【摘要】 目的 以黄连解毒汤为例说明不同煎煮条件对中药汤剂有效成分的影响。方法 首先建立黄连解毒汤中多种有效成分的分析方法,对不同煎煮条件下(时间、煎煮次数)中药汤剂中有效成分进行动态分析。结果 水溶性苷类成分(黄芩苷、栀子苷)煎煮20 min溶出基本达到平衡,溶出率分别达到82%和60%左右;水溶性生物碱类(小檗碱、巴马汀碱)煎煮30 min溶出基本达到平衡,溶出率为45%左右;脂溶性汉黄芩素的溶出较慢,煎煮60 min其溶出率仅为31%;西红花苷-ⅰ煎煮20 min含量达到最大,继续煎煮则含量降低。煎煮次数对水溶性成分溶出影响不大,而对脂溶性成分的溶出影响较大。结论 煎煮条件对黄连解毒汤中各有效成分的溶出率及稳定性具有不同程度的影响。
【关键词】 煎煮时间;黄连解毒汤;化学分析
study of effective ingredient in huanglianjiedu decoction under different decocting conditions wu hong-wei, tang li-ying, fu mei-hong, et al (institute of chinese material medica, china academy of chinese medical sciences, beijing 100700, china)
abstract：objective to analysis the effective ingredients in huanglianjiedu decoction under different decocting conditions. methods the detecting method of hplc was established and the ingredients in huanglianjiedu decoction under different decocting time and times were analyzed. result water- soluble glycoside of gardenoside and baicalin reached balance of dissolution within 20 min and their dissolution rate were about 82% and 60% respectively. water-soluble alkaloids of berberine and palmatine reached balance of dissolution within 30 min and their dissolution rate were about 45%. the dissolution rate of wogonin was 31% at 60 min. the dissolution rate of crocin-ⅰ reached top at 20 min and fell down after 20 min. decocting times for fat-soluble constitutes was more important than water-soluble constitutes. conclusion the decocting condition has effect on the dissolution rate and stability of the ingredients in huanglianjiedu decoction. the decocting condition is very important to the quality control of decoction.
key words：decocting time;huanglianjiedu decoction;chemical analysis
中医最常用的是汤剂,中药饮片在煎煮的过程中其有效成分的结构、含量及其比例随着煎煮条件的变化均有可能发生改变,因此,煎煮条件的控制将会影响到汤剂的临床疗效、复方质量标准的制定、以及饮片的用法及用量[1]。wWw.11665.cOm
黄连解毒汤是临床常用方剂,由黄连、黄柏、黄芩、栀子4种常用中药按9、6、6、9 g组成。黄连解毒汤的有效成分主要为生物碱类(黄连、黄柏)、黄酮类(黄芩)、环烯醚萜、西红花苷类(栀子)。笔者首先建立黄连解毒汤中盐酸小檗碱、巴马汀碱、黄芩苷、汉黄芩素、栀子苷、西红花苷-ⅰ的含量测定方法,在此基础上对煎煮时间、煎煮次数进行考察,动态检测汤剂中各有效成分的含量,并与药材中各有效成分的含量进行比较,计算溶出率,揭示煎煮条件与有效成分溶出率之间的关系,以及中药饮片在煎煮过程中有效成分的动态变化情况。现报道如下。
1 材料
1.1 药材
黄连、黄柏、黄芩、栀子均购于北京同仁堂药店。产地及有效成分含量见表1。药材有效成分含量测定方法参照2005年版《中华人民共和国药典》及相关文献[2-5]。对照品：盐酸小檗碱、巴马汀碱、黄芩苷、汉黄芩素、栀子苷、西红花苷-ⅰ,购于中国药品生物制品检定所。表1 4种药材产地及有效成分含量(%)
1.2 仪器
waters2695型高效液相色谱仪,控温电热套,冷凝管。
2 方法与结果
2.1 黄连解毒汤中各有效成分检测方法的建立
