作者：汪晓凌,梁超峰,谢志宏,周焘,黄霁
【摘要】 目的 研究自制与市售克拉霉素缓释片在不同释放介质中的释放度，分析其在体外的释放行为。方法 参考中国药典和美国药典两种释放度的方法，用hplc测定自制与市售克拉霉素缓释片释放度，并对其释放模型和f2相似因子进行比较。结果 以biaxinxl为参比制剂，自制缓释片在两种释放条件下， f2值均大于50；以klacid mr为参比制剂，自制缓释片在两种释放条件下， f2值均小于50。结论 自制缓释片与市售的biaxinxl的体外释放行为相似。
【关键词】 克拉霉素 缓释片 释放度 相似因子
abstract:objective to study the dissolution of clarithromycin sustained release tablets in different media and analyze their dissolution behavior in vitro. methods comparison of chp2005 and usp31 two different dissolution methods, the dissolution of selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets were determined by hplc, their kinetics model and similarity factor (f2 value) were compared. results biaxinxl was used as reference preparation， f2 value of selfprepared sustained release tablets was more than 50 in two different dissolution conditions. when klacid mr was used as reference preparation， f2 value was less than 50 in two different dissolution conditions. conclusion the dissolution behavior of biaxinxl of selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets was consistent in vitro.
key words:clarithromycin；sustained release tablets；dissolution
克拉霉素（clarithromycin，clm) 是大环内酯类抗生素，为红霉素的更新换代产品，用于治疗敏感菌引起的鼻咽感染、下呼吸道感染、皮肤感染和泌尿道感染［1］。wwW.11665.coM药物释放度是评价药物制剂质量的内在指标，是制剂质量控制的重要手段，在缓、控、迟释制剂的前期开发及质量标准制定中有着重要的意义［2］。本文对自制的与两个市售的克拉霉素缓释片用两种释放介质进行体外释放度试验研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
dinoex p680a高效液相色谱仪,d800ls智能溶出仪（天津大学无线电厂）,磁极802离心沉淀器（上海手术器械厂）。
1.2 试药
克拉霉素对照品（中国药品生物制品检定所，含量97.5％，批号130558200501）；自制克拉霉素缓释片（批号：080810，500 mg/片）；克拉霉素缓释片 “klacid mr”（克拉仙，abbott laboratories united kingdom公司，500 mg/片，批号33472va）和“biaxinxl”（biaxinxl filmtab，abbott laboratories n. chicago usa公司，规格5 00mg/片，批号0323972/r338826aa21）；乙腈为色谱纯；其他试剂均为市售分析纯。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 色谱条件与系统适用性试验 参照中国药典2005年版二部附录vd测定［3］
以diamonsil c18(5 μm, 250 mm×4.6 mm)为色谱柱；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾9.11 g，加水溶解并稀释至1 000 ml，加三乙胺2 ml，用磷酸调节ph值至5.5）乙腈（体积比600∶400）为流动相；检测波长为210 nm；流速为1.0 ml/min；柱温45 ℃。理论板数按克拉霉素峰计算不低于3 000；拖尾因子不得过2.0；克拉霉素峰与相邻各杂质峰的分离度应符合要求。
2.1.2 标准曲线制备 取克拉霉素对照品适量，用流动相制成每1 ml含1.969 mg的溶液作为贮备液，分别精密取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 ml置10 ml量瓶，用流动相稀释至刻度，分别取20 μl进样测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标作线性回归，得标准曲线方程为： y=17.143x-0.0674， r=1.000，线性范围为0.098～0.689 mg/ml。
