作者：刘萍，黄川锋，李玲，阮耀

【摘要】  目的研究附子配伍贝母对大鼠心、肝、肾功能和形态学的影响。方法取健康sd大鼠40只随机分为正常组(a组)、附子组(b组)、贝母组(c组)、附子与贝母合用组(d组)，每组10只。各组每日分别按2.5 g/kg灌胃给予生理盐水、附子煎液、贝母煎液、附子与贝母混合煎液，给药组浓度均为200 g/l。第14天停药，称重，采集心脏、肝脏及肾脏标本，计算体质量增长率及心、肝、肾脏指数并观察其形态学改变;心脏取血，测定各组血清ldh，ck，ast，alt，bun，cr含量。结果 体重增长率、肝脏指数各组间均无显著差异;心脏指数d组比a、b、c组有显著升高，肾脏指数d组比c组有显著升高;形态学方面各给药组心肌、肝脏、肾脏均可见不同程度的损伤;ast、alt的变化各组间无显著性差异，和a组相比，各组ldh明显升高，b组、d组bun、cr明显升高(p<0.05或p<0.01)。结论 给药剂量为2.5 g/kg时，单用附子、贝母对大鼠均有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性;附子与贝母配伍用药后对大鼠心、肝、肾脏毒性较单用组明显提高。

【关键词】  附子; 贝母; 中药; 十八反; 毒理学

“十八反”是中药药性理论的重要组成部分，是中医界沿袭数千年的用药禁忌，为历代医家所推崇，目前仍被《中国药典》和各类教科书所遵循。wWw.11665.cOM但近年也有学者报道，部分相反、相畏中药在临床实践中使用后并未发现明显毒副作用，反而有相反相成的作用。因此，“十八反”也是现代药性理论研究争议的焦点问题。目前关于半蒌贝蔹及攻乌的研究较多[1～4]。附子(radix aconiti lateralis preparata)为毛莨科植物乌头(aconitum carmchaeli debx)的子根加工品，朱林平[5]认为附子与乌头同出一源，故其也不宜与此5味药物配伍。

　　本实验通过观察附子与贝母(fritillary)单用及配伍应用后大鼠体重增长率的变化、心、肝、肾脏器指数及形态学改变，检测心肌酶谱、肝功能、肾功能部分生化指标，从而对附子与贝母配伍是否具有毒性及毒性作用的靶器官进行探讨。

　　1 材料

　　1.1 动物健康雄性sd大鼠，spf级，体质量180～200 g，购自华中科技大学同济医学院实验动物学部，合格证号scxk(鄂)2004-0007。

　　1.2 仪器及设备bm-ⅷ生物组织包埋机、冷冻台(孝感市宏业医用仪器有限公司);dmr+q550型病理图像分析仪(德国leica公司);日本olympus万能显微镜;日立7179全自动生化分析仪。

　　1.3 药物白附片、贝母，购自河南省宛西制药股份有限公司仲景大药房，由南阳医学高等专科学校生药学袁国卿副教授鉴定。附子单煎40 min，贝母单煎20 min，附子与贝母配伍用药时先将白附片煎20 min后加入贝母合煎20 min。药物浓度均为200 g/l，晾凉后置于冰箱冷藏室中备用。

　　1.4 试剂ldh(乳酸脱氢酶，批号：071121)、ck(肌酸激酶，批号：080391)、alt(丙氨酰氨基转移酶，批号：080375)、ast(天门冬氨酸氨基转移酶，批号：080381)、bun(血清尿素氮，批号：071275)及cr(血肌酐，批号：080375)，均为中生北控生物科技股份有限公司生产。

