作者：李萍,高松,陈玉杰,高姗
【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸含量的方法。方法 色谱柱为ymc公司ods-a柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90),流速为1.0 ml/min,检测波长为327 nm。结果 绿原酸的检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r＝0.999 9)；平均回收率为102.60%,rsd＝1.69%(n＝6)。结论 本法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。
【关键词】 热毒平颗粒；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
abstract：objective to establish an hplc method for the determination of chlorogenic acid in reduping keli. methods the determination was performed by hplc using an ymc ods-a column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2%h3po4 solution (10∶90) at a flow rate of 1.0 ml/min and a detection wavelength of 327 nm. results the calibration curve for chlorogenic acid was linear in the concentration range of 0.008 5～0.084 8 mg/ml (r＝0.999 9). the average recovery was 102.60 % (rsd＝1.69%, n＝6). conclusion the method is simple, rapid and applicable for the quality control of reduping keli.
key words：reduping keli；chlorogenic acid；hplc；content determination
热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,具有清热解毒之功效,用于治疗流感、上呼吸道感染及各种发热等症[1]。wwW.11665.coM绿原酸为该制剂主药金银花的主要有效成分,具有明显的抗炎、杀菌、抗病毒的作用[2]。笔者采用高效液相色谱(hplc)法测定该制剂中绿原酸的含量,方法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。
1 仪器与试药
sp8800高效液相色谱仪(美国光谱物理公司)；分析之星色谱工作站；紫外focus检测器。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110753-200413)；热毒平颗粒(天津中新药业隆顺榕制药厂,批号0602001、0602002、0602003)。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：ymc公司ods-a柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90)；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：327 nm；进样量：10 μl。理论板数按绿原酸峰计应不低于3 000,分离度＞1.5。色谱图见图1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品4.24 mg,置于50 ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.084 8 mg/ml的对照品储备溶液,10 ℃以下保存。再精密量取4 ml置10 ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,制成含绿原酸0.033 9 mg/ml的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品7 g,精密称定,研细,混匀,取约0.5 g,精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 ml,称定重量,密塞,超声处理(功率250 w,频率33 khz) 30 min,放冷,再称定重量,用50 %甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按“2.2.2”项下方法,制得阴性对照溶液。
2.3 标准曲线的建立
精密吸取绿原酸浓度为0.084 8 mg/ml的对照品储备溶液1、2、4、8、10 ml,置10 ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：y＝55 799 416x－28 478.3(r＝0.999 9)。结果表明,绿原酸检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积。结果rsd＝0.52%,表明本方法精密度良好。
2.5 稳定性试验
取同一批号(0602001)样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件分别在0、1、2、4、6、8 h进样,测定绿原酸峰面积。结果rsd＝0.64%,表明供试品溶液在8 h之内稳定。
2.6 重复性试验
取同一批号(0602001)样品精密称取0.5 g,共6份,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份样品中绿原酸含量。结果绿原酸的平均含量为1.190 mg/g, rsd＝0.88%,表明方法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取绿原酸对照品适量,配制成0.012 4 mg/ml的对照品储备溶液,取同一批号(0602001)样品,研细,混匀,取0.25 g,精密称定,共6份,精密加入绿原酸对照品储备溶液各25 ml,按照“2.2.2”项下方法制得供回收率用供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果平均回收率为102.60%, rsd＝1.69%。结果见表1。表1 加样回收率试验结果(略)
2.8 样品含量测定
取本品3批,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2 样品中绿原酸含量测定结果(略)
3 讨论
取绿原酸对照品的甲醇溶液,在190～650 nm波长范围进行扫描,在327 nm波长处有较大吸收,与2005年版《中华人民共和国药典》中金银花的测定波长一致,故测定波长选定为327 nm。
以多种比例乙腈-0.2%磷酸溶液(15∶85、13∶87、10∶90)试验选择流动相[3-5],当比例为10∶90时,绿原酸峰分离度大于1.5,保留时间为6.967 min,主峰与杂质峰分离良好,同时无干扰峰,基线平直。
【参考文献】
[1] ws3-b-3965-98,中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第22册)[s].
[2] 毕跃峰,田 野,裴姗姗,等.金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究[j].中草药,2008,39(1)：18－21.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：化学工业出版社,2005.153.
[4] 刘 冰,王蓉华,徐永波.hplc法同时测定银黄胶囊中绿原酸、黄芩苷含量[j].中国药事,2006,20(5)：303.
[5] 孟品佳,孙毓庆.高效液相色谱法分离金银花成份及测定绿原酸含量[j].药物分析杂志,1990,10(1)：58.
