【关键词】乙型肝炎；tnf-α基因；单核苷酸多态性（snps）；单体型 摘要： 目的 探讨肿瘤坏死因子α（tnfα）基因启动子区238g/a、-857t/c、-863c/a与乙型肝炎病毒（hbv）感染结局之间的关系。方法 采用病例-对照研究方法，募集244例hbv自限性感染者、212例hbsag携带者和391例慢性乙型肝炎患者作为研究对象，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（pcr-rflp）方法，对（tnf-α）基因启动子区-238g/a、-857c/t、-863c/a基因型进行测定。结果 自限性感染者携带-238a等位基因的频率显著低于hbsag携带者（p=0.04）和慢性乙肝患者（p=0.047）；慢性乙肝患者携带tnf-α-857c等位基因的频率显著高于hbsag携带者（p=0.0008）和自限性感染者（p=0.03）；慢性乙肝者tnf-α-863a等位基因频率显著高于hbsag携带者（p=0.02）。应用多元logistic回归分析，控制年龄、性别等混杂因素后，慢性乙肝患者与hbv自限性感染者比较，tnf-α-857cc和tnf-α-238 ga与慢性乙肝显著关联（or=1.53,p=0.044;or=2.11，p=0.045）；慢性乙肝患者与hbsag携带者比较，tnf-α-857cc与慢性乙肝显著关联（or=1.92,p=0.004）；hbsag携带者与hbv自限性感染者比较，tnf-α-238ga与hbsag携带者显著关联（or=2.34,p=0.020）。wwW.11665.coM结论 tnf-α基因启动子区多态性可能是影响hbv感染结局的重要危险因素。
关键词： 乙型肝炎；tnf-α基因；单核苷酸多态性（snps）；单体型
relationship between polymorphisms of tnf-α gene promoter region and hbv infection outcome
cou chunyan,li hongquan,li zhuo,et al.
youan hospital affiliated to capital university of medical sciences(beijing 100069,china)
abstract： objective to determine whenther -238g/a,-857t/c and -863c/a polymorphisms of tumor necrosis factor-alphya (tnf-α) gene promoter were associated with outcomes of hepatitis b virus (hbv) infection.methods a total of 244 hbv self-limited infected subjects,212 asymptomatic hbsag carriers (hbsag carriers) and 391 chronic hepatitis b (hb) patients were recruited to conduct a case-control study.tnf-α-238g/a,-857c/t and -863c/a gene promoter polymorphisms were examined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (pcr-rflp).results the frequency of -238 allele a in self-limited individuals was 2.6%,significantly lower than 5.0% in chronic hb patients and 5.3% in hbsag carriers (p=0.04 and p=0.047),respectively.the frequency of tnf-α-857 allele c in chronic hb patients was 87.5%,significantly higher than 80.5% in hbsag carriers and 82.8% in self-limited individuals (p=0.0008 and p=0.03),respectively.the frequency of tnf-α-863 allele a in chronic hb group was 77.5%,significantly higher than 71.5% in hbsag carriers (p=0.02).multiple logistic regression analyses indicated an increased risk of chronic hb associated with tnf-α-238ga and -857cc after gender and age adjusting (or=1.53,p=0.044;or=2.11,p=0.045),and hbsag carriers with -857cc significantly increasing risk of chronic hb associated with tnf-α -238ga and -857cc after gender and age adjusting (or=1.53,p=0.044;or=2.11,p=0.045),an hbsag carriers with -857cc significantly increasing risk of chronic hb(or=1.92,p=0.004),and -238ga associated with and increasing risk of hbsag carriers (or=2.34,p=0.020).conclusion tnf-α promoter polymorphism is probably an important risk factor of the influence of outcome of hbv infection.
