【关键词】  糖尿病

　　2型糖尿病患者高血压、冠心病、肥胖、卒中等并发症  的发生率明显高于普通人群。2型糖尿病和高血压均为一  类具有共同遗传背景的多基因疾病。近年有关于载脂蛋白   e（apoe）基因多态性与高血压关系的研究报道，但结果很  不一致。本文采用分子生物学手段以中国东北地区汉族为  对象，探讨apoe基因多态性与2型糖尿病合并高血压的关  系。   

　　1 对象与方法   

　　1.1     研究对象 病例来源于2002年10月～2003年7月  在我院住院患者。对照来源于同期无糖尿病史及脑血管病  史的住院患者和门诊体检者。2型糖尿病诊断和分型依照  1999年who制定的标准。高血压诊断按1999年who和  ish标准。本研究收集单纯2型糖尿病患者45例，2型糖  尿病合并高血压患者92例，对照组68例;性别、年龄和体  重指数在3组之间比较差异均无显著性，具有可比性。  

　　1.2     研究方法  

　　1.2.1  标本的采集与处理 所有受试者在上午6～8时空  腹抽取肘静脉血2.7ml，注入含枸橼酸钠抗凝的真空管，置  -70℃保存。wWW.11665.coM采用酚-氯仿法提取基因组dna，-20℃保  存至分析用。  

　　1.2.2     apoe基因的pcr扩增 以基因组dna为模板，  pcr扩增apoe基因第4外显子片段。反应引物按wenham  等    ［1］    报道设计，由上海sangon公司合成。上游引物序列  为:5′-tccaaggagctgcaggcggcgca-3′;下游引物序  列为:5′-acagaattcgccccggcctggtacactgcca-  3′。pcr扩增在10μl反应体系中进行，其中包括基因组  dna 1μl（10～20ng/μl），10×buffer 1μl，4×dntp 0.6μl  （2.5mm），引物各0.4μl（10μmol/l），二甲亚砜1μl，taq   dna聚合酶0.5u。先进行94℃10s、68℃10s、72℃30s共4  个循环，再进行94℃10s、62℃10s、72℃30s共30个循环，最  后置于72℃延伸7min。pcr产物经2%琼脂糖凝胶电泳，eb染色检测扩增结果。  

　　1.2.3     限制性内切酶消化 限制性酶切反应在20μl反应  体系中进行，其中包括pcr产物6μl，hin6i内切酶6u  （10u/μl）及相应buffer 2μl。轻轻混匀后置37℃消化过   夜。酶切产物经8%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，dna快速  银染，电泳图谱按文献    ［3］    的方法鉴定apoe基因型。  

　　1.3     统计学方法 用χ    2   检验进行等位基因和基因型频率  分布的比较，用方差分析进行组间均数的比较，数值用均数  ±标准差（ ˉ x±s ）表示。 p <0.05差异具有显著性。所有统  计学分析均采用sas 6.0统计软件系统进行。   

　　2 结果   

　　2.1     apoe基因型鉴定 载脂蛋白e基因pcr-rflp电  泳结果见图1。

　　图1   载脂蛋白e基因pcr-rflp电泳结果   略

　　2.2     apoe基因型及等位基因频率分布 见表1。   

　　表1 3组人群apoe等位基因及基因型频率分布    （略）

　　3 讨论  

　　载脂蛋白e根据氨基酸序列的不同，有3种主要的异  构体e    2   、e    3   和e    4   ，分别由19号染色体上的一个基因位点  的3个等位基因ε    2   、ε    3   和ε    4   编码，形成apoe基因多态性    ［2］    。这3种等位基因呈共显性表达，在人群中组成了6  种不同的基因表型，即3种纯合子（ε    2   ε    2   、ε    3   ε    3   、ε    4   ε    4   ）和3种  杂合子（ε    2   ε    3   、ε    2   ε    4   、ε    3   ε    4   ）。  apoe基因多态性与血压的关系仍未阐明，临床研究结  果亦有较大分歧。uusitupa等    ［3］    根据apoe多态性对胆固  醇的影响，推测它可能和血压间存在着某种联系，经研究发   现ε    4   等位基因携带者收缩压较其他等位基因者高，而舒张压则与apoe基因多态性无关  ［3］    。de knijff等    ［4］    认为apoe  基因多态性与血压无关。uusitupa等［3］认为apoe可能 通  过升高ldl来减弱内皮依赖性血管舒张而使血压升高;  另外它可能通过影响高血压的相关危险因素而间接起作  用，如携带e    4   等位基因者ldl较高    ［5］    ，而较高的ldl个  体易发生动脉硬化，进而影响血压;有研究认为apoe基因  多态性与高胰岛素血症及胰岛素抵抗间存在相关性    ［6］    ，  胰岛素抵抗被认为是高血压的重要危险因素和病理生理  机制。本研究的结果显示，2型糖尿病合并高血压患者携  带ε    4   等基因的频率与单纯2型糖尿病组和对照组差异无  显著性。这与郑以漫等    ［7］    研究的结果一致。我们认为  apoe基因型与中国东北地区汉族人2型糖尿病合并高血  压无相关性。  apoe基因多态性与血压之间的关系颇为复杂，可能通  过基因-基因及基因-环境间的相互作用    ［8］    ，以某些直接  或间接的方式影响血压。其确切关系和机制还有待于进一  步研究。    

　　【参考文献】   

　　1  wenham pr，price wh，blundell g.apolipoprotein e genotyping by    one-stage pcr.lancet，1991，337 （8750）:1158-1159. 

　　2 zannis vi，breslow jl.human very low density lopoprotein e isopro-  tein polymorphism is explained by genetic variation and post-trans-  lation modification.biochemistry，1981，20 （4）:1033-1041. 

　　3 uusitupa m，sarkkinen e，kervinen k，et al.apolipoprotein e phe-  notype and blood pressure.lancet，1994，343:57-62. 

　　4 de knijff p，boomsma di，fesken ejm，et al.apolipoprotein e phe-  notype and blood pressure.lancet，1994，343:1234. 

　　5 cui gf.apolipoprotein e and atherosclerosis. xiandai zhenduan yu   zhiliao （ mod diagn treat ），2000，11 （2）:86 -88. 

　　6 li yf，zhao sp.apolipoprotein e gene polymorphism and hyperten-  sion. gaoxueya zazhi （ chin j hypertension ），2000，8 （1）:9 -  11. 

　　7 郑以漫，孙荣，李小英，等.apoe基因多态性与中国人2型糖尿  病及其心血管并发症的关系.中华内分泌代谢杂志，1998，14  （1）:11-14. 

　　8 kauma h， savolainen mj， rantala ao， et al.apolipoprotein e   phenotype determines the effect of alcohol on blood pressure in mid-  dle- aged men.am j hypertens，1998，11 （11pt1）:1334-1343.