hmga2、mmp2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
【关键词】 非小细胞肺癌;免疫组织化学;hmga2;mmp2
【摘要】 目的 研究高迁移率蛋白(hmga2)、基质金属蛋白酶2(mmp2)在非小细胞肺癌(nsclc)组织中的表达，及其与肿瘤转移和侵袭的关系。方法 采用免疫组化(sp)法检测64份肺癌组织和18份正常组织中hmga2、mmp2表达的水平。结果 在nsclc中检测hmga2、mmp2表达的阳性率分别为79.7%和70.3%，显著高于正常肺组织(27.8%和33.3%)(p<0.05)。hmga2、mmp2的表达水平与肿瘤的tnm分期和有无淋巴结转移密切相关(p<0.05)。结论 hmga2、mmp2在nsclc中的表达与肿瘤的发生、侵袭、转移密切相关，可能成为判断nsclc淋巴结转移及预后的指标之一。
【关键词】 非小细胞肺癌;免疫组织化学;hmga2;mmp2
肿瘤的侵袭和转移机制是多步骤、多阶段的复杂的过程，是侵袭细胞与其所在的细胞微环境(细胞外基质，ecm)相互作用的过程。基质金属蛋白酶(mmps)是一类锌离子依赖的细胞外蛋白水解酶，可以降解细胞外基质和基底膜。mmps在肿瘤细胞的侵袭和转移中发挥重要的作用〔1〕。其中mmp2是其中重要一员。www.11665.coM关于高迁移率蛋白(hmga2)是近几年发现的细胞核内的一种非组蛋白。具有改变染色体结构的能力，调节多种目的基因表达的作用〔2〕。本文旨在探讨hmga2、mmp2与非小细胞肺癌(nsclc)发生、侵袭、转移的关系，为肺癌的预后判断及临床治疗提供理论参考。
1 材料与方法
1.1 材料
取自2008年4月至2009年12月在本院胸外科手术切除肺癌存档的组织病理蜡块。其中鳞癌28例，腺癌36例。包括高分化鳞癌9例，中分化鳞癌11例，低分化鳞癌8例;高分化腺癌10例，中分化腺癌14例，低分化腺癌12例。tnm分期中ⅰ期鳞癌6例，ⅱ期鳞癌12例，ⅲ期鳞癌10例;tnm分期中ⅰ期腺癌8例，ⅱ期腺癌15例，ⅲ期腺癌13例。正常组织18例。有淋巴结转移者35例，无淋巴结转移者29例。所有病例术前均未进行放射治疗和抗癌化学药物治疗。
1.2 方法
1.2.1 免疫组化sp法
所用组织病理蜡块进行切片，采用免疫组化sp法，对鳞癌、腺癌和正常肺组织切片进行mmp2、hmga2的免疫组织化学染色。显微镜下观察染色程度、进行定量计分并计算阳性率。mmp2、hmga2兔抗人单克隆抗体均购自北京博奥森公司。二抗为中杉sp9001兔抗试剂盒，用二甲基联苯胺dab显色，再采用苏木素复染。实验步骤严格按照实验操作方法进行。操作步骤严格按sp试剂盒说明书进行。一抗浓度为1∶150，每批实验均以北京博奥森公司提供的阳性对照片做阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照。
1.2.2 mmp2和hmga2的染色结果判定
用低倍镜和高倍镜观察全片，mmp2的阳性染色为在细胞膜或细胞质内出现棕黄色颗粒。hmga2的阳性染色为细胞核内出现棕黄色颗粒。参照贺荣芳等〔3〕描述的分级方法，每例切片随机选取5个高倍视野进行结果判定。根据细胞被染强度及染色细胞所染面积的百分比之和来判断结果。染色强度计分：不染色为0分，轻度染色为1分，中度染色为2分，重度染色为3分。染色面积定量计分：无细胞染色为0分，小于25%细胞染色为1分，25%至50%细胞染色为2分，大于50%染色为3分。染色强度得分与阳性细胞数得分相乘，0分为(-)，1～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性()，≥6分为强阳性()。
1.3 统计学分析
采用spss17.0软件对数据进行统计学分析，χ2检验和秩合fisher检验，相关性分析采用spearman等级相关性分析。
2 结 果
2.1 hmga2、mmp2在正常肺组织与nsclc的一般情况
