作者：宁鑫,吴睿,何瑞,詹若挺,徐晖,陈蔚文
【摘要】 【目的】比较阳春砂的3个栽培品种长果、圆果及春选果实化学成分的差异。【方法】分别采用气相色谱法、水蒸气蒸馏法、甲苯法对3个不同品种10个批次的阳春砂中乙酸龙脑酯、挥发油、水分的含量进行测定。【结果】阳春砂3个栽培品种长果、圆果、春选中挥发油含量差异无显著性意义(p>005),但春选品种乙酸龙脑酯含量较长果、圆果显著偏低(p<005)。3个品种水分含量均小于150 ml/kg,符合药典要求。【结论】不同栽培品种阳春砂的化学成分含量有所不同。
【关键词】 阳春砂/化学;挥发油/分析;乙酸龙脑酯/分析;色谱法，气相
研究显示阳春砂道地产区的栽培品种有长果和圆果阳春砂[1],在广东省阳春市砂仁试验示范场(简称砂仁示范场)还有小面积种植的选育中品种“春选”阳春砂。它们在形态和开花习性上均存在差异[2]。为进一步考察它们的品质区别,本研究测定了阳春市不同产区3个栽培品种阳春砂干燥成熟果实的挥发油、水分及乙酸龙脑酯含量。现将结果报道如下。
1材料与方法
11材料10批道地药材阳春砂果实分别来源于阳春蟠龙、阳春春湾大垌、阳春永宁庙龙、阳春双窑大陈、阳春春湾、阳春砂仁示范场等地,均为2007～2008年采收。WwW.11665.CoM样品经广州中医药大学詹若挺教授鉴定为姜科植物阳春砂amomum villosum lour.(avl)的干燥成熟果实。
12仪器与试剂hp6890型气相色谱仪(带氢火焰离子化检测器)(美国agilent公司)，xr 205 smdr型电子分析天平(德国sartorius公司)。乙酸龙脑酯对照品(批号：110759200303)、萘对照品(批号：11673200602)均购自中国药品生物制品检定所，流动相甲醇为色谱纯,其他试剂为分析纯,水为超纯水。
13挥发油含量测定取阳春砂供试品,去壳,将种子团置铜盅捣碎,过2～3号筛,取约20 g,称定质量,置1 000 ml磨口圆底烧瓶中,加蒸馏水300 ml,浸泡1 h,参照挥发油含量测定甲法[3]测定并计算供试品中挥发油含量。每个批次平行测定3次。
14水分含量测定取阳春砂供试品,置铜盅捣碎成直径不超过3 mm的颗粒或碎片,取约20 g,称定质量,置500 ml的短颈圆底烧瓶中,加甲苯200 ml,参照水分测定第2法[3]测定并计算供试品含水量。每个批次平行测定3次。
15乙酸龙脑酯含量测定[4-5]
151色谱条件安捷伦hp5毛细管柱(30 m×032 mm,025 μm);进样口温度：250 ℃，气化室温度：250 ℃，分流比为50∶1，流动相为n2,流速为15 ml/min;程序升温,起始温度70 ℃,保持1 min,以10 ℃/min速度上升至280 ℃,保持3 min。氢火焰离子化检测器(fid),温度300 ℃,h2为30 ml/min,空气为400 ml/min。尾吹气为n2,流速为30 ml/min。
152对照品溶液制备取乙酸龙脑酯适量,精密称定,置25 ml量瓶中,加无水乙醇制成7544 mg/ml的溶液,作为对照品溶液。
153内标溶液的制备精密称定萘适量,置100 ml量瓶中,加无水乙醇制成0905 6 mg/ml的溶液,作为内标溶液。
154供试品溶液制备取13项下提取所得挥发油加无水硫酸钠02 g,振摇,静置过夜。精密吸取脱水后的挥发油10 μl,置1 ml容量瓶中,加无水乙醇稀释并定容至刻度,摇匀,精密吸取上述溶液05 ml置1 ml容量瓶中,加入内标溶液定容至刻度,摇匀,备用。
