作者：蒙麦侠,杨智峰,杨瑞瑞,郑洁
【摘要】 目的 优选肠腑康胶囊a的提取工艺。方法 建立高效液相色谱法测定橙皮苷含量的方法,以干膏率、橙皮苷含量为考察指标,采用l9(34)正交试验优选提取工艺。结果 最佳提取工艺为加8倍量水,回流提取3次,每次1.5 h。结论 优化的提取工艺稳定、可行。
【关键词】 肠腑康胶囊a；正交试验；高效液相色谱法；干膏率；橙皮苷
abstract：objective to optimize the extraction technique of changfukang a capsule. methods a rp-hplc method for hesperidin was established. with the water extraction rate and hesperidin as the parameters, the extract condition of changfukang a capsule was optimized by orthogonal design. results the optimized extraction technique was as follows：the medicinal material was extracted for 3 times with total 8 times of water, 1.5 hours for each time. conclusion the optimal preparation prosess was validated to be stable and feasible.
key words：changfukang a capsule；orthogonal test；hplc；extraction rate；hesperidin
肠腑康胶囊a是由黄芪、党参、炒白术、陈皮、木香、茯苓、炒山楂、干姜、甘草等中药提取精制而成,具有益气健脾、止泻解毒的功效。WWW.11665.Com用于治疗脾虚气滞型溃疡性结肠炎、结肠炎之腹痛、腹泻、黏液便或脓血便者[1]。本试验在提取溶剂不变的条件下,以干膏率及橙皮苷含量为指标,采用正交设计法对肠腑康a胶囊的水提取工艺条件进行优选。
1 仪器与试药
日本岛津lc-2010型高效液相色谱仪；class-vp色谱数据工作站。橙皮苷(中国药品生物制品检定所,批号110721- 200613)；甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 橙皮苷的含量测定方法
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取橙皮苷对照品2.85 mg,置于25 ml量瓶中,加甲醇适量,超声2 min使溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。精密量取该储备液2 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,作为对照品溶液(0.022 8 mg/ml)。
2.1.2 供试品溶液的制备
按照处方量称取黄芪、党参、炒白术、甘草、木香、陈皮、茯苓、炒山楂、干姜等中药,置回流提取器中,按l9(34)正交表安排试验,回流提取,提取液过滤,合并,浓缩至稠膏,置烘箱中80 ℃干燥。精密称取干燥品约0.5 g,精密称定,加20 ml甲醇超声提取20 min,过滤并定容于25 ml 量瓶中,0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。
2.1.3 阴性样品溶液的制备
除陈皮外,取处方量的黄芪、党参、炒白术、木香等其他药味,加8倍量水回流提取3次,每次1.5 h,合并滤液,浓缩,干燥。按“2.1.2”项制备方法制备。
2.1.4 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：lichrosper c18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)；检测波长：283 nm。进样量：10 μl；柱温：40 ℃；流速：1.0 ml/min。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000[2-3]。在该色谱条件下,所用中药中的其他成分对橙皮苷的测定无干扰。色谱图见图1。
2.1.5 方法学考察
橙皮苷含量测定的线性回归方程为：y＝1 803 443x－159 19(r＝0.999 6),线性范围为：0.165 6～4.968 μg,精密度试验rsd＝0.614%,稳定性试验rsd＝0.825%,重复性试验rsd＝0.40%,加样回收率试验的平均回收率为99.91%,rsd＝1.56%(n＝6)。
2.1.6 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,以外标法计算含量,即得。
2.2 干膏率的测定
精密量取“2.1.2”项下提取液250 ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105 ℃干燥3 h,置干燥器中冷却30 min,迅速精密称定重量,计算干膏率。干膏率(%)＝wv/250 w0×100%(w为250 ml药液的干膏重量；v为提取液的体积；w0为药材重量)[4]。
2.3 提取工艺的正交设计
采用l9(34)正交表,以干膏率、橙皮苷的提取量为指标,以加水量、煎煮次数、煎煮时间为因素,每个因素取三水平进行考察,通过正交试验确定最佳工艺条件。正交试验因素水平见表1。表1 正交试验因素水平表（略）
2.4 正交试验结果及方差分析
照1～9号试验条件及供试品溶液的制备方法制备样品,测定提取液中橙皮苷含量及干膏率,结果见表2。方差分析结果见表3。表2 正交试验结果（略）注：采用综合评分进行数据分析,浸膏得率、橙皮苷含量权重系数分别 为0.6、0.4表3 方差分析表（略）注：f0.05(2.2)＝19.0
以干膏率、橙皮苷含量为考察指标,经正交试验,根据直观分析及方差分析,由表2结果可以看出,各因素对试验结果重要性为b＞a＞c,且a1和a2、c2和c3差别不大；表3的方差分析结果表明,仅煎煮次数对试验结果的影响有统计学意义。参考经济省时原则,综合考虑,得出最佳工艺为a2b1c2,既处方量药材用8倍量水,回流提取3次,时间为1.5 h。
2.5 验证试验
按处方比例称取药材3份,按优选工艺条件进行重复验证试验,结果表明,正交试验优选的工艺条件较好,结果稳定可行、可靠,见表4。表4 验证试验结果（略）
3 讨论
根据国家食品药品监督管理局对中药新药开发的要求,提取工艺考察含量测定指标应为君药有效成分的含量测定,即黄芪甲苷或黄芪多糖,但研究发现,黄芪甲苷在本制剂中消失而检不出,经分析可能是方中药味之间发生相互反应,具体原因正在研究；黄芪多糖在目前技术水平条件下检测技术不够成熟。处方中陈皮药效研究较清楚,易检测,故选择橙皮苷含量作为工艺考察指标。
根据肠腑康胶囊a处方中各味药如黄芪、党参、白术等的中药化学和中药药理研究结果,肠腑康胶囊a的有效成分多为水溶性成分,故确定干膏率在方差分析时占权重系数较大。
本试验结果表明,所选择的3个因素对提取工艺有不同的影响,其中提取次数影响较为显著,加水量及提取时间对提取无显著影响,为了节时及节能,选择用8倍量水、回流提取3次,每次1.5 h。
【参考文献】
[1] 张小丽,杨智峰,惠爱武,等.肠腑康胶囊镇痛抗炎及抗溃疡性结肠炎作用的实验研究[j].西北药学杂志,2007,22(6)：313－315.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.132.
[3] 石 妍,李红玉,于德才,等.hplc测定维血康片中橙皮苷的含量[j].中国现代应用药学杂志,2008,25(2)：139－141.
[4] 钟华林.正交设计优选痛经丸提取工艺条件的研究[j].中成药,2008, 30(5)：773－774.