2.1.3 测定方法 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于克拉霉素35 mg），置100 ml量瓶中，加流动相适量，超声20 min，放置至室温，以流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液，量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取克拉霉素对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 ml含 0.35 mg的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法计算，即得。
2.1.4 回收率及重复性试验 分别取自制克拉霉素缓释片的空白辅料适量，加入精密称定的克拉霉素对照品，按“2.1.3”项方法制成供试液，测定回收率,并进行重复性试验。结果平均回收率为99.3％（n＝9），rsd为0.86%；重复性试验结果rsd为0.45%（n＝6）。
2.1.5 含量测定结果 自制克拉霉素缓释片含量为99.1％；克拉霉素缓释片“klacid mr”含量为97.8％；克拉霉素缓释片“biaxinxl”含量为98.3％。
2.2 释放度测定
2.2.1 释放度方法一 参照《中国药典》2005年版（二部）“克拉霉素片溶出度检查”项及附录xd第一法［3］
取本品，以ph5.0醋酸盐缓冲液(取0.1 mol/l醋酸钠溶液，用冰醋酸调节ph值至5.0)900 ml为溶出介质（以下称为介质1)，转速100 r/min，温度为（37.0±0.5） ℃，依法操作。分别于1、2、4、6、8、10、12 h取溶液适量，过滤，滤液作为供试液，照“2.1.1”项下的色谱条件，取10 μl进样，记录色谱图；另取克拉霉素约28 mg置50 ml量瓶，加甲醇5 ml使溶解，加介质稀释至刻度，制成每1 ml约含0.56 mg 的溶液，同法测定。
2.2.2 释放度方法二 参照《美国药典》usp31nf26test2“克拉霉素缓释片释放度”项规定［5］
以含0.5％的十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液（ph 6.8）900 ml为溶出介质（以下称为介质2），转速为100 r/min，温度为（37.0±0.5） ℃，分别于1、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h取5 ml溶液（同时补充等温度等体积的新鲜介质），滤过，取续滤液在2 500 r/min条件下离心10 min，取上清液作为供试品溶液；照“2.1.1”项下的色谱条件，取10 μl进样，记录色谱图；另取克拉霉素约28 mg置50 ml量瓶，加甲醇5 ml使溶解，加介质稀释至刻度，制成每1 ml约含0.56 mg 的溶液，同法测定。
2.2.3 克拉霉素在两种释放介质中的标准曲线 取克拉霉素对照品适量，甲醇制成每1 ml含1.933 mg的溶液作为贮备液，分别精密取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 ml置10 ml量瓶，分别加两种释放介质稀释至刻度，按释放度项下测定法测定峰面积，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标作线性回归，得标准曲线方程
介质1：y=7.9596x+0.0073, r=0.999 9；
介质2：y=8.0637x-0.0019, r=0.999 8。
2.3 克拉霉素缓释片释放度曲线
自制和市售进口克拉霉素缓释片在两种释放介质中的释放度测定结果见图1和图2。
图1 自制和进口克拉霉素缓释片累积释放曲线（介质1）（略）
figure 1 accumulative release curve of selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets (in buffer 1)
图2 自制和进口克拉霉素缓释片累积释放曲线（介质2）（略）
figure 2 accumulative release curve of selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets (in buffer 2)
2.4 释放模型的拟合
目前解释缓释制剂的释药动力学方程是在一些边界条件和假设的基础上得到fick’s扩散定律的近似解释，有下列几种常用模型：（1)一级释放模型：ln［100-q(t)］=a1+k1t；（2)higuchi方程：q(t)=a2+k2t1/2；（3)peppas方程：lnq=k3lnt-a3。
将自制缓释片与两种市售的克拉霉素缓释片分别于介质1和介质2中的释放度数据用上述的几个方程拟合，所得结果见表1、表2。