2.1.1 样品及对照品溶液的制备 按照黄连解毒汤处方量,即黄连9 g、黄芩6 g、黄柏6 g、栀子9 g,根据临床煎药加水量加入300 ml水,回流煎煮30 min,放凉,过滤后定容至300 ml,取1 ml加甲醇稀释至25 ml,过0.45 μm滤膜,备用。分别精密称定盐酸小檗碱(1.27 mg)、巴马汀碱(1.38 mg),用甲醇分别溶于25 ml量瓶中,黄芩苷(1.34 mg)、汉黄芩素(1.72 mg)用甲醇分别溶于10 ml量瓶中;栀子苷(1.70 mg)、西红花苷-ⅰ(1.74 mg)用甲醇分别定溶于50 ml量瓶中。得到盐酸小檗碱、巴马汀碱、黄芩苷、汉黄芩素、栀子苷、西红花苷-ⅰ对照品的浓度分别为0.050 9、0.055 2、0.134、0.172、0.034、0.034 8 mg/ml。
2.1.2 黄连解毒汤中有效成分含量测定方法的建立 由于各类有效成分结构不同,检测波长不同,响应值不同,很难用一种方法同时测定,故分别建立汤剂中各有效成分测定方法。
色谱柱均采用diamonsil c18(5 μm,4.6 mm×250 mm),检测温度均为30 ℃。其余色谱参数如下：小檗碱和巴马汀碱色谱条件：乙腈-0.1%的磷酸溶液(50∶50),每100 ml加十二烷基黄酸钠0.1 g,检测波长265 nm,流速1 ml/min;黄芩苷色谱条件：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),检测波长280 nm,流速1 ml/min;汉黄芩素色谱条件：甲醇-乙腈-水-冰醋酸(30∶20∶50∶0.2),检测波长275 nm,流速1 ml/min;栀子苷色谱条件：乙腈-水(15∶85),检测波长238 nm,流速1 ml/min;西红花苷-ⅰ色谱条件：甲醇-水(45∶55),检测波长440 nm,流速1 ml/min。
2.1.3 标准曲线的建立 取“2.1.1”项下各标准品溶液,注入高效液相色谱仪,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,建立回归方程。见表2。表2 各成分线性范围考察
2.1.4 稳定性及重复性考察 按“2.1.1”项下方法,平行制备5份样品,放凉后分别测定,每份样品中各成分测定的rsd均小于5%;取其中1份样品,放凉后考察2、4、6、8、12 h各成分的含量,其rsd均小于3%。
2.1.5 准确度考察 采用加样回收法。按“2.1.1”项下的方法煎煮,平行制备5分样品,放凉后,按1∶1加入各成分的对照品,测定后计算回收率。经测定各成分回收率均在90%～110%之间,rsd<5%。
2.2 不同煎煮条件下黄连解毒汤中各有效成分的测定结果
2.2.1 煎煮时间的考察 按“2.1.1”项下方法平行煎煮5份,煎煮时间依次为10、20、30、40、50、60 min,水沸腾后开始计时,煎煮完毕后放凉、过滤,定容至300 ml,取1 ml加甲醇稀释至25 ml,过0.45 μm滤膜,测定。计算每份煎煮液中各有效成分的绝对量及相对饮片的溶出率,结果见表3。表3 黄连解毒汤中各有效成分不同煎煮时间溶出量及溶出率比较[mg(%)]注：溶出率(%)=(溶液中有效成分的量÷相应药材中该有效成分的量)×100%
由以上结果可以看出,黄连解毒汤中水溶性苷类成分(黄芩苷、栀子苷)溶出率分别达到82%左右和60%左右,煎煮20 min溶出基本达到平衡;水溶性生物碱类(小檗碱、巴马汀碱)溶出率为45%左右,煎煮30 min溶出基本达到平衡;脂溶性汉黄芩素溶出较慢,随着煎煮时间含量不断增加,煎煮60 min溶出率仅为31%;西红花苷-ⅰ煎煮20 min含量达到最大,但继续煎煮含量不断降低,可能与西红花苷类成分具有长链不饱和结构特点有关,长时间煎煮会导致其断链分解。
2.2.2 煎煮次数的考察 按“2.1.1”项下方法煎煮2次,每次30 min,放凉、过滤,合并2次煎煮液后测定。结果见表4。表4 不同煎煮次数黄连解毒汤中有效成分溶出量及溶出率比较[mg(%)]
由以上结果可以看出,煎煮次数对饮片中水溶性成分影响不大,因为煎煮1次其溶出率已经很高,如黄芩苷煎煮1次其溶出率已达82.9%,栀子苷也达到60%以上;而煎煮次数可以较高地增加脂溶性成分的溶出率,如汉黄芩素的溶出率从20.9%增加至37.7%。
3 讨论
中药汤剂一直是中医用药的主要方式,汤剂的煎煮过程主要是有效成分的溶出及其可能发生化学反应的过程。因此,应
根据饮片中有效成分的化学特点及配伍特点,在煎煮过程区别对待。
根据经验,中药煎煮时间一般为30 min,对于水溶性成分,如各种苷类(黄芩苷、栀子苷等)、水溶性生物碱类(小檗碱等),煎煮1次,大部分有效成分即可溶出;根据本实验结果煎煮20 min,煎煮1次,以上成分溶出率均在50%以上。对于含有脂溶性成分的饮片可以通过延长煎煮时间和煎煮次数来增加其溶出,如汉黄芩素煎煮2次其累计溶出率为37.7%,但是要使脂溶性成分溶出率大幅增加仅仅依靠提高煎煮时间和次数是无法实现的,可以考虑采用增加粉碎程度或高压煎煮等方法来增加溶出率。此外,某些有效成分由于本身化学结构不稳定,其溶出率先增加后降低,但是这类成分往往是有效成分,如栀子、西红花中的西红花苷类成分,丹参中的丹酚酸b,川芎中的藁本内酯等,这些化学结构不稳定的成分往往具有抗氧化、心血管方面的活性,煎煮时应对煎煮时间加以控制。总之,中药复方煎煮过程是一复杂的物理化学反应过程,决定了中药临床用药的物质基础。
【参考文献】
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