作者：李少华,黄国鑫,韦史利,任薇,赵学军
【摘要】 【目的】通过镇痛和催眠等药效实验筛选复方新生颗粒的提取工艺。【方法】分别从水提、醇提、超临界co2萃取挥发油中选择不同方法设计4条提取工艺路线。选用昆明种小鼠，随机分为模型组，阿斯匹林组(剂量为05 g·kg-1·d-1)，工艺路线1、2、3、4组(剂量均为374 g·kg-1·d-1)，连续给药3 d后，各组小鼠均腹腔注射012 mol/l冰醋酸溶液，观察15 min内产生扭体反应的次数及开始出现扭体的时间，计算疼痛抑制率。选用昆明种小鼠，随机分为模型组，舒乐安定组(剂量为5 mg·kg-1·d-1)，工艺路线1、2、3、4组(剂量均为374 g·kg-1·d-1)，连续给药3 d后，各组小鼠均腹腔注射戊巴比妥钠25 mg/kg，计算小鼠入睡数及入睡百分率。【结果】各工艺路线组均对冰醋酸引起的小鼠扭体反应有显著抑制作用(p<005或p<0001)，显著延长扭体出现时间(p<001或p<0001)，其中工艺路线3、4组作用更佳。工艺路线2、3、4组均能显著提高小鼠戊巴比妥钠阈下剂量的入睡率(p<005或p<001)，且工艺路线3、4组作用更强。【结论】综合药效试验结果与生产实际，确定复方新生颗粒的提取路线为川芎与羌活采用超临界co2萃取挥发油，其他药物与超临界提取后药渣加水提取。WwW.11665.COM
【关键词】 复方新生颗粒/生产和制备;镇痛;催眠;疾病模型，动物;小鼠
美沙酮替代递减之脱毒疗法是戒断海洛因的标准疗法,但美沙酮脱毒后复吸率高达95%[1]。中医认为美沙酮脱毒后的戒断综合症最基本病机为“气阴两虚,精枯血热,痰、血、气互结”,复方新生颗粒具有益气养血、滋阴清热、祛痰逐瘀的功效,临床上主要用于焦虑不安,渴求毒品,失眠多梦,周身酸痛的稽延性戒断综合征[2]。本研究采用镇痛、催眠等药效实验对复方新生颗粒的提取工艺进行评价,从中筛选出较能符合疗效的提取方法,现报道如下。
1实验材料
11主要试剂与仪器5 l超临界co2萃取仪(sfeco2,广州市轻工业研究所),zl3型电子天平(广州白云正力电子厂)。阿司匹林由石家庄神威药业有限公司提供(批号070112)，冰醋酸由天津市富宇精细化工有限公司提供(批号：070108)，戊巴比妥钠由北京化学试剂厂提供(批号：020919)，艾司唑仑片(舒乐安定片)由湖北制药有限公司提供(批号：20061103)。
12实验药物复方新生颗粒由党参、川芎、羌活、枳壳等组成,药材均购自广州致信药业有限公司。
13实验动物昆明种小鼠,体质量(20±2)g,spf级,由广东省医学实验动物中心提供,合格证号：粤监证字2007a006。
14提取工艺复方新生颗粒中党参主要成分为糖类、苷类,川芎含阿魏酸、挥发油类,羌活含香豆精类化合物,枳壳含黄酮苷类等,根据临床应用经验和处方中各味药材所含有效成分的性质,共设计了4条路线。
141工艺路线1取处方药材,加水浸泡1 h,加10倍量水煎煮2次,每次1 h,过滤,合并滤液,浓缩,备用。
142工艺路线2取处方中川芎、羌活用8倍量体积分数70%乙醇提取2次,每次1 h,合并提取液,回收乙醇。剩余枳壳等药味加水浸泡1 h,加10倍量水煎煮2次,每次1 h,合并上述醇提与水提浓缩液备用。
143工艺路线3由于处方中川芎、羌活均含有挥发油,所以先采用sfeco2法提取挥发油,药渣与处方中其他药味合并加10倍量水煎煮2次,每次1 h,过滤,合并滤液,浓缩备用,挥发油临用前加入混合均匀。
144工艺路线4由于处方中川芎、羌活均含有挥发油,所以先采用sfeco2法提取挥发油,药渣用8倍量体积分数70%乙醇提取2次,每次1 h,合并提取液,回收乙醇,药渣与处方中其他药味合并加10倍量水煎煮2次,每次1 h,过滤,合并滤液,浓缩,合并上述醇提与水提浓缩液备用。挥发油临用前加入混合均匀。
