【摘要】 目的：考察葛根黄酮对衰老模型小鼠抗氧化能力的影响。方法：用d半乳糖制备衰老模型小鼠，分为正常对照组、模型组、阳性对照组、高、低剂量组，检测各组小鼠血清丙二醛(mda)、超氧化物歧化酶(sod)和谷胱甘肽过氧化物酶(gsh—px)水平变化。结果：葛根黄酮能显著降低衰老小鼠血清mda水平，同时可提高sod和gsh—px活力水平。结论：葛根黄酮对亚急性衰老模型小鼠具有抗氧化作用。
【关键词】 葛根黄酮;抗氧化;亚急性衰老模型
d半乳糖致小鼠亚急性衰老模型因其衰老变化明显，模型稳定，在抗衰老研究中被广泛应用。一般认为，d半乳糖引起的代谢紊乱使机体过氧化反应增强是其致老化反应的重要因素。葛根黄酮(puerarin flavonoid)系葛根中的主要成份之一，葛根始载于《神农本草经》,为豆科植物野葛和粉葛的干燥根，具有解肌退热、生津透疹、升阳止泻的功效。葛根主要有效成分为葛根黄酮和大豆苷元。葛根黄酮药理作用研究较多，临床应用非常广泛，对心脑血管疾病、视网膜疾病等具有良好疗效。体外研究表明[1-4]，葛根黄酮具有较强的抗氧化能力，能明显清除·oh、dpph·自由基，可用于防止生物膜的氧化损伤。本研究采用d半乳糖致小鼠亚急性衰老模型，以观察葛根黄酮对衰老模型小鼠抗氧化能力的影响。
1 材料与方法
1.1 葛根黄酮的提取[5] 取葛根药材粉碎成粗粉，置圆底烧瓶中，加95%乙醇回流1 h，抽滤，保留滤液，药渣加95% 乙醇回流1 h，抽滤，滤液合并，回收乙醇并浓缩成膏状，真空干燥得粗提物，将粗提物加入蒸馏水后加热煮沸，冷却到室温过滤，再将滤液中加入nac1后搅拌溶解，静置2d析出白色沉淀，过滤出沉淀并用少量水洗涤，得葛根黄酮纯品。Www.11665.cOM
1.2 试剂与仪器 阳性对照药维生素e胶丸(浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号20090206);d(+)半乳糖(上海君创生物科技有限公司);sod试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20090102);mda试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20081205);gsh—px试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20090209);tdl5000低温冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);tu1901紫外可见分光光度计(北京普析通用);电热恒温水浴锅(常州国华电器有限公司);万分之一电子天平(赛多利斯丹佛公司)。超氧化物歧化酶(sod)活性、丙二醛(mda)、gsh—px含量测定均按试剂盒说明书测定。
1.3 动物分组与处理 健康昆明小鼠75只(实验动物中心提供)，体重(18±2)g，雌雄各半，喂养普通饲料适应1w后，空腹称重，眼底静脉采血测血清mda后随机分为5组，每组15只，雌雄各半。组间体重、血清mda水平无明显差异。5组分别为正常组(腹腔注射(ip)生理盐水+灌胃(ig)蒸馏水)，衰老模型组(ip d(+)半乳糖200 mg·kg-1+ig蒸馏水)，低剂量组(ip d(+)半乳糖200 mg·kg-1+ ig葛根黄酮50 mg·kg-1)，高剂量组(ip d(+)半乳糖200 mg·kg-1 + ig葛根黄酮150 mg·kg-1)，阳性对照组(ip d(+)半乳糖200 mg·kg-1+ig维生素e100 mg·kg-1)。
1.4 标本采集 本实验用昆明小鼠ip d(+)半乳糖造成衰老模型，ip d(+)半乳糖5w后，模型组小鼠血清mda高于正常对照组，但无统计学意义;当时间增至7w后，血清mda明显高于正常，两组数据比较有显著意义，故实验时间定为7w。7w后取材，所有小鼠于取材前1d停饲料，并禁食12h，乙醚麻醉，眼底静脉取血，离心取血清备用。
1.5 统计方法 采用spss13.0软件处理，实验数据以x±s表示，多组间比较用方差分析，两均数比较用t检验，显著性界值p=0.05。
2 结果
2.1 葛根黄酮对衰老模型小鼠血清脂质过氧化物mda含量的影响