mmp2主要表达于肿瘤细胞的细胞质，hmga2表达于细胞核内。nsclc 的mmp2蛋白表达阳性为45例(70.3%)，hmga2表达阳性为51例(79.7%)。hmga2和mmp2在正常对照组中的阳性表达分别为5例(27.8%)、6例(33.3%)。hmga2和mmp2在nsclc中阳性率均高于对照组(p<0.05)。见图1。
2.2 mmp2、hmga2与nsclc与临床病理特点之间的关系
mmp2 和hmga2在tnm分期(ⅰ+ⅱ)期中阳性率(53.8%和51.3%)明显低于ⅲ期的阳性率(92%和96%)，有显著性差异(p<0.05)。另外，mmp2 和hmga2的表达在有淋巴结转移的nsclc组中高于无淋巴结转移的nsclc组(p<0.05)。而mmp2 和hmga2的表达阳性率与nsclc的年龄、性别、病理类型及有无吸烟史等无相关性。见表1。
2.3 nsclc中mmp2与hmga2之间的关系
spearman等级相关性分析结果表明，nsclc组织中hmga2与mmp2共阳性表达42例，共阴性表达11例，mmp2阳性、hmga2阴性2例，mmp2阴性、hmga阳性9例，二者表达呈正相关(χ2=21.209，p<0.05)。图1 mmp2、hmga2在肺癌及正常肺组织中的表达表1 mmp2、hmga2与nsclc临床病理特点
3 讨 论
mmp2是mmps家族中的一员，分子量为72 kd，位于人类染色体16q21，由13个外显子和21个内含子组成。mmp2能降解明胶和ⅳ、ⅴ、ⅵ、ⅹ型胶原蛋白，所以又称明胶酶或ⅳ型胶原酶。近年来研究表明，在许多肿瘤组织中，都发现有较高mmp2的表达，mmp2在肿瘤细胞中异常增多提示转移的发生率增高，mmp2被认为是肿瘤转移的促进因子〔4〕，并且其表达程度与肿瘤的侵袭性有关〔5，6〕。本实验表明，mmp2的表达以弥漫性分布为主，癌组织的着色明显深于周围组织。nsclc组织中mmp2的阳性率明显升高，且mmp2的阳性率tnm分期ⅲ期中的阳性率高于(ⅰ+ⅱ)期的阳性率，有淋巴结转移的癌组织较无淋巴结转移的癌组织的表达增强(p<0.05)。考虑mmp2参与nsclc的转移、侵袭等肿瘤发生发展的过程。
hmga2是一种特殊类型的非组蛋白，广泛分布于高等生物的细胞核中。其分子量少于30 kd，含有丰富的电荷氨基酸，因在凝胶电泳中移动高速而得名。hmg包含三大家族：hmgb(hmgbox proteins)，hmga(athook proteins)，hmgn(nbd proteins)。其中，hmga基因作为原癌基因，hmga蛋白在细胞增生中起到一定的作用。由于hmga蛋白家族具有改变染色体结构的能力，因此可调节多种目的基因表达，使其通常被认为是结构性转录因子〔2〕。hmga参与转录调节、胚胎形成、分化、致瘤性转化等不同的生物学过程。hmga2是20世纪80年代末新发现的成员，由于其编码区位于许多肿瘤细胞染色体断裂点的簇集区，所以它的异常表达与肿瘤的发展有关〔7〕。近年发现其与肿瘤发生、侵袭、转移有密切关系，其在许多哺乳动物癌细胞中都有较高的表达，且表达水平与肿瘤恶性程度和转移能力有关〔8，9〕。本实验通过免疫组化的方法检测nsclc及正常组织中hmga2的表达水平。结果发现在正常组织中hmga2很少表达，在nsclc中明显表达(p<0.05)，且在有淋巴结转移的癌组织中高于无淋巴结转移癌组织中的表达(p<0.05)，tnm分期ⅲ期中的阳性率高于(ⅰ+ⅱ)期的阳性率(p<0.05)。考虑hmga2与nsclc有无淋结巴转移以及临床tnm分期有关，而与肿瘤大小、年龄、性别、有无吸烟无关。
综上所述，mmp2、hmga2在nsclc有淋巴结转移组中的表达明显强于无淋巴结转移中的表达，tnm分期ⅲ期中的阳性率高于(ⅰ+ⅱ)期的阳性率。而在正常肺组织中不表达或弱表达。因此，mmp2、hmga2可能成为判断nsclc的治疗效果和预后的一个标准。mmp2、hmga2在nsclc中的表达存在正相关性，但二者之间是否存在相互促进的关系，还需要进一步的实验及扩大样本含量来进一步确认。
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