作者：李超，潘建明，张相年，邓伟杰，石磊
【摘要】 目的 观察复方枸杞子口服液经灌胃对大鼠的生殖毒性和胚胎致畸作用。方法 spf级wistar大鼠随机分成空白对照组、复方枸杞子口服液高、中、低剂量组、阿司匹林组(阳性对照组)。灌胃量按10.0 ml/kg bw计算，空白对照组灌胃给予同体积的注射用水。孕鼠于7～16 d每天灌胃给药，妊娠20 d处死，分析其胚胎发育指标与胎仔发育指标，检查有无外观畸形和骨肋畸形。结果 复方枸杞子口服液对孕鼠生殖能力无影响;对胎鼠体质量、身长、胎盘重量均无影响;胸骨发育、脊椎、肋骨发育均正常;各组胎鼠内脏观察未见异常。结论 复方枸杞子口服液无明显的致畸作用，在本实验设计剂量下是安全的。
【关键词】 复方枸杞子口服液;孕鼠;致畸性
)abstract:objective to observe reproductive toxicity and teratogenicity of compound medlar oral solution in rats by intragastric administration.method spf wistar rats were randomly divided into 5 groups: normal control group,high,moderate and low doses of compound medlar oral solution group,and aspirin group (positive control group). the model groups were given a intragastric administration of compound medlar oral solution (10.0 ml/kg bw),those in the control group were treated with bidistilled water for injection at the same volume one time per day respectively from 7 th to 16 th day after pregnancy.the pregnant rats were dissected at the 20 th day after pregnancy.embryo and fetal developments were evaluated,external and skeletal abnormalities were observed.result there was no significant effect on the reproductive capacity of pregnant rats. body weight,body height and placental weight were not affected either. breastbone,vertebra,rib developed well.there was no abnormality in internal organs.conclusion according to the designed safe dosage,compound medlar oral solution had no teratogenic effect in rats.
key words:compound medlar oral solution; pregnant rats; teratogenicity
复方枸杞子口服液是由枸杞子、大枣、山药等中药为原料的一种保健品，适用于孕妇、哺乳期妇女。WWW.11665.cOm枸杞子中枸杞多糖具有保护生殖系统、保肝、抗辐射和促进发育等作用[1]。大枣中富含大枣多糖，可有效提高机体免疫力，具有很好的免疫增强作用[2]。本研究按照国家《保健食品检验与评价技术规范》的相关要求，考察其是否具有致畸性，为孕妇、哺乳期妇女用药安全提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 选用由中国药品生物制品检定所实验动物中心繁育(90～100 d)的健康性成熟wistar大鼠，spf级，雌鼠体质量180～230 g，雄鼠体质量250～300 g。许可证号：scxk(京)20020003。
1.1.2 试验药物
1.1.2.1 受试物 复方枸杞子口服液为深棕色液体，每瓶10 ml。人体推荐量为40 ml/60 kg，常温保存,批号：060912。