　　2 方法

　　2.1 分组取sd大鼠40只，随机分为正常对照组(a组)、附子组(b组)、贝母组(c组)、附子与贝母合用组(d组)，每组10只，称重，标记。各组每日分别用灌胃法给予2.5 g/kg生理盐水、附子煎液、贝母煎液及附子与贝母混合煎液，各给药组浓度均为200 g/l。于4，8，12 d各称重一次并调整给药剂量。第14天停药，禁食不禁水12 h后，称重，用100 g/l的水合氯醛麻醉后，解剖、暴露出心脏，自左心室取血5 ml制备血清，测定各组血清ldh，ck，ast，alt，bun，cr含量;分离心脏、肝脏及肾脏，用生理盐水冲洗后称重，用中性缓冲福尔马林溶液固定，通过脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、脱蜡he染色、脱水透明、封固，于光学显微镜下观察形态学改变。

　　2.2 统计方法实验数据采用spss13.0统计软件分析处理，结果以±s表示，组间比较采用f检验进行整体方差分析，方差齐者用q检验，方差不齐者用秩和检验，p<0.05有显著性差异，p<0.01有极显著性差异。

　　3 结果

　　3.1 体质量及脏器指数(见表1)从表1可见，体质量增长率、肝脏指数各间均无显著差异(p>0.05)，d组心脏指数显著高于b、c组(p<0.01)，d组肾脏指数明显高于c组(p<0.05)。

　　表1 各组体质量增长率及心、肝、肾脏指数(±s)

　　3.2 形态学观察

　　3.2.1 心肌形态学见图1。对照组结构正常;附子组心肌间隙明显宽大，肌束细长，肌纤维粗细不等，少许区域肌浆有融合现象，间质中可见个别炎细胞浸润;贝母组心肌纤维之间间隙明显扩大，肌丝粗细不等，肌浆融合，间质出血，炎细胞浸润明显;附子+贝母组心肌肌束断裂，肌纤维结构消失，部分肌纤维融合，胞浆同质状，周边部蛋白液渗出，炎细胞浸润明显。

　　图1 各组心肌形态学改变(he，400×)

　　3.2.2 肝脏形态学见图2。对照组结构正常;附子组肝小叶结构略显紊乱，肝索上细胞排列不规则，可见较多慢性炎症细胞浸润，肝细胞水肿，细胞核大深染，可见双核;贝母组汇管区可见大量炎细胞浸润，部分肝细胞变性;附子+贝母组大部分小叶结构正常，可见2～3个细胞体积大，核大深染，并可见双核肝细胞。

　　3.2.3 肾脏形态学 见图3。对照组结构正常;附子组肾近曲小管上皮细胞水肿，界限不清，小血管扩张充血，间质可见蛋白样水肿液，间质炎细胞浸润明显;贝母组肾小球数目减少，管腔扭曲不规则，间质灶性纤维化，结构紊乱，炎细胞浸润明显;附子+贝母组肾小管明显扩张，中央视野可见肾小球玻璃样变性，内有出血，周边部可见少许内皮细胞，间质炎细胞浸润明显。

　　图2 各组肝脏形态学改变(he，400×)

　　3.3 生化指标结果见表2。与对照组相比，附子组ldh，bun，cr明显升高(p<0.05或p<0.01)。附子、贝母合用组与附子、贝母单用组相比，各检测指标与相应的比较组间均无明显差异(p>0.05)。

　　4 结论与讨论

　　脏器指数是反映药物对脏器影响，尤其是毒性的重要指标，测量脏器指数旨在从大体上寻求药物是否对心、肝、肾等重要器官有损伤。脏器指数增加表示脏器有充血、水肿、增生、肥大等变化，脏器指数下降则表示脏器有萎缩、退行性变化等[6]。生化检测选取ldh，ck，ast，alt，bun及cr为检测项目，与大体标本形态学及显微镜下形态结构的变化相互印证，寻找药物毒性作用的靶器官。ldh、ck活性常用来反映心肌受损的程度。alt为肝细胞损伤的灵敏指标，ast升高可提示心脏或肝脏受损。尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一，测定血液尿素的含量可以了解机体肾功能的状况，因1个尿素分子含有2个氮原子，可用bun(血清尿素氮)表示尿素含量。cr是肌酸代谢的终产物，由肾脏排出，它从肾小球滤过后不被肾小管再吸收，也不再分泌，其排出量较为恒定，不受食物中蛋白质含量的影响，测定血中cr的含量能较准确的反映肾脏的排泄功能。血清bun及cr升高提示肾脏的排泄功能减退[7]。

