作者：王修彬,张建文,蔡秀珍,王志潭,丁秀芳
【摘要】 目的 测定舒筋接骨片中血竭素的含量,以控制该制剂的质量。方法 以血竭素为指标,采用高效液相色谱法对制剂中的血竭素进行含量测定。结果 血竭素在1.53～7.66 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 9,平均回收率为98.64%,rsd＝1.12%。结论 采用本法测定舒筋接骨片中血竭素的含量方法简便、快速、重复性好,适用于该制剂的质量控制。
【关键词】 舒筋接骨片；血竭素；高效液相色谱法；含量测定
abstract：objective to control the quality of shujin jiegu tablets by determining the content of dracorhodin in the preparation by hplc. method with dracorhodin as index, the content of dracorhodin in the preparation was determined by hplc. results dracorhodin showed a good linear relationship in the range of 1.53～7.66 μg, r＝0.999 9. the average recovery was 98.64%, rsd＝1.12%. conclusion this method is simple, rapid, repeatable, and applicable to the quality control of the preparation.
key words：shujin jiegu tablets；dracorhodin；hplc；content determination
舒筋接骨片是本院应用多年、疗效确切的自制品种,该制剂由血竭、鹿茸、乳香(制)、没药(制)、骨碎补、鹿角霜、鸡血藤等中药组成,具有活血祛瘀、舒筋通络、补益肝肾、接骨续筋的功效,临床用于跌打损伤、外伤骨折。WWW.11665.COm为保证本品疗效,有效控制其质量,我们对其质量标准进行了研究,建立了该制剂中血竭素的高效液相色谱测定法。
1 仪器与试药
岛津lc-at高效液相色谱仪,spd-10a型控制器,紫外检测器,n-2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。十万分之一电子分析天平(梅特勒公司提供),超声波处理器(上海必能信仪器有限公司提供)。色谱柱：kromasil c18(4.6 mm×25 mm,5 μm)。
舒筋接骨片(批准文号：鲁药制字z0720030113,潍坊市中医院制剂中心提供,批号20061201,20061203,20070101, 20070301,20070501)；血竭、鹿茸、乳香(制)、没药(制)、骨碎补、鹿角霜、鸡血藤等中药购于潍坊海王中药饮片有限公司；对照品：血竭素高氯酸盐购于中国药品生物制品检定所(批号110811-200203)；所用试剂为色谱纯或分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
参考2005年版《中华人民共和国药典》(一部)血竭项下含量测定的条件和其他资料中的条件,血竭素的测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱。以440 nm作为检测波长,柱温40 ℃[1-3]。以乙腈-0.1%磷酸(25：75)为流动相；理论塔板数按血竭素峰计算应不低于4 000。
2.2 线性关系的考察
精密称取血竭素高氯酸盐对照品2.11 mg,置10 ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液溶解,并稀释至刻度,摇匀,吸取上述对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml,置于10 ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液至刻度,摇匀。分别吸取不同浓度的对照品溶液,注入液相色谱仪,如法测定。以对照品浓度对峰面积进行线性回归,得回归方程：y＝53 682.9x-683.1,r＝0.999 9。
2.3 空白对照试验
供试品溶液的制备：取本品5片(批号20061201),研细,取0.5 g,置具塞锥形瓶中,精密加入3%磷酸甲醇溶液50 ml,称重,超声处理5 min,称重,加3%磷酸甲醇溶液补充减失的重量,摇匀,滤过,续滤液置于棕色瓶中,即得。
对照品溶液的制备：精密称取血竭素高氯酸盐对照品1.55 mg,置10 ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸取1 ml,置25 ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液稀释至刻度,混匀,即得(血竭素＝血竭素高氯酸盐/1.377)。
阴性对照溶液的制备：取阴性对照品(缺血竭),同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。
吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μl,分别注入液相色谱仪,按确定的方法检测。结果供试品溶液在与对照品相同的保留时间处有相同的血竭素峰,而阴性对照品没有,说明测定的专属性好。色谱图见图1。
2.4 精密度试验
吸取对照品溶液20 μl,如法连续测定5次,测得峰面积,结果rsd＝0.31%,说明此法测定的精密度较高。
2.5 稳定性试验
取供试品(批号20061201)溶液,每隔2～4 h测定1次,共测定5次,结果供试品溶液在12 h内稳定性较好,rsd＝0.60%。
2.6 重复性试验
取本品(批号20061203),按确定的方法测定血竭素的含量,共测定5次,结果血竭素的平均含量为0.371 2 mg/g,rsd＝1.8%,证明本法测定的重复性好,变异系数小,符合含量测定的要求。
2.7 加样回收率试验
为了观察测定方法能否准确的测定出制剂中血竭素的含量,按确定的方法测定了样品中血竭素的含量,进行加样回收率试验。称取已知含量的制剂(批号20061202, 0.370 4 mg/g),研细,取约0.5 g,精密称定,共6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液(0.050 6 mg/ml)5.0 ml、3%磷酸甲醇溶液45 ml,如法测定,计算血竭素的回收率,结果见表1。可知本测定方法的回收率高,符合含量测定的要求。表1 加样回收率试验结果（略）
2.8 样品的测定
取本品3批,每批样品取3份,分别按上述方法制得供试品溶液,按确定的方法测定样品中血竭素的含量,结果见表2。表2 样品中血竭素含量测定结果(略)
3 讨论
在流动相的选择过程中,首先试验了2005年版《中华人民共和国药典》(一部)血竭项下含量测定所用的流动相系统：乙腈-0.2%磷酸二氢钠溶液(50∶50),又试验了文献中报道的流动相系统：乙腈-0.1%磷酸(25∶75)。结果乙腈-0.1%磷酸(25∶75)为流动相较以乙腈-0.2%磷酸二氢钠溶液(50∶50)为流动相,血竭素保留时间短且峰形较好,有利于缩短检测时间。
据文献报道,纯血竭素性质极不稳定[4],中药血竭存在对热不稳定性[5],不同的温度对其稳定性影响程度不同,温度在70 ℃以下时对血竭素含量几乎无影响,稳定性较好；而在70 ℃以上时则随温度升高血竭素含量下降明显加快。故本制剂供试品溶液的制备采用超声提取的方法。本试验研究了不同超声处理时间对提取结果的影响,结果超声处理10 min,血竭素即可较好提取。
本研究制定的含量测定方法简便、可行、结果可靠,可作为控制该制剂质量的方法。
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