155标准曲线的制备精密吸取对照品溶液005、01、02、03、04、05 ml,分别置于1 ml容量瓶中,精密加入内标溶液05 ml,再加无水乙醇定容至刻度,摇匀。分别精密吸取1 μl,按151项下色谱条件测定,以对照品与内标物峰面积之比为纵坐标y,以对照品的进样量为横坐标x绘制标准曲线,计算得回归方程：y=1785 7x-0091 1,r=0999 6,结果表明乙酸龙脑酯在0377 2～3772 μg范围内有良好的线性关系。
2010年第27卷广州中医药大学学报宁鑫，等.不同栽培品种阳春砂的化学成分比较第3期156精密度实验取155项下的溶液,按照相同方法测定,连续进样10次,每次进样1 μl,以萘为内标,按乙酸龙脑酯与内标物峰面积之比计算,结果峰面积之比的sr为064%(n=10),表明方法精密度良好。
157测定方法吸取供试品溶液1 μl,按照151项下色谱条件测定,记录色谱图,根据标准曲线计算乙酸龙脑酯含量。每个批次平行测定3次。
16统计学方法采用spss 160软件进行数据的统计分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用方差分析，方差不齐采用秩和检验，检验水平α=055。
2结果
21气相色谱图按拟定的色谱条件测定,所得色谱图见图1,内标物的保留时间tr=7955～7958 min,乙酸龙脑酯的保留时间tr=9255～9259 min,表明方法稳定。
22不同栽培品种阳春砂的挥发油、水分、乙酸龙脑酯含量测定表1结果显示:3个品种阳春砂水分含量差异无显著性意义(p>005),且均低表1不同栽培品种阳春砂样品中挥发油、水分和乙酸龙脑酯含量测定结果
于150 ml/kg,符合《中国药典》(2005版)中砂仁项下规定。3个品种挥发油含量差异无显著性意义(p>005),但春选阳春砂乙酸龙脑酯含量偏低,与长果、圆果阳春砂比较差异均有显著性意义(p<005)。
3讨论
本实验分析测定了道地产区3个栽培品种10个批次的阳春砂挥发油、水分及乙酸龙脑酯含量,为阳春砂不同品种的质量评价及优良品种选育提供了科学依据。
来自阳春市5个不同产区的长果阳春砂品种,其中有2个批次(cg080829、cg080828)挥发油含量低于30 ml/kg,不符合《中国药典》(2005年版)中砂仁项下的规定,这可能受不同生态环境或采收后处理、保存方式不同的影响。
乙酸龙脑酯是砂仁挥发油中主要成分,本课题组利用气质联用色谱峰面积归一化法分析了不同批次阳春砂挥发油,结果显示多数挥发油样品中乙酸龙脑酯的相对百分含量超过60%(待发表)。乙酸龙脑酯也是砂仁发挥药理作用的重要有效成分,具有显著的抑制番泻叶所致小鼠腹泻、冰醋酸所致小鼠疼痛及抑制离体家兔小肠平滑肌运动等作用[6]。本文结果显示,阳春砂春选品种乙酸龙脑酯含量较其他2个品种低,其药效是否也存在区别有待研究。另外,由于本实验中测定的春选品种批次较少,因此要进一步确证以上结论,还需要收集更多的阳春砂春选样品进行分析。
【参考文献】
[1]张丹雁,刘军民,徐鸿华. 阳春砂不同栽培品种的比较鉴别[j]. 广州中医药大学学报, 2005,22(1) :1.
[2] 杨锦芬,何瑞,詹若挺,等. 道地产区阳春砂不同栽培品种果实、花形态特征的调查与分析研究[c]. 全国第八届天然药物资源学术研讨会论文集, 2008：428.
[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[m]. 北京：化学工业出版社, 2005:附录57,附录47.
[4] 曾元儿,胡冬生,丁平,等. 砂仁药材质量标准研究[j]. 中国中药杂志, 1999,24(11):651
[5] 刘波,刘红斌,王京昆,等. 阳春砂仁药材质量标准研究[j]. 云南大学学报, 2008,30(3):286
[6] 李晓光,叶苗,徐鸿华. 砂仁挥发油中乙酸龙脑酯的药理作用研究[j]. 华西药学杂志, 2001,16(5) :356.