key words： hepatitis b;tumor nectosis factor-alpha(tnf-α)gene;single nucleotide polymorphisms(snps);genotype
乙型肝炎的治疗是亟待解决的全球性公共卫生问题〔1〕。感染乙型肝炎病毒(hbv)后可产生自限性感染、hbsag携带者、慢性乙肝多种不同临床结局。hbv感染结局多样性一直是研究者关注的问题，从遗传易感性角度探讨其原因是一个重要研究方向。细胞因子在抵抗病毒感染中起重要作用，它能够间接和直接抑制病毒复制〔2〕。肿瘤坏死因子α（tnf-α）的转录水平与tnf-α启动子区单核苷酸多态性有关〔3〕。本研究比较了tnf-α启动子区-238g/a、-857c/t及-863c/a基因型在自限性感染、hbsag携带状态和慢性乙肝3种不同hbv感染结局者中分布频率的差异，探讨tnf-α基因多态性与hbv感染结局关系。
1 对象与方法
11 对象 采用病例对照研究，于2002年11月～2004年3月在北京佑安医院募集慢性乙肝患者391例，hbsag携带者244例，自限性感染者212例。研究对象的诊断参照2000年中华医学会传染病分会，肝病学会联合修订病毒性肝炎防治方案的标准〔4〕。所有研究对象均自愿同意参加本次研究。受试者均为
tnf-α启动子区-238g/a〔5〕、-857c/t〔6〕和-863〔7〕。
14 统计分析 采用foxpro60软件建立数据库，sas612软件进行t检验、fisher精确概率法和χ2检验，进行组间比较，所有的p值均由双侧检验确定。采用非条件logistic回归模型进行多因素分析。
2 结果
21 一般人口学持征 慢性乙肝患者391例(其中男性311例，女性80例)，hbsag携带者244例，其中男性140例，女性104例；自限性感染者212例，其中男性110例，女性102例。慢性乙型肝炎病人、hbsag携带者、hbv自限性感染者3组人群的平均年龄分别为332，307和337岁。
22 tnf-α启动子区基因多态性与hbv感染结局的关系
221 tnf-α-238g/a位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布 慢性乙肝患者与hbsag携带者携带tnf-α-238a等位基因的频率差异无统计学意义(p=079)；自限性感染者携带a等位基因的频率显著低于hbsag携带者(χ2=435，p=004)和慢性乙肝患者(χ2=396，p=0047)。3组人群均未检测到tnf-α-238aa基因型。慢性乙肝组与hbv携带组tnf-α-238的gg、ga基因型分布差异无统计学意义(p=078)。对照人群自限性感染组gg及ga基因型分布符合hardy-weinberg平衡(p=071)，并与慢性乙肝患者(χ2=413，p=004)及hbsag携带者(χ2=455，p=003)的基因型分布差异有统计学意义。
222 tnf-α-857c/t位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布 慢性乙肝患者携带tnf-α-857c等位基因的频率为875%，高于hbsag携带者的805%(χ2=112，p=00008)和自限性感染者的828%(χ2=496，p=003)；hbsag携带组与自限性感染组比较差异无统计学意义(p=038)。慢性乙肝组中tnf-α-857cc、ct及tt基因型的频率分别为798%，153%和49%，hbsag携带组和hbv自限性感染组这3种基因型频率分别为680%，250%，70%和70.3%，250%，47%。对照人群自限性感染组的基因型分布符合hardy-weinberg平衡(p=007)。慢性乙肝组的基因型频率分布与hbsag携带组(χ2=113，p=0004)和自限性感染组比较差异有统计学意义(χ2=847，p=0015)，但后两者差异无统计学意义(p=059)。
223 tnf-α-863c/a位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布 慢性乙肝组tnf-α-863位点等位基因a频率为775%，高于hbsag携带者的715%(χ2=576，p=002)；hbv自限性感染组为741%，与慢性乙肝组和hbsag携带组比较差异无统计学意义(p=018，p=039)。慢性乙肝组cc、ca及aa基因型频率为87%、276%和637%，与hbsag携带组的152%，266%和582%比较差异有统计学意义(χ2=641，p=004)。对照人群hbv自限性感染组cc、ca及aa基因型频率为90%，340%和570%，其分布符合hardy-weinberg平衡(p=009)。hbv自限性感染组与hbsag携带组和慢性乙肝组比较差异无统计学意义(p=006；p=024)。
