作者：张生枝，钟星明， 黄虎龙， 陈洁玲， 冒宸， 叶丽娟， 曾靖
【摘要】 目的研究大豆苷元（dd）对离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法应用大鼠离体心肌缺血再灌注损伤模型，在灌流液中加入高、低剂量的大豆苷元。测定冠脉流量、心率、左心室收缩压、左心室内压最大变化速率及心肌组织乳酸脱氢酶(ldh)和心肌肌酸激酶（ck）活性的变化。结果与溶剂组比较，大豆苷元能使左心室收缩压升高、左心室内压最大变化速率增大；能使心肌ldh及ck的活性升高；冠脉流量、心率未见明显变化。结论大豆苷元可通过增大左心室内压最大变化速率、增强心肌收缩力及减少心肌酶的释放对离体心脏缺血再灌注损伤起保护作用。
【关键词】 大豆苷元； 缺血再灌注损伤
abstract:objectiveto explore the therapeutic effects of daidzein (dd) on isolated myocardial ischemia/reperfusion injury.methodsa rat myocardial ischemia/reperfusion injury model was made and was treated with dd (high dose and low dose). the changes of coronary artery blood flow levels, heart rate, and left ventricular systolic pressure, as well as the activities of lactate dehydrogenase (ldh) and creatine kinase (ck) were investigated. resultscompared with the dmso group ,after treatment, the isolated myocardial tissue showed that the left ventricular systolic pressure, the left ventricular diastolic pressure's changing speed increased, as well as enzymatic activities of ldh and ck in myocardial tissue increased. the coronary artery blood flow levels and the heart rates showed no obvious change. conclusiondd has therapeutic effect on myocardial ischemia/reperfusion injury because it dilates the enhances myocardial contractile force ,strongthen the the left ventricular diastolic pressure's changing speed and limits the release of ck and ldh.
key words:daudzein(dd)； myocardial ischemia/reperfusion injury
大豆苷元(daidzein，dd)系葛根中的主要成分之一，葛根的有效成分为大豆苷元、染料木苷、黄豆黄苷、染料木素、 黄豆黄素。WwW.11665.Com葛根素的临床应用非常广泛，对心脑血管疾病［1,2］、视网膜疾病［3］等具有良好疗效；大豆苷元也具有抗心律失常［4］、抑制胆囊收缩［5］、耐缺氧［6］、影响免疫器官［7］等作用。本实验通过langendorff心脏灌流装置研究dd对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。
1 材料与仪器
1.1 药物大豆苷元由沈阳药科大学植化教研室提供，纯度为98%，实验前用二甲基亚砜（dmso）溶解，使用时用k-h液稀释至所需浓度，ldh和ck检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.2 动物sd大鼠购自江西中医学院实验动物中心，体质量220～250 g，雌雄各半（动物中心许可证号：2005-0001，动物合格证号：jzdw2006-076，级别：清洁级）。
1.3 仪器心脏灌流装置，rm6240bd型多道生理信号采集处理系统，hss-1（b）型恒温裕槽及10kpa压力换能器，均购自成都仪器厂。
2 方法
2.1 心脏灌流及给药的方法健康sd大鼠24只，体质量220～250 g，随机分为4组，每组6只，分别为心脏缺血再灌注模型组，溶剂对照组(dmso)，dd高、低剂量组（0.3，0.1 μmol·l-1）。大鼠10％ 水合氯醛(3 ml/kg)腹腔麻醉后，开胸迅速取出心脏，置于4℃改良k-h液（每升含下列物质：氯化钠6.90 g，氯化钾0.35 g，硫酸镁0.30 g，碳酸氢钠2.10 g，磷酸二氢钾0.16 g，氯化钙0.28 g，葡萄糖2.0 g）中。迅速将主动脉套上langendorff心脏灌流装置，以37℃新鲜k-h液（充于95%o2 +5%co2饱和)逆行恒压(5.86 kpa)灌流心脏，左心室内置乳胶水囊和换能器相连，通过rm6240bd型生物信号采集处理系统(成都仪器厂)记录左心室内压的变化。心脏灌流20 min，待各项生理指标稳定后，停灌30 min，模型组用k-h液再灌注40 min；给药组用含不同浓度dd的k-h液再灌注40 min。各组在灌流过程中及灌流结束后测定以下指标。
2.2 灌流量、左心室内压、左心室内压最大变化速率的测定用生物信号采集处理系统记录并测定停灌前及再灌后第5，10，15，20，25，30 min各组心脏的心率（hr）、左心室收缩压（lvsp）、左心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)。用量筒测定同时间点各组的灌流量（ml·min-1）。每个样本以心脏停灌前各项指标为1，计算出各时段的心脏灌流量、hr、lvsp及±dp/dtmax与心脏停灌前的比值。
2.3 心肌组织生化指标测定心脏灌流结束后，将心肌组织制成10%的匀浆，于-80℃保存。按试剂盒说明，测定各组心肌组织乳酸脱氢酶(ldh)、心肌肌酸激酶(ck)活性。
2.4 统计学方法运用prism 4.0统计软件，对各剂量药物处理组与模型组之间进行单因素方差分析。
3 结果
3.1 dd 对心脏缺血再灌注时lvsp，±dp/dtmax的影响如图1～3所示，各剂量的dd均能在一定程度上增大lvsp和左心室内压最大变化速率。两种浓度的dd对灌流量及心率无明显影响。
3.2 dd对心脏缺血再灌注时心肌ldh的影响高、低剂量dd再灌注后，心肌ldh的活性较模型组均升高。结果见图4。
3.3 dd 对心脏缺血再灌注损伤时心肌ck的影响低剂量dd再灌注后，心肌ck的活性升高。结果见图5。
4 讨论
心脏疾病是目前危害人类健康的三大疾病之一。20世纪80年代以来，随着各种冠状动脉再通技术广泛应用于临床，心肌再灌注损伤(myocardial reperfusion injury；mri)越来越受到重视。心肌缺血再灌注导致的心肌可逆性或不可逆性损伤均造成心肌舒缩功能降低，表现为持久的心输出量减少，心室内压最大变化速率降低，再灌性心律失常、心肌内酶的外漏和冠脉流量减少等［8］。
本实验主要观察dd对离体心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的心率、左心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)、lvsp的变化以及对心肌酶的影响。实验结果表明，dd能通过升高lvsp, 增大左心室内压最大变化速率，能减少心肌ck和ldh酶的溢出，抑制心肌内酶的释放，从而保护缺血再灌注损伤的心肌。dd减少心肌ck和ldh酶的溢出, 这可能与稳定心肌细胞膜，增强心肌细胞对缺血及缺氧的耐受能力有关。目前认为心肌缺血再灌注损伤的机制主要与氧自由基的生成、钙超载和白细胞激活有关［9］。本课题组的前期研究表明，dd具有抗实验性心律失常、局麻、影响心房肌电生理特性、ca2+拮抗、耐缺氧、抗过氧化损伤等作用［10～15］。也有人报道dd具有抗氧化、扩血管等作用［16～18］。那么，dd是否能通过抗氧化作用保护缺血再灌注心肌，有待于进一步研究。
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