银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠血管病变的干预作用
【关键词】 银杏叶提取物;糖尿病;晚期糖基化终末产物
【摘要】 目的 探讨银杏叶提取物(gbe)对2型糖尿病(t2dm)大鼠血管病变的影响。方法 采用体外蛋白糖基化系统，探讨不同浓度gbe抑制晚期糖基化终末产物(ages)形成的效果。应用dm大鼠模型，分析灌胃不同剂量gbe对血糖、血清甘油三酯、ages和胰岛素含量的变化。结果 空白对照组血清甘油三酯、ages、空腹血糖含量明显升高;灌胃给药6 w后，高剂量gbe(200 mg/kg)组血脂、ages含量明显低于对照组，具有剂量依赖性。结论 gbe能降低dm大鼠血糖、血脂和ages含量，减轻血管内皮细胞的损伤，从而延缓及改善血管病变。
【关键词】 银杏叶提取物;糖尿病;晚期糖基化终末产物
糖尿病(dm)血管病变，如动脉粥样硬化、高血压等是dm常见并发症。其发生机制较复杂，是多种因素如晚期糖基化终末产物(ages)、血脂异常、氧化应激等综合作用的结果〔1〕。蛋白质与葡萄糖发生非酶促糖基化(neg)，最终可形成一系列不可逆的ages。蛋白质与ages发生交联，沉积在长寿蛋白上，进而引起动脉粥样硬化等一系列病理生理改变。研究证实氨基胍(ag)可抑制蛋白质的neg，并陆续研发出多种化合物作为抑制ages和dm血管并发症的药物〔2，3〕。wWw.11665.coM银杏叶提取物(gbe)主要活性成分为黄酮苷和银杏内酯，已证实具有消除氧自由基、抗脂质过氧化等作用。本研究从ages角度研究gbe对dm血管病变的影响。
1 材料与方法
1.1 主要试剂
牛血清白蛋白(bsa)、ag和链脲佐菌素(stz)均购自sigma公司。gbe (银杏总黄酮≥40%)由沈阳药科大学提供。
1.2 方法
1.2.1 体外neg实验
将bsa(5.0 g/l)分别与不同浓度的葡萄糖(0.05，0.1，0.15和0.2 mol/l)溶于pbs(ph7.4，0.02 mol/l)中，分成4组，每组3个样品。阳性对照组加入ag(0.02 mol/l);低剂量组加入gbe(1.0 g/l);高剂量组加入gbe(2.0 g/l);另设阴性对照组。各组过滤除菌后置于37℃避光孵育,分别于4,8和12 w取样品,充分透析除去多余的葡萄糖。将上述样品稀释至1.0 g/l,采用荧光光谱测定样品荧光值(用ph7.4 pbs调零)，激发波长(ex)370 nm，狭缝3 nm，发射波长(em)440 nm，狭缝3 nm。在相同条件下，定义bsa (5.0 g/l)的荧光值为1个任意荧光单位(au),所测定的各组样品荧光强度以此折算。
1.2.2 体内neg实验
wistar大鼠30只，雌雄各半，6周龄(体重150～180 g)，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分为5组，每组6只。正常大鼠作为空白对照组。其余4组应用stz腹腔注射方法〔4，5〕，建立dm模型。筛选出空腹血糖≥7.0 mmol/l的大鼠用于实验。阳性对照组灌胃ag(0.05 g·kg-1·d-1)，低剂量组0.02 g·kg-1·d-1灌胃给药gbe;高剂量组0.1 g·kg-1·d-1给药;阴性对照组灌胃生理盐水。
1.2.3 生化指标的测定
6 w后取各组鼠尾血，用全自动生化分析仪测定血糖和血清甘油三酯，按照前述方法用荧光光谱测定血清ages荧光值，用放射免疫γ计数仪分析胰岛素水平。
1.3 统计学分析
数据以x±s表示,采用方差分析检验。
2 结 果
2.1 gbe体外对neg和ages的作用
应用体外蛋白neg系统，评价ages产生的水平。bsa发生neg后，形成的ages含量随着葡萄糖浓度的提高而增加，即ages水平与葡萄糖的浓度呈现正相关。ag可以显著抑制ages的生成。gbe显示出减少ages的作用，并呈现剂量依赖关系，即高浓度gbe表现出明显的降低ages水平的作用。见表1。表1 体外蛋白neg系统ages水平
2.2 gbe对dm大鼠血管的影响
体内实验中，观察gbe对dm大鼠血糖、血清甘油三酯、ages及胰岛素的影响。与正常对照组相比，dm大鼠血糖及ages含量显著升高，而胰岛素水平减少。灌胃给药高浓度gbe 6 w后，dm大鼠ages含量降低，对血糖及胰岛素的变化无显著影响(见表2)。可见gbe通过干预ages浓度减缓dm血管病变。表2 gbe灌胃对dm大鼠血糖、血脂及ages变化的影响
3 讨 论
neg在dm血管并发症的发生中占有重要地位。蛋白质和葡萄糖或其他醛糖的氨基基团发生neg，形成可逆的早期糖基化产物希夫碱，这种希夫碱会重排成更稳定的amadori型糖基化产物,然后经过一系列复杂的化学重排，形成不可逆的ages。高血糖状态下,氧化应激增强，进一步促进ages的形成。细胞表面的ages受体与ages结合后，细胞抗氧化能力降低，产生氧自由基，最终导致动脉粥样硬化的形成。本研究通过体内外实验发现gbe可以抑制ages的形成，且有剂量依赖性。因而，gbe对血管结构和功能都有一定的保护作用，能清除自由基，降低体内过高的ages,从而减少dm时的血管损伤，延缓血管病变。因而，在积极控制血糖、降低血脂的同时，运用gbe能有效减弱或延缓动脉粥样硬化的形成。
【参考文献】
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2 于晓艳，李 才，何 泽，等.糖基化终末产物对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶2活性和表达的影响〔j〕.中国糖尿病杂志，2006;14(6)：4557.
3 李先霞，陈双秀，叶青山，等.银杏叶提取物对糖基化终末产物损伤血管内皮功能的保护作用机制研究〔j〕.中药材，2007:30(9)：110913.
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