23 基因多态性与hbv感染结局关联的多元logistic回归分析 为控制年龄、性别等因素引起的混杂偏倚影响，采用多元非条件logistic回归分析，tnf-α-238/-857/-863与hbv感染不同结局的关联性分析。结果显示，在控制了年龄、性别混杂因素后，慢性乙肝病人和hbv自限性感染者比较，携带tnf-α-857cc基因型者感染hbv后，较携带tnf-α-857tt或ct基因型者发生慢性乙肝的风险增加(or=153；p=0044)，而携带tnf-α-238ga者则较tnf-α-238gg携带者发生慢性乙肝的风险增加(or=211；p=0045)；慢性乙肝病人和hbsag携带者比较，携带tnf-α-857cc基因型者较携带tnf-α-857tt或ct者增加成为慢性乙肝的风险(or=192；p=0004)；hbsag携带者和hbv自限性感染者比较，携带tnf-α-238ga者在感染hbv后，较gg基因型者增加发展为hbsag携带者的风险(or=234；p=0020)。
3 讨论
编码tnf-α的基因位于人类第6号染色体短臂hla-ⅲ类基因区内。它可调节hla-ⅱ类分子和黏附分子的表达。本研究以慢性乙肝病人作为病例组，hbv自限性感染组作为对照组进行分析比较时，感染hbv后携带tnf-α-238ga基因型者成为慢性乙肝的风险增加，当以hbsag携带者作为病例组，自限性感染组作为对照组进行分析比较，感染hbv后携带tnf-α-238ga基因型者成为hbsag携带者的风险也增加。本研究观察到慢性乙肝患者携带tnf-α-857c等位基因的频率，显著高于hbsag携带者hbv自限性感染者。调整年龄、性别等因素的混杂作用后，tnf-α-857cc仍然是影响hbv感染结局(慢性乙肝和hbsag携带)的危险因素。结果提示，tnf-α启动子区的等位基因与hbv感染后的结局相关，tnf-α启动子区基因多态性在清除hbv中可能发挥了重要作用。其机制可能与基因多态性影响tnf-α转录水平，从而降低血清tnf-α水平，导致炎症连锁反应降低有关〔8〕。
参考文献
〔1〕 wang fs.current status and prospects of studies on human genetic alleles associated with hepatitis b virus infection［j］.world j gastroenterol,2003,9:641-644.
〔2〕 koziel mj.cytokines in viral hepatitis［j］.semin liver dis,1999,19:157-169.
〔3〕 koulentaki m,notas g,petinaki e,et al.nitric oxide and pro-inflammatory cytokines in acute hepatitis b［j］.eur j intern med,2004,15:35-38.
〔4〕 中华医学会
传染病与寄生虫病学会分会，肝病学分会.病毒性肝炎防治方案［j］.中华传染病杂志，2000，8：324-329.
〔5〕 chu cj,hussain m,lok asf,et al.hepatitis b virus genotype b is associated with earlier hbeag seroconversion compared with hepatitis b virus genotype c［j］.gastroenterology,2002,122:1756-1762.
〔6〕 ma sl,tang nl,lam lc,et al.association between tumor necrosis factor-alpha promoter polymorphism and alzheimer's disease［j］.neurology,2004,62:307-309.
〔7〕 skoog t,hooft fm,kallin b,et al.a common functional polymorphism(ca substitution at position-863)in the promoter region of the tumor necrosis factor-alpha (tnf-alpha) gene associated with reduced circulating levels of tnf-alpha［j］.human molecular genetics,1999,8:1443-1449.
〔8〕 hohler t,kruger a,gerken g,et al.a tumor necrosis factor-alpha (tnf-α)promoter polymorphism is associated with chronic hepatitis b infection［j］.clin exp immunol,1998,111:579-582.
(文涛编辑 郑新校对)
*基金项目： 北京市科委重大项目(h020920020590)
作者单位： 首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069；