15统计学方法采用spss 130 for windows进行数据的统计分析。
2方法与结果
21各提取工艺组对化学刺激法所致疼痛的影响[3]取小鼠72只,雌雄各半,随机分为6组：模型组,工艺路线1、工艺路线2、工艺路线3、工艺路线4组(剂量均为374 g·kg-1·d-1),阿司匹林组(剂量为05 g·kg-1·d-1)。各组小鼠按20 ml/kg灌胃给药(模型组灌等容积的蒸馏水),连续3 d。于末次给药后15 h,各小鼠均腹腔注射012 mol/l冰醋酸溶液10 ml/kg,观察15 min内产生扭体反应的次数及开始出现扭体的时间,计算各药对疼痛的抑制率：p抑制=(n扭体,模型组-n扭体,给药组)/n扭体，模型组×100%。
表1结果表明：与模型组比较，复方新生颗粒各提取工艺组对冰醋酸引起的小鼠扭体反应均有明显抑制作用。工艺路线3组和工艺路线4组较工艺路线1组能显著延长扭体开始时间(p<005),较工艺路线1组及工艺路线2组能显著减少扭体次数(p<005或p<001),工艺路线3与工艺路线4组比较差异无显著性意义(p>005)。
22各提取工艺组对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响[2]取雄性小鼠随机分为6组：模型组，舒乐安定组(剂量为5 mg·kg-1·d-1),工艺路线1、工艺路线2、工艺路线3、工艺路线4组(剂量均为374 g·kg-1·d-1)。各组小鼠按20 ml/kg灌胃给药(模型组灌等容积的蒸馏水),连续3 d。末次给药后1 h各鼠腹腔注射戊巴比妥钠25 mg/kg,30 min内动物翻正反射消失达1 min以上者,表明发生了睡眠。计算动物入睡数,结果见表2。
表2结果提示，复方新生颗粒工艺路线2、3、4组均能加强小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用，与模型组比较差异有显著性意义(p<005或p<001)。 表1复方新生颗粒对化学刺激法所致疼痛的影响表2对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响
3讨论
美沙酮脱毒之稽延性戒断综合征临床主诉为肌肉和关节疼痛、失眠(占60%)等[4],根据这一系列症状,本研究选择镇痛和催眠实验相结合来评价复方新生颗粒的提取工艺。从镇痛实验看,4种提取工艺对冰醋酸引起的小鼠扭体反应均有明显抑制作用,尤以工艺路线3组与工艺路线4组效果更好,可能与提取物中含有挥发油有关。从催眠实验看,醇提较水提为优,而含有挥发油的工艺路线3、4组效果更佳,可能与制剂中醇溶性物质与挥发油较易通过血脑屏障[5]有关。本研究结果表明,复方新生颗粒制剂中挥发油为重要药效成分,采用水蒸气蒸馏无法获得挥发油,故采用sfeco2提取。超临界提取后，药渣提取采用工艺路线3与工艺路线4疗效无明显差异,但工艺路线4较工艺路线3多了醇提工艺,为减少溶剂用量与减轻生产成本,更适合工业大生产,故复方新生颗粒制剂确定为川芎与羌活采用sfeco2提取挥发油,其他药味与超临界提取后药渣加水提取。
【参考文献】
[1]王晓铁,秦伯益.纳曲酮防止阿片类依赖病人戒毒后复吸的研究现状[j].中国药物依赖性通报,1995,4(3)：139.
[2]张浩,陈向明,宋小鸽,等.中药配合美沙酮改善海洛因戒断综合征的临床观察[j].中国中西医结合杂志,2003,23(3)：217.
[3]徐叔云.药理实验方法学[m]. 3版.北京：人民卫生出版社,2001：805,882.
[4]铁恩贵,曾恒,金俊,等.阿片类依赖者脱毒后复吸情况及复吸原因的流行病学调查[j].中国药物依赖性杂志,1999,8(4)：305.
[5]阮琴,姜科声,何新霞,等.川芎挥发油对小鼠神经功能的影响[j].中国中西医结合杂志,2006,25：23.