　　本实验中附子组大鼠体质量增长率、脏器指数与对照组比较未发现显著性差异。镜下可见附子组心肌有明显病变，加之ldh活性升高，说明有心肌损伤;肝脏病理改变提示肝细胞有再生现象，但alt、ast检测值与对照组相比无显著性差异，当肝炎损伤进入修复阶段时，即使尚残存较明显的肝脏病变，alt及ast可正常[8]，因此可解释为本实验在第14天进行检测时附子造成的肝脏急性损伤还未修复，而生化检测值已恢复正常;肾脏损伤病理改变明显，加之bun和cr含量与对照组相比升高较明显，与病理变化具一致性。本实验结果可推测，附子单用有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性，与向丽华等[6]报道一致。

　　图3 各组肾脏的形态学改变(he，400×)

　　本实验中贝母单用时大鼠体质量增长率、脏器指数与对照组比较未发现显著性差异。ldh活性与对照组相比明显升高，其他生化指标变化均不明显。但形态学观察发现心肌、肝脏、肾脏均有明显病理改变，据此可推测贝母组也有一定的心、肝及肾脏毒性。关于贝母毒理研究相对较少，检索文献仅见毒性实验研究，对其毒性机制的研究未见报道[9，10]，有待于进一步探讨。

　　表2 各组血清生化指标(±s)

　　附子与贝母合用组大鼠体质量增长率、肝脏指数与对照组比较未发现显著性差异，心脏指数较其他3组均有显著性提高，与镜下观察到心肌形态学改变一致，且ldh活性较对照组升高，可相互印证;虽alt及ast活性无变化，但形态学观察可提示有肝细胞有再生现象;肾脏指数较贝母单用有显著性差异，肾脏形态学观察病理改变明显，bun及cr含量较对照组明显升高，但与两药单用组差别不明显。因此附子、贝母配伍应用后心、肝、肾毒性较单用毒性明显提高。其机制可能与二药合煎后毒性成分乌头碱、次乌头以及新乌头碱的含量显著提高有关[11，12]，有待于进一步探讨。

【参考文献】
  　[1] 肖成荣，陈 鹏，王宇光，等.半蒌贝蔹及配伍乌头对大鼠肝细胞色素p450酶含量的影响[j].天津中医药，2004,4:68.

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　　[3] 杨 庆,聂淑琴,翁小刚,等.乌头、贝母单用及配伍应用体内、外抗肿瘤作用的实验研究[j].中国实验方剂学杂志,2005,11(4):25.

　　[4] 肖志杰,黄 华,曾春华,等.附子配贝母对大鼠心功能的影响[j].江西中医学院学报,2005，17(2): 50.

　　[5] 朱林平.附子毒性研究概况[j].江西中医药，2004，35(6)：53.

　　[6] 向丽华,陈燕萍,张 智，等.24味有毒中药长期毒性实验对大鼠脏器指数的影响[j].中国中医基础医学杂志,2006,12(1)：35.

　　[7] 沈岳奋.生物化学检验技术[m].北京:人民卫生出版社,2008：117.

　　[8] 骆抗先.乙型肝炎基础和临床[m].北京:人民卫生出版社,2003:365.

　　[9] 莫正纪,唐心耀,孙 中，等.引种栽培瓦布贝母、浓蜜贝母与野生川松贝母的药理作用比较研究[j] .中国中药杂志,1998,23(1):14.

　　[10] 苗明三,朱飞鹏,朱平生.实用中药毒理学[m].第二军医大学出版社,2007:505.

　　[11] 边宝林,司 南,王宏洁,等.附子单煎以及与浙贝母合煎后乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等有毒成分的含量变化研究[j].中国实验方剂学杂志,2006,12(4):9.

　　[12] 翁小刚,聂淑琴,黄璐琦.hplc测“半蒌贝蔹及攻乌”中乌头与其它诸药合煎前后次乌头碱的含量变化[j].中国药学杂志,2004,39(1):57.