结果见表1。mda可反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映细胞受损的程度。血清mda测定数据显示：模型组血清脂质过氧化物mda含量比正常饲料组有明显增高(p<0.001)，阳性对照组及高剂量组均能明显降低血清mda水平，与模型组比较均有显著性意义(p<0.01);低剂量组血清mda与模型组比较有所降低，但无统计学意义(p>0.05)。
2.2 葛根黄酮对衰老模型小鼠血清超氧化物歧化酶(sod)含量的影响
结果见表1。sod对机体的氧化和抗氧化平衡起着至关重要的作用。血清sod测定数据显示，模型组血清sod含量与正常饲料组相比有显著性差异(p<0.001)，阳性对照组及高剂量组均能明显升高血清sod活力水平，与模型组比较均有显著统计学意义(p<0.05)，低剂量组血清sod与模型组比较有所升高，但无统计学意义(p>0.05)。
2.4 葛根黄酮对衰老模型小鼠血清gshpx含量的影响
gshpx是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。特异性催化还原型谷胱甘肽(gsh)对过氧化氢的还原反应，发挥保护细胞膜结构和功能完整的作用,gshpx的活性高低可影响小鼠体内抗氧化能力的强弱。血清gshpx测定数据显示，模型组血清gshpx含量与正常饲料组相比有显著性差异(p<0.001)，阳性对照组及高剂量组均能明显升高血清gshpx水平，与模型组比较均有显著意义(p<0.001)，低剂量组与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义。结果见表1。表1 葛根黄酮对dgal致衰老小鼠血清mda、sod和gshpx的影响
3 讨论
衰老是机体在细胞水平上受自由基损害的结果，是自由基干扰细胞的新陈代谢过程。血清中活性氧自由基导致脂质过氧化而产生大量的mda;sod、gshpx是体内生物防护体系中最重要的抗氧化酶，是体内自由基清除剂，在机体抗自由基损伤中起着重要作用。
目前已发现很多疾病的发生发展、防治及诊断均与自由基有关。氧自由基是需氧生物细胞进行正常代谢的副产品，在氧自由基产生过多，或/和机体内的抗氧自由基系统被大量消耗时，即氧自由基与抗氧自由基平衡失调，自由基则有可能引起疾病。在防治氧自由基引起的疾病方面，人们常规应用外源性抗氧自由基药物，特别是老年人，在正常情况下经常服用一定剂量的抗氧自由基药物，有利于延缓动脉硬化，防治动脉硬化引起的心血管疾病。
一般认为给小鼠连续注射d半乳糖后，因其代谢产物半乳糖醇不能进一步代谢而堆积在细胞内，导致细胞肿胀，致使小鼠组织细胞出现衰老时的退行性改变以及功能的改变，同时d半乳糖在体内氧化产生的大量自由基超过机体的清除能力，引发脂质过氧化的链式反应，并且过氧化脂质(lpo)的分解终产物(如mda)可与dna、rna、蛋白质、磷脂等物质结合，损伤细胞膜，引起神经系统的功能障碍[6]。通过检测小鼠血清mda、sod、gshpx的水平，显示模型组的mda水平显著升高，sod、gshpx活力水平显著降低。
实验结果显示，高剂量组与阳性对照组比较，小鼠血清中mda降低，sod、gshpx的活力升高;低剂量组虽没有阳性对照组作用显著，但与模型组sod、gshpx的活力相比，也有一定程度的改善。因而推测葛根黄酮可能通过提高机体内sod和gshpx活性，增强其对自由基的清除能力，抑制脂质过氧化，降低体内mda的生成，从而起到保护机体组织的作用，同时达到延缓衰老的目的。
【参考文献】
1 张远荣,蒋企洲. 葛根黄酮的抗氧化活性作用[j]. 实用临床医药杂志, 2005, 9(5): 92-93.
2 胡琴,齐云,许利平,等. 葛根黄酮的体外抗氧化活性研究[j]. 中药药理与临床, 2007, 23(6): 29-31.
3 郭密,张仲君,徐寿水,等. 葛根素抗缺氧及抗氧化作用的实验研究[j]. 中华老年心脑血管病杂志, 2007, 9(4): 279.
4 黎勇坤,李聪,古昆,等. h2o2/fe2+体系中羟基氧化行为的抑制与促进[j]. 云南大学学报(自然科学版), 2002, 24(4): 302-305.
5 裴凌鹏,张帅,李文卅,等. 葛根黄酮的提取和抗氧化研究[j]. 北京联合大学学报(自然科学版). 2003, 17(3): 78-82.
6 裴凌鹏,常铮,金宗濂,等. 葛根黄酮改善老龄小鼠抗氧化功能的研究[j]. 营养学报(自然科学版), 2004, 26(6): 505-506.
