作者：孙虹,胡淑毅,张剑波,邓丽娟
【摘要】 目的 通过测定复方五指柑胶囊中盐酸小檗碱的含量,为其质量控制提供稳定、可靠的测定方法。方法 采用高效液相色谱
法,diamonsil ods(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.033 mol/l磷酸二氢钾水溶液(30∶70),流速1.0 ml/min,检测波长347 nm,柱温30 ℃。结果 盐酸小檗碱在2.52～12.6 μg/ml范围与峰面积呈良好的线性关系,该制剂中的盐酸小檗碱平均含量为1.686 mg/粒。结论 本法简便、准确,可作为该制剂含量控制方法。
【关键词】 复方五指柑胶囊；高效液相色谱法；盐酸小檗碱；含量测定
key words：compound wuzhigan capsules；hplc；berberine chloride；content determination
复方五指柑胶囊是在部颁标准收载品种复方五指柑片的基础上研制而成,处方由五指柑、功劳木等药材组成,具有清热解表、燥湿止泻的功效,用于治疗急性胃肠炎、风热感冒、痢疾等疾病,临床疗效较好。WWW.11665.com为有效控制产品质量,我们采用高效液相色谱法(hplc),对处方中君药功劳木的主要成分盐酸小檗碱含量进行测定,方法简便、灵敏度高,重现性好,专属性强。
1 仪器与试药
lc-10atvp高效液相色谱仪(日本岛津),超声清洗器(kq- 100db,昆山市超声仪器有限公司),sartorius电子天平(德国)。复方五指柑胶囊(丽珠集团利民制药厂,批号为20030409、20030411、20030413),盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号0713-200107,经归一法测得含量为99.998%)。乙腈为色谱纯,水为双蒸水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：diamonsil(钻石)ods(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.033 mol/l磷酸二氢钾水溶液(30∶70),流速1.0 ml/min,检测波长347 nm,柱温30 ℃。在此条件下盐酸小檗碱与其他组分能达到基线分离,盐酸小檗碱对照品保留时间为11.00 min左右,色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷真空干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量,加乙醇制成每1 ml含盐酸小檗碱5 μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取复方五指柑胶囊内容物,研细,取约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入盐酸-甲醇(1∶100)50 ml,称定重量,充分振摇后,超声处理(功率100 w,频率40 khz)30 min,放冷,称定重量,用盐酸-甲醇(1∶100)补足减失的重量,摇匀,滤过。照柱色谱法[《中华人民共和国药典》2000年版(一部)附录ⅵc]试验,精密量取滤液5 ml,加入氧化铝柱(内径约9 mm,中性氧化铝5 g,湿法上柱,用乙醇30 ml预洗)上,用30 ml乙醇分次洗脱,收集洗脱液,置50 ml量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得[1-4]。
2.4 空白试验
取处方量的药材(不含功劳木),依法制成阴性对照品溶液,按前法进行测定。结果未检出盐酸小檗碱峰,故可确定处方中其他药材成分对盐酸小檗碱的含量测定不产生干扰,见图1。
2.5 线性关系的考察
精密称取经五氧化二磷真空干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品3.15 mg,置于100 ml量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,其浓度为31.5 μg/ml,作为对照品储备液。分别精密量取该储备液4、8、12、16、20 ml至50 ml量瓶中,加乙醇至刻度,浓度分别为2.52、5.04、7.56、10.08、12.6 μg/ml,作为对照品溶液。分别取对照品溶液10 μl注入色谱仪,以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标进行回归,绘制标准曲线,得盐酸小檗碱的回归方程为：y＝54 808.2x－10 273.6,r＝0.999 8,表明盐酸小檗碱在2.52～12.6 μg/ml范围有良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取同一批号样品,依供试品溶液制备方法制备并测定,连续进样5次,每次10 μl,测定峰面积,结果分别为290 854、290 682、289 990、287 664、292 657,平均峰面积为290 369.4, rsd＝0.62%。表明本方法具有良好的精密度。
2.7 重复性试验
取5份同一批号样品,依供试品溶液制备方法制备并测定,每次10 μl,测定峰面积,含量分别为0.274%、0.265%、0.273%、0.271%、0.277%,平均含量为0.272%,rsd＝1.64%。表明本法重复性良好。
2.8 稳定性试验
取同一批号样品,按供试品溶液制备方法制备,分别在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h进行测定,每次进样10 μl,比较峰面积,结果分别为287 882、294 712、293 151、288 945、295 062、294 328、301 690、293 207、292 426。平均峰面积为293 489.2,rsd＝1.27%。结果表明,样品制备后8 h内测定,结果均稳定,故应在8 h内完成测定。
2.9 回收率试验
采用加样回收法,取同一批号已知含量的复方五指柑胶囊内容物5份,按比例添加盐酸小檗碱对照品液,按上述色谱条件测定,计算回收率,结果见表1。结果表明,本方法具有良好的回收率。 表1 盐酸小檗碱回收率试验结果（略）
2.10 样品测定
取3批样品,按照供试品溶液制备方法制备,每份测定3次,取平均值,计算含量。结果3批平均值为1.686 mg/粒。见表2。表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 测定波长的选择
盐酸小檗碱对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描,结果在265、347 nm波长处均有吸收,但用265 nm波长测定时有一定干扰,故采用347 nm波长检测,基线平稳,图谱杂质干扰少,重现性好。
3.2 流动相的选择
曾采用乙腈-0.033 mol/l磷酸二氢钾水溶液(40∶60)、乙腈-0.033 mol/l磷酸二氢钾水溶液(30∶70)为流动相进行试验,结果后者盐酸小檗碱对照品色谱峰与其他杂质峰完全分开,达到基线分离且峰形较好,保留时间11 min左右,效果最好。
3.3 样品提取条件的选择
采用正交试验法比较了超声时间、超声温度、提取溶媒对盐酸小檗碱提取率的影响,每个因素选择3个水平,以l9(34)正交表进行试验。试验结果表明,复方五指柑胶囊的最佳提取条件为盐酸-甲醇(1∶100),室温,超声提取30 min。
本试验所用的方法操作简便,灵敏度高,重复性好,专属性强,可作为复方五指柑胶囊的质量控制方法。
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