作者：高言明，贾宪生，杨玉琴，李健，张丽艳，何平，李荣宇
【摘要】 目的考察益母草野生品和栽培品中水苏碱的含量，为人工种植益母草提供依据。方法采用薄层扫描法进行测定。结果栽培品中水苏碱含量普遍比野生品中的水苏碱含量高。结论益母草栽培品比野生品质量好。
【关键词】 益母草；盐酸水苏碱；薄层扫描
益母草来源于唇形科植物益母草leonurus japonicus houtt.的新鲜或干燥的地上部分，为妇科经产要药［1，2］。为考察黔产益母草野生品和栽培品的质量，本实验通过测定益母草中主要有效成分盐酸水苏碱的含量对益母草野生品和栽培品的质量进行比较，为人工种植益母草提供依据，达到提高益母草药材质量的目的。
1 仪器与试药
cs-9301pc双波长飞点层析扫描仪（日本岛津公司）；camag linomat v半自动点样仪（瑞士卡马公司）；定量毛细管（美国microcaps公司）；xs205双量程电子分析天平， 量程：万分之一和十万分之一两档（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；硅胶g板（青岛海洋化工厂）。WwW.11665.Com盐酸水苏碱对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110712-200407；其他化学试剂均为分析纯；药材红花益母草leonurus japonicus houtt. 和白花益母草leonurus sibiricus分别采自贵州省惠水、大方县和贵阳市郊乌当，药材样品均经贵阳中医学院魏升华讲师鉴定。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液和对照品溶液的制备
精密称取干燥益母草样品粉末约1 g，置圆底烧瓶中，加入乙醇约50 ml，加热回流1.5 h，放冷，滤过，滤渣及回流容器用乙醇50 ml分次洗涤，合并滤液和洗液，蒸干，残渣用乙醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心（5000 r/min，5 min），取上清液作为供试品溶液。精密称取在105°干燥3 h的盐酸水苏碱对照品适量，加乙醇制成每毫升含2.030 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2 薄层色谱分析条件［3,4］
用硅胶g薄层板，点状点样，点样量10 μl。以正丁醇-盐酸-醋酸乙酯(8∶3∶1)为展开剂，展开，取出晾干后，在 105℃加热15 min，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-1％三氯化铁乙醇溶液(10∶1)混合溶液至斑点显色清晰，晾干，立即在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布密封。反射法单波长锯齿形扫描。波长λs=510 nm，狭缝0.4 mm×0.4 mm。在上述分析条件下对薄层色谱进行扫描分析。结果见图1～2。
2.3 线性关系的考察
用半自动点样仪在同一硅胶g薄层板上点盐酸水苏碱对照溶液2，4，6，8，10，12，14 μl，用上述条件展开显色后进行薄层扫描测定，以点样量（μg）为横坐标，峰面积（a）为纵坐标，求出回归方程为：y= 185.75x - 411.09，r=0.996，表明盐酸水苏碱在4.06～28.42 μg范围内线性关系良好。由于直线不通过原点，因此用外标两点法计算含量。
2.4 稳定性考察
在同一块薄层板上分别点8 μl样品溶液和10 μl对照品溶液，依上述色谱条件和扫描条件操作，分别在0，0.5，1，1.5，2 h扫描测定盐酸水苏碱峰面积，结果峰面积的rsd为0.38%，表明盐酸水苏碱在本实验条件下2 h内稳定。
2.5 同板精密度实验在同一薄层板上点供试品溶液5个点，每个点10μl，并以盐酸水苏碱对照品溶液3，8 μl作为随行标准，按上述分析条件对每个斑点分析测定，以峰面积计算，rsd为1.00%，表明同板精密度良好。
2.6 异板精密度实验
在5块薄层板上，分别点供试品溶液5个点，每个点10 μl，并以盐酸水苏碱对照品溶液3μl和8μl作为随行标准，分别扫描测定其峰面积，按上述分析条件测定，以峰面积计算，rsd为1.90%，表明异板精密度良好。
2.7 重复性实验
分别称取同一批益母草药材5份，按“2.1”和“2.2”项操作，按上述条件分析测定盐酸水苏碱，得平均含量为1.09%，rsd为2.52%。
2.8 加样回收率实验
精密称取盐酸水苏碱平均含量为1.09%的益母草药材5份，每份约0.5 g，精密加入盐酸水苏碱对照品5.00 mg，同时加入约50 ml乙醇回流提取，按“2.1”项方法进行供试品溶液的制备，按“2.2”项进行展开和扫描测定，计算回收率。结果见表1。表1 回收率实验（略）
2.9 样品测定
按上述分析条件对不同品种和不同生长条件的益母草中盐酸水苏碱的含量进行分析。结果见表2。表2 不同品种和不同生长条件的益母草中盐酸水苏碱的含量
（略）
3 讨论
表2中益母草开花前后其主要有效成分盐酸水苏碱含量相差较大，这也验证了童子益母草的质量高于非童子益母草的说法，同时也说明益母草的采收应在开花前较好。
益母草分白花和红花两个种，开花前两者不易分辨，如采收野生童子益母草往往是两者的混品，而两者的内在质量是否相同是值得研究的一个问题。如果采用人工栽培，可根据需要进行分别种植，质量也就可以得到控制。
本实验人工种植的益母草采用在多年栽种蔬菜的农田中进行栽种，土壤肥力往往比荒野土壤好，所以其中盐酸水苏碱的含量也相对较高。表2中编号为050724的白花益母草是在野外环境较湿润的腐质土上播撒白花益母草种子后任其生长，其中盐酸水苏碱的含量也较高，说明益母草中主要有效成分盐酸水苏碱的含量主要与其生长环境的土壤肥力有很大关系，如果采用人工种植，应选用肥力较好的土壤或注意施肥，益母草的质量才能得到保证。
在实验过程中，发现对展开后的薄层板于喷显色剂前在105℃温度下烘烤时间控制较重要，当烘烤时间大于或小于15 min时，喷显色剂后斑点显色均不及15 min清晰，因此建议使用本实验采用的方法时，要注意掌握烘烤时间。
经实验证明，本文采用的展开系统分离度好，斑点清晰，方法简便，且含量测定结果稳定可靠。
【参考文献】
1］范美华，王健鑫，李 鹏，等.益母草的研究进展［j］.中药药物与临床，2006，6（7）：528.
［2］张娴，彭国平.益母草属化学成分研究进展［j］.天然产物研究与开发，2003，15（2）：162.
［3］金阳. tlcs法测定复方益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量［j］.现代中药研究与实践，2005，19（6）：53.
［4］国家药典委员会．中国药典，ⅰ部［s］．北京：化学工业出版社，2005：203.