1.1.2.2 致畸物 阿司匹林肠溶片，每片含阿司匹林50 mg,由广州军区广州总医院药剂科制剂中心生产，批准文号：广制字(2006)b01069号,批号：070814。
1.2 实验方法
成年雌雄未生育spf级wistar大鼠，雌鼠∶雄鼠为1∶1 每晚合笼交配，每天清晨雌鼠阴道涂片，查出精子，认为该鼠已交配，当日作为“受孕”0 d。检出的“孕鼠”随机分为空白对照组、3个剂量组和阳性对照组。在受孕的7～16 d每天灌胃给予受试物。3个剂量组分别为10、5、2.5 ml复方枸杞子原液/kg(相当于人体推荐量的15、7.5、3.8倍);阳性对照组阿司匹林的剂量为280 mg/kg。灌胃量按10.0 ml/kg计算，空白对照组灌胃给予同体积的注射用水。妊娠20 d处死孕鼠剖检[2]。
1.3 观察指标
试验动物单笼喂养，在受孕的第0、7、12、16、20天称体质量，于妊娠第20天断头处死孕鼠,剖腹取出子宫、卵巢并称重，记录着床数、活胎数、死胎数和吸收胎数，逐个检查胎鼠有无外观异常，称胎鼠体质量、胎盘重量，量体长。将一半胎鼠放于bouin氏液中固定2周后取出，用自来水冲去固定液，进行毒理学胎鼠内脏检查，另一半放于95%(φ)乙醇中固定48～72 h后用茜素红液染色，并经透明液脱色透明后于体视显微镜下检查骨骼发育情况[3]。
1.4 统计学处理
所有数据处理采用spss13.0软件进行统计分析。计量资料比较采用单因素方差分析，多重比较采用lsd和dunnettt检验;计数资料比较采用χ2检验;p<0.05为差异有显著性[4]。
2 结 果
2.1 对孕鼠体质量的影响
各组孕鼠妊娠期增重差异无显著性，见表1。
2.2 对孕鼠生殖能力影响
与空白对照组比较,各组孕鼠的子宫重量、卵巢重量、黄体数、着床数差异均无显著性，见表2。
2.3 胚胎着床情况
与空白组比较,复方枸杞子口服液中剂量组的活胎率高(p<0.05),死胎率低(p<0.05)。空白组与阳性对照组比较活胎率、死胎率差异均有显著性(p<0.01),见表4。表2 对孕鼠生殖能力影响表3 孕鼠胚胎着床情况比较
2.4 对胎鼠仔生长发育的影响
与空白对照组比较，复方枸杞子口服液各剂量组发育正常，低剂量组的胎鼠体质量较重、身长较长(p<0.01)。阳性组胎鼠体质量较轻(p<0.05)，身长较短(p<0.01)，外观皮肤潮红，易皮下出血(p<0.05),见表4。表4 胎仔生长发育影响比较
2.5 对胎仔骨骼发育的影响
与空白对照组比较，复方枸杞子口服液各剂量组胎鼠骨骼发育正常。高剂量组无胸骨异常胎鼠(p<0.05)，未出现骨骼异常胎鼠(p<0.01)。阳性组能引起胎鼠骨异常(p<0.01)，如胸骨骨化不完全(p<0.01)，肋骨出现多肋、融合肋、波状肋等异常(p<0.01)，脊椎骨出现锥体数目缺失等异常(p<0.05) 见表5。表5 胎鼠骨骼发育的影响比较
3 讨 论
目前市场上保健药品的种类繁多，其安全性得到越来越多社会的关注，孕妇与哺乳期妇女的用药安全更是备受关注。本实验采用大鼠标准致畸实验，检测复方枸杞子口服液对孕鼠毒性、胚胎毒性、胎鼠毒性。在wister大鼠妊娠胚胎器官形成期连续灌胃给药实验设计的高、中、低3个剂量10 d，期间动物未出现拒食现象，活动生长正常，被毛浓密有光泽，各剂量组孕鼠体质量、子宫重量、卵巢重量、黄体数、着床数与空白对照组比较差异均无显著性。胎鼠发育良好，内脏观察指标均未见异常。说明复方枸杞子口服液在本实验规定剂量下未引起母体毒性、胚胎及胎鼠毒性，无明显的致畸作用，为生育期妇女服用该药的安全性提供了实验依据。
实验结果显示，低剂量组胎鼠表现为体质量较重、身长较长(p<0.01);中剂量组表现为活胎率高(p<0.05)，死胎率低(p<0.05);3个剂量组的胎鼠骨骼发育都较空白对照组好，尤其是高剂量组胎鼠骨骼发育完全，无胸骨异常胎鼠(p<0.05)，也无肋骨异常胎鼠(p<0.01)。表明复方枸杞子口服液对胎鼠发育有一定保健作用，尤其对骨骼发育的影响较大，为今后复方枸杞子口服液的药效学研究奠定了基础。本实验不足之处在于由于胎鼠出生率低，实验结果有待于进一步的实验证实。
【参考文献】
[1] 汪建龙. 枸杞多糖药理作用的研究进展[j]. 时珍国医国药,2005,16(10):1032-1033.
[2] 张 庆.大枣多糖体外抗补体活性剂促进小鼠脾细胞的增殖作用[j].中药药理与临床,1998，14(5)：19-22.
[3] 保健食品检验与评价技术规范[s].国家食品药品监督管理局,2003.
[4] 陈平雁. spss13.0统计学软件应用教程[m].北京:人民卫生出版社,2005：255-269.
