板数按黄芩苷峰 计算 应不低于2 500。
广东药学院学报 第25卷 第5期 赵兰芬，等.不同剂型清开灵中黄芩苷含量测定方法的改进2．2 溶液的制备
2．2．1 对照品贮备液的制备
精密称取黄芩苷对照品适量，用体积分数70%乙醇制成每1 ml含0.5 mg的对照品贮备液。
2．2．2 供试品溶液的制备
（1）国家标准方法：取装量差异项下的清开灵颗粒粗粉，研细，精密称取细粉适量（约相当于黄芩苷10 mg），置100 ml量瓶中，加体积分数50%甲醇使溶解，稀释至刻度，摇匀，滤过［2］；取装量差异项下的清开灵胶囊内容物，研匀，精密称取约0.25 g (约相当于黄芩苷10 mg)，置100 ml量瓶中，加甲醇50 ml，超声处理10 min，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过［5］；取清开灵片20片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.2 g（含黄芩苷不少于7.2 mg），精密称定，置100 ml量瓶中，加体积分数50%甲醇适量，超声处理15 min，放冷，加体积分数50%甲醇至刻度，摇匀，滤过〔6〕。（2）改进后方法：取装量差异项下的不同剂型的清开灵药品细粉，精密称取适量（约相当于黄芩苷10 mg），置100 ml量瓶中，加体积分数70%乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液做为供试品溶液。
取上述溶液，按“2．1”项下的色谱条件进行测定，结果见图1-3，可见用本文改进方法制备供试品溶液，其图谱特征与国家标准方法处理的供试品溶液基本一致。
2．2．3 阴性样品溶液的制备
按处方比例取黄芩苷外的其他药材，按“2．2．2”项下的方法（2）制备阴性对照溶液。
2．3 专属性试验
分别取黄芩苷对照品溶液（0.105 7 mg·ml-1）、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果阴性样品溶液无干扰，理论板数为4 717.85，见图4。
2．4 线性关系考察
分别精密量取黄芩苷对照品贮备液1、3、5、10、15、20 ml，加体积分数70%乙醇稀释成黄芩苷浓度为0.01057、0.03171、0.05285、0.1057、0.1586、0.2114 mg·ml-1的溶液，按“2．1”项下的色谱条件进行测定。以质量浓度（ρ，mg·ml-1）为横坐标，各自峰面积(a)为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为a=3.602×10 7ρ-6.953×103，r =0.999 9（n=6）。黄芩苷的质量浓度在0.01057～0.2114 mg·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2．5 精密度试验
取质量浓度为0.1057 mg·ml-1的黄芩苷对照品溶液，按“2．1”项下的色谱条件进行测定，重复进样5次，测得其峰面积的rsd值为0.11%，表明仪器精密度良好。
2．6 稳定性试验
取清开灵颗粒（批号080114008）按“2．2．2”项下的方法（2）制备供试品溶液，分别在制备后0、2、4、6、8、10 h进样，测定峰面积，分别取清开灵胶囊（批号071202095）与清开灵片（批号080306009）同法制备和测定， 计算 黄芩苷峰面积的rsd值分别为0.18%、0.42%、0.39%，表明3种剂型的供试品溶液在10 h内测定结果稳定。
2．7 重复性试验
取清开灵系列样品，分别按“2．2．2”项下的方法（2）平行制备6份供试品溶液，按“2．1”项下的色谱条件进行测定并计算，结果见表1，表明本方法重复性良好。表1 重复性试验结果（略）
2．8 回收率试验
（1）清开灵颗粒：取已知含量的供试品约0.15 g 6份，精密称定，置20 ml容量瓶中，分别精密加入0.1022 mg·ml-1的对照品溶液10 ml；（2）清开灵胶囊：取已知含量的供试品约0.025 g 6份，精密称定，置20 ml容量瓶中，分别精密加入0.1116 mg·ml-1的对照品溶液10 ml；（3）清开灵片：取已知含量的供试品约0.011 g 6份，精密称定，置20 ml容量瓶中，分别精密加入0.1116 mg·ml-1的对照品溶液10 ml；再分别加体积分数70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液按“2.1”项下的色谱条件进行测定并计算，结果见表2。表2 加样回收率试验结果（略）
2．9 样品测定
取清开灵系列样品，按“2．2．2”项下的方法（2）制备供试品溶液，按“2．1”项下的色谱条件进行测定，以外标法计算黄芩苷的含量。结果表明2种不同溶解方法制备所得样品的含量测定结果基本一致。见表3。
表3 清开灵系列样品含量测定结果（略）
3 讨 论
国家标准收载的黄芩苷含量测定方法，需要使用对呼吸道粘膜和视力有所损伤的甲醇，不利于实验室管理和环境保护。改进后的方法用体积分数70%乙醇代替50%甲醇制备对照品和供试品溶液，减少了中等毒性试剂甲醇的使用。同时，本法为清开灵系列药品黄芩苷含量测定方法的统一和简化提供了可靠的依据。
【 参考 文献 】
［1］ 张妙媛，姚金成，赵绪元，等.清开灵不同制剂的高效液相指纹特征比较［j］.时珍国医国药，2007，18（2）：442-443.
［2］ 国家药典委员会. ws3—163（x—153）—99（z）国家药品标准新药转正标准第十六至二十六册［s］.北京：人民卫生出版社,2006：719-721.
［3］ 张捷莉，兴东杰，彭博，等.反相高效液相色谱法测定清开灵中黄芩苷的含量［j］.时珍国医国药，2005，16（5）：380-381.
［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［m］ .北京：化学 工业 出版社，2005：610-612.
［5］ 国家药典委员会. ws3—164（x—154）—99（z） 国家药品标准新药转正标准第十六至二十六册［s］.北京：人民卫生出版社,2006：722-724.
［6］ 国家药典委员会. ws3—287（z—087）—2001（z） 国家药品标准新药转正标准第三十一册［s］.北京：人民卫生出版社,2006：50-51.