由表1可见：在介质1中，自制缓释片和biaxinxl的释放用higuchi函数拟合结果均较优，表明它们的体外释放行为都是扩散和溶蚀协同作用；klacid mr则以peppas函数和一级动力学方程拟合结果最优，表明其释放机制为骨架溶蚀。
表1 自制和进口克拉霉素缓释片在介质1中的释放模型拟合（略）
table 1 kinetics model from fitting results for dissolution of selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets in buffer 1
表2 自制和进口克拉霉素缓释片在介质2中的释放模型拟合（略）
table 2 kinetics model from fitting results for dissolution of selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets in buffer 2
由表2可见：在介质2中，自制缓释片和biaxinxl的释放用higuchi和peppas函数的拟合结果均较佳，表明释放行为为骨架溶蚀；klacid mr以peppas函数拟合结果最优，其释放行为也是骨架溶蚀；因此，在该释放介质中，３种片剂的释放行为都较相似。
2.5 释放度评价方法
国外学者在比较多种制剂的释放度曲线时，常采用体外释药行为有无显著性差异的相似因子法（f2）［5］,该方法优点在于可以直接对释药数据进行统计分析，无需拟合各种释药速率，现已被美国等多个国家推荐应用。相似因子法是非模型中最有代表性的方法，其基本方程如下：
f2=50×log{［1+(1/n)∑t=1n(rt-tt)2］-0.5×100}
当f2值在50～100之间时，认为两制剂的体外释药行为差异无显著性； f2值愈接近100，相似程度就愈高。本实验分别以biaxinxl和klacid mr缓释片作为参比制剂，自制缓释片分别在两种介质下与他们进行比较，结果见表3。
表3 克拉霉素自制缓释片与两种进口缓释片在不同介质下进行f2相似因子比较的结果（略）
table 3 comparison of f2 between selfprepared and imported clarithromycin sustained release tablets separately in different buffer
由表3可见：以biaxinxl为参比制剂，自制缓释片在两种释放介质中， f2值均大于50；以klacid mr为参比制剂，自制缓释片在两种释放介质中， f2值均小于50。
3 结论
由释放模型和f2相似因子法的比较结果可以得出：在两种不同的释放介质下，自制缓释片与市售的biaxin xl有较高的相似度，证明其在体外的释药行为与biaxin xl较接近；而与klacid mr的释放行为存在一定的差异。
4 讨论
4.1 释放介质的选择
克拉霉素为弱碱性药物，溶解性具有ph依赖性。由于在不同ph条件下，药物的溶解度、控制药物释放行为的关键辅料的水化、溶胀、溶蚀速度可能不同，应该对不同ph值（模拟胃肠道的生理环境）条件下的释放行为进行考察，通常选择类似胃肠液的介质（如ph1.2的盐酸溶液及ph4.5、ph6.8的缓冲液）。参考中国药典2005年版关于克拉霉素片的溶出度试验和美国药典usp31nf26test2中关于其缓释片的释放度试验，本实验最后选定ph5.0醋酸盐缓冲液和含0.5%十二烷基硫酸钠的ph6.8磷酸盐缓冲液作为释放介质。
由于克拉霉素在ph值低时易降解，在37 ℃条件下，ph 1.0时降解半衰期少于10 min［6］，而缓释片的释放度试验往往需要较长的时间进行，所以为了避免药物的降解产生误差，本试验没有选择在ph 1.2的盐酸溶液中进行释放度的考察。
4.2 药物释放模型的拟合及其释放行为的相关性
通过考察不同ph条件下药物的体外释放行为，再根据释放模型拟合和f2相似因子的计算，对自制品与市售品进行比较，从而可以筛选出在体外释放行为与市售品较接近的自制品。利用药物释放模型的拟合及其释放行为的相关性，可进一步进行体内生物利用度试验，从而得到体内外相关性好的释放—吸收曲线，从而有望提高生物等效性。
【参考文献】
［1］ 黄平，丁慧萍，李智，等.高效液相色谱——电喷雾质谱法测定人血浆克拉霉素浓度［j］.医药导报，2007，26（7）：728-730.
［2］ 吕长淮.药物释放度研究概述［j］.安徽医药，2007，11（1）：76-78.
［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部［m］.北京：化学工业出版社，2005.
［4］ 美国药典usp31
［5］ jeffrey w, henry h. mathematical comparison of dissolution profiles［j］.pharmaceut technol，1996,5:64-74.
［6］ 徐冬羽，屠锡德，蒋曙光.克拉霉素日服一次缓释片的研制［j］.中国药科大学学报,2003，34（2）：132-136.
