【摘要】 目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(hplc-elsd)测定耳聋左慈丸中熊果酸的含量。方法 色谱柱vp-ods c18；以甲醇-0.5%醋酸(90∶10)为流动相；流速：0.8 ml/min。结果 熊果酸在63～630 μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为98.11%(rsd=1.14%)。结论 本法简便、准确、重现性好,可用于该制剂的含量测定。
【关键词】 耳聋左慈丸；熊果酸；高效液相色谱-蒸发光散射检测法
abstract：objective the method for determination of ursolic acid in erlongzuoci pills by hplc-elsd was established. methods vp-ods c18 column was used with the mobile phase of methanol-0.5% acetic acid (90∶10). the flow rate was 0.8 ml/min. results ursolic acid showed a good linear relationship at the range of 63～630 μg/ml (r=0.999 9). the average recovery was 98.11% (rsd=1.14%). conclusions the method is simple, accurate and reproducible. it can be used for determination of ursolic acid in erlongzuoci pills.
key words：erlongzuoci pills；ursolic acid；hplc-elsd
耳聋左慈丸原标准来源于2005年版《中华人民共和国药典》(一部),由磁石、熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药等组成,具有滋肾平肝的作用,用于肝肾阴虚、耳鸣耳聋、头晕目眩的治疗。WwW.11665.com原标准[1]中采用薄层扫描法测定山茱萸中熊果酸的含量,但薄层扫描法存在操作繁琐、受实验条件影响较大、重现性差等不足。我们建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(hplc- elsd)测定制剂中熊果酸的含量,结果表明,该法简便易行,重现性好,回收率高,可用于耳聋左慈丸的质量控制。
1 仪器与试药
岛津lc-10at高效液相色谱仪,alltech2000型elsd检测器(美国奥泰科技有限公司)。流速：0.8 ml/min,漂移管温度：80 ℃,气体流速：2.2 ml/min,柱温：30 ℃。
耳聋左慈丸为自制；熊果酸对照品购于中国药品生物制品检定所(批号110742-200415)。甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[2]
色谱柱：vp-ods c18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.5%醋酸(90∶10)；流速：0.8 ml/min；理论塔板数按熊果酸计算应不低于2 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取在60 ℃减压干燥4 h的熊果酸对照品适量,加甲醇分别制成1 ml含250 μg和350 μg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品15 g研细,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇100 ml,称定重量,超声处理40 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液50 ml,置水浴上蒸干,加石油醚浸泡2次,每次2 min,倾去石油醚液,残渣加甲醇溶解,转移至10 ml量瓶中并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性溶液的制备
按处方比例称取除山茱萸外的其它药材,按耳聋左慈丸的制备工艺及供试品溶液的制备方法制备阴性溶液。
2.5 空白试验
取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液,依上述色谱条件测定,结果表明阴性无干扰(见图1)。
2.6 线性关系的考察
精密称取熊果酸对照品15.75 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,精密吸取1、2、4、8、10 ml,置10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,分别吸取20 μl,照高效液相色谱法测定峰面积,以浓度对数(lgc)为横坐标,峰面积对数(lgs)为纵坐标进行回归处理,回归方程为：lgs=1.375 2 lgc＋3.209 6(r=0.999 9)。结果表明,熊果酸在63～630 μg/ml范围内具有良好的线性关系。
2.7 精密度试验
取样品按上述色谱条件进行hplc分析,连续进样6次,结果熊果酸峰面积rsd=0.34%(n=6),表明该法精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取一定量的样品溶液,分别在0、3、6、9、24、48 h进样20 μl,结果峰面积rsd=1.15%,即熊果酸在48 h以内稳定。
2.9 重复性试验
取同一批耳聋左慈丸(20060401)样品6份,依法测定, rsd=1.64%,说明方法重复性好。
2.10 加样回收率试验
精密称取熊果酸对照品18.5 mg,置10 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,分别取1 ml加入已知含量的供试品溶液中,按含量测定项下方法测定,计算加样回收率,结果熊果酸的回收率为98.11%,rsd=1.14%(见表1)。表1 加样回收率测定结果(略)
1.82 1.85 3.66 99.46
2.11 样品含量测定
取不同批次样品,分别按供试品溶液的制备方法制备,按上述色谱条件测定,计算出样品中熊果酸的含量。结果见表2。表2 熊果酸的含量测定结果(略)
3 讨论
原标准采用薄层扫描法测定耳聋左慈丸中熊果酸的含量,样品处理过程中需要显色,重复性和精密度不好,本试验采用hplc-elsd法测定熊果酸的含量,方法简便,且重复性、精密度良好,加样回收率达98.11%(rsd=1.14%)。
山茱萸中含有熊果酸及其同分异构体齐墩果酸,两者剂型相近,文献[3]报道采用hplc法测定山茱萸中熊果酸的含量,但分离度不理想。本实验采用hplc-elsd测定熊果酸的含量,能有效分离熊果酸与齐墩果酸,分离度超过1.5。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.430.
[2] 赵永席,马国营,梁 恒.rp-hplc-elsd测定山茱萸中齐墩果酸与熊果酸的含量[j].中成药,2005,27(11)：1314.
[3] 涂兴明,黄有仲,朱 涛.hplc法测定山茱萸中熊果酸的含量[j].江西中医学院学报,2005,17(5)：